±托泊苷联合紫杉醇对前列腺癌细胞株生长的协同抑制作用

目的 研究单独或联合使用±托泊苷(ETOP)和紫杉醇(TAXOL)对前列腺癌细胞株生长和细胞凋亡的影响.方法 前列腺癌细胞株经过不同浓度的ETOP 和TAXOL 单独或联合用药处理后,用MTT 法检测细胞抑制率,荧光显微镜观察细胞染色质形态的改变,DNA 梯度定性检测细胞凋亡的变化.结果 单独利用ETOP 或TAXOL 和联合用药,均能抑制前列腺癌细胞生长,并呈浓度和时间±赖关系,其中联合用药组抑制率明显高于单独用药组(P<0.05).ETOP 、TAXOL 及联合用药组细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,细胞数目明显少于对照组,联合用药组细胞数目最少.ETOP、TAXOL 及联合用药组处理后的前列腺癌细胞的DNA,经琼脂糖凝胶电泳均出现典型"梯形"DNA 条带,联合用药组改变最明显.结论 ETOP 和TAXOL 均能够抑制前列腺癌细胞生长,联合用药能产生协同抑制作用.     

核受体Nurr1表达与鼻咽癌恶性演进的相关性研究

目的 探讨细胞核孤儿受体Nurr1的表达水平和亚细胞分布与鼻咽癌恶性演进的关系.方法 采用免疫组化法检测66例鼻咽癌组织和20例鼻咽炎性组织中Nurr1蛋白表达情况,分析其与鼻咽癌各临床特征的相关性;采用细胞体外运动实验系统观察siRNA干扰Nurr1表达对鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭和迁移能力的影响.结果 Nurr1在肿瘤组织的高表达和在细胞胞质错位分布与鼻咽癌的T分期、N分期及临床分期显著相关(P＜0.05);侵袭试验及迁移试验中干扰组的穿膜细胞数均明显少于空白对照组、阴性对照组(P均＜0.05).结论 Nurr1高表达和胞质分布与鼻咽癌的恶性演进显著相关,有可能成为鼻咽癌的肿瘤标志物和新的治疗分子靶点.     

加强病理生理学教学与临床学科联系的探索

在现有的条件下,通过加强教师临床实践、编写新的教学大纲、强化临床病例教学和拓宽学习渠道等加强病理生理学教学与临床知识的结合,有助于提高学生学习积极性、培养学生的临床思维能力.     

用染色体缓移法分析 5′端未知序列

随着分子生物学技术的不断发展，基因克隆的方法日新月异。文库筛选获得新序列虽直接可靠，但是工作量大，周期长，耗时耗材耗力，而且选择受限于已有文库，逐渐不作为首选方法采用。 PCR技术自 1985年发明以来，以其快速敏感的特点被广泛应用于基因的表达分析及检测；近年来，其应用范围被进一步拓宽到对未知片段的克隆和分析，其假阳性率高、错配率高等缺陷亦不断得到改进；新的聚合酶的发现，使扩增产物长度可达到 20 kb（ long-distance,LD PCR） [1， 2]。同时，网络资源的共享以及网上生物学软件的免费使用，也使 PCR引物的设计和选择更趋于精确，产物特异性进一步提高。 人鼻咽是位于颅底、咽后壁之间的立方体状结构，本实验室曾用新发展的 cDNA微阵列技术克隆到鼻咽特异性表达基因 YH1[3]。为了实现转基因在鼻咽的定向表达，须获得该基因的特异性调控区。本研究利用染色体缓移的方法， PCR扩增出 YH1基因的 5′端旁侧序列，并初步分析了其调控活性。 1 材料与方法 1． 1 试剂来源 实验中所用的 Human GenomeWalker kit， Advantage-GC Genomic PCR kit， Advantage PCR Cloning kit 等均购自 Clontech公司。 1． 2 染色体缓移 实验流程：分别用 5种限制性内切酶（ DraⅠ ,EcoRⅤ ,PvuⅡ ,ScaⅠ ,SspⅠ）酶切人基因组 DNA，得到五种基因组限制性酶切片段库在基因组限切片段的末端加上接头（内含引物序列）设计两组基因特异性引物，分别与接头中的引物配对，进行巢式 PCR反应凝胶电泳检测，回收特异性 PCR产物后亚克隆测序。     

Caspases与细胞凋亡研究进展

天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶（Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒｔａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，Ｃａｓｐａｓｅｓ）家族已发现１０个成员，它们在分子结构、作用底物和抑制物等方面各不相同。Ｃａｓｐａｓｅ介导细胞凋亡的信号传导，且与凋亡效应器细胞色素Ｃ，Ｂｃｌ２蛋白家族间相互作用，参与细胞凋亡的调控和执行阶段，是推动细胞凋亡进行的主要因素之一。     

病理生理学网络课程的构建和应用

通过对病理生理学的特点和教学现状进行分析,提出了病理生理学网络课程建设的设计思路和制作方法;同时介绍了该网络课程的特点。实践证明,病理生理学网络课程有利于提高学生自主获取知识及提高病理生理学的教学效果。     

