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2000年 | 5篇 |
1998年 | 1篇 |
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1.
3.
目的 采用基因表达连续分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)建立肝癌HepG2细胞标签文库.方法 提取肝癌HepG2细胞总RNA,分离纯化得到mRNA,利用改进后的M-MLV RTasecDNA合成试剂盒合成生物素标记的双链cDNA;得到全长cDNA后,根据SAGE技术流程后续步骤,建立肝癌HepG2细胞标签文库.结合GenBank、UniGene文库分析标签代表的转录本,最终通过SAGE软件分析标签丰度.结果 15 586个标签中有14 181个获得稳定有效的扩增,长度在200~3000 bp.将获得的长片段进行序列分析后,2023个特异基因被发现.结论 用改进后的逆转录试剂盒可以较好地获得全长cDNA,为SAGE技术构建文库提供可靠的原料.借助SAGE技术建立的肝癌HepG2细胞标签文库,容量大、效率高,为后续基因研究搭建了良好的平台. 相似文献
4.
大鼠肝癌细胞与胚胎肝细胞microRNA差异表达谱的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 建立大鼠肝癌细胞与大鼠胚胎肝细胞microRNA(miRNA)表达的差异谱,为研究miRNA在肝细胞癌变发生机制中的作用提供新线索.方法 化学致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)建立近交系F334大鼠肝癌模型.体外原代培养大鼠肝癌细胞和正常F334大鼠胚胎肝细胞,Trlzol法抽提细胞总RNA,进一步制备Hy3荧光标记的miRNA;利用ExiqonmiRNA基因芯片技术.采用含2056条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析,其实验数据用SAM3.0软件进行差异显著性分析.结果 原代培养可获得稳定传代的肝癌细胞及胎肝细胞,两者在形态上无明显差异;miRNA芯片共获得78个差异表达的miRNAs,其中68个表达上调(foldchange>2),10个表达下调(foldchange<0.5),部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中has-miR-21为肝癌癌变相关miRNA.结论 正常肝细胞中存在着与肝细胞癌变及侵袭、转移相关的miRNAs,miRNAs的表达具有明显的时序性,其表达特征的改变可能导致了肝癌的发生. 相似文献
5.
目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P<0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性. 相似文献
6.
目的:探讨体外分离培养大鼠小肝细胞(SHC)的方法,并对其进行表型鉴定。方法:利用二乙基亚硝胺饲喂法,建立SD大鼠肝硬化模型。采用改进后两步胶原酶灌注消化法分离细胞。光镜下观察细胞形态。电镜下观察细胞形态及超微结构。采用计数法测定细胞生长曲线,流式细胞术(FCM)测定细胞周期。通过免疫细胞化学染色法进行表型鉴定。结果:原代培养的大鼠SHC,24h内即可见贴壁伸展,48h左