川芎嗪醇质体贴剂的制备及体内外评价

目的通过不同膜材、处方和工艺的优选,研制具有良好透皮吸收性能、剂型稳定、包封率及释放度均性能良好的川芎嗪缓释皮肤贴片。方法采用乙醇注入超声法,以包封率为指标,制备川芎嗪醇质体。以丙烯酸树脂为主要组分,加入琥珀酸作为交联剂,柠檬酸三乙酯作为增塑剂,制备川芎嗪醇质体贴剂。然后进行体外释放度测定及体外透皮试验,考察其体外释药性能以及体外透皮率。最后进行大鼠的药动学试验,计算药动学参数,比较其相对生物利用度。结果川芎嗪醇质体处方为磷脂浓度为1%(w/v),胆固醇浓度为0.4%(w/v),乙醇含量为45%(v/v),超声时间为5min,制得的川芎嗪醇质体粒径分布均匀,平均粒径为(78.71±1.23)nm,平均包封率为(86.42±1.50)%。川芎嗪醇质体贴剂体外透皮试验结果显示24h药物累积透皮量达183±18μg.cm-2,其体外释放度曲线24h内符合Higuchi方程,具有缓释效果。药动学结果显示其相对生物利用度为209.45%,与其他两种制剂相比,川芎嗪醇质体贴片具有促进药物吸收、提高生物利用度的作用。结论川芎嗪醇质体贴剂透皮效果较好,并且达到缓释与提高生物利用度的目的 。     

川芎嗪醇质体贴片在大鼠体内的药动学以及抗心肌缺血与缺血后再灌注损伤的作用

目的研究川芎嗪醇质体贴片在大鼠体内的药动学以及抗心肌缺血与缺血后再灌注损伤的作用。方法在药动学实验中,雄性SD大鼠随机分为3组:川芎嗪灌胃给药组,川芎嗪醇质体贴片经皮给药组,川芎嗪常规贴片经皮给药组。给药后不同时间取血,并取出心、肝、脾、肺、肾、脑和肌肉等组织,采用HPLC检测药物浓度,计算药动学参数及各组织药物浓度-时间曲线下面积(AUC)值。另外,采用静脉注射垂体后叶素的方法构建大鼠急性心肌缺血的动物模型,采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法构建心肌缺血再灌注损伤模型,观察川芎嗪醇质体透皮贴片对缺血心肌以及心肌缺血后再灌注损伤的保护作用。结果与川芎嗪灌胃给药组和川芎嗪常规贴片经皮给药组相比,川芎嗪醇质体贴片经皮给药组各组织的AUC值最高。川芎嗪醇质体贴片组的全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞变形指数较缺血对照组差异有显著性(P<0.01)。另外,川芎嗪醇质体透皮贴片能显著缩小长时间缺血所引起的心肌梗死范围。结论川芎嗪醇质体透皮贴片具有缓释性,给药后能维持稳定、持久的血药浓度,提高生物利用度,减少给药次数。药物贴片组能降低心肌缺血大鼠血液流变学指标,对急性缺血心肌有保护作用,对缺血后再灌注损伤心肌也有一定保护作用。     

稳定表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1基因的鼻咽癌细胞系的建立

目的:建立稳定表达鼻咽癌(NPC)来源潜伏膜蛋白1(LMP1)的鼻咽癌细胞系。方法:利用基因重组技术构建NPC来源LMP1的一般性真核表达载体及上皮特异性表达载体,并将其转染鼻咽癌细胞系CNE-2,用PCR、RT-PCR及蛋白印迹等检测N-LMP1在CNE-2中的整合和表达。结果:①成功构建了N-LMP1的一般性和上皮特异性表达载体。②N-LMP1基因在CNE-2细胞中获得了正确表达。结论:成功建立了稳定表达NPC来源LMP1的鼻咽癌细胞系,为进一步研究LMP1在鼻咽癌细胞中的作用机制奠定基础。     

全反式维甲酸对CNE—2Z细胞增殖的影响及凋亡诱导

目的：了解全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖生长及凋亡有无影响。方法：采用ＭＴＴ法、细胞核染色、ＤＮＡ裂解率及电泳分析。结果：（１）用ＡＴＲＡ诱导细胞至７２ｈ，细胞增殖抑制率随浓度升高而增加。（２）在终浓度为５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞５天，可见部分细胞体积变小，核浓缩及核碎裂；ＤＮＡ裂解率（４４．２０±６．３２）明显高于对照组（１５．４１±５．５０），差别有显著性，Ｐ＜０．０１；ＤＮＡ琼脂糖电泳，出现不连续的典型梯状ＤＮＡ条带。片段大小为２００ｂｐ或其倍数。（３）在浓度为５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ诱导５天和５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导４天时，均无明显细胞凋亡出现。结论：ＡＴＲＡ对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖有抑制作用，且随浓度增加而增强；ＡＴＲＡ可诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞发生凋亡，但表现出明显的剂量和时间依赖性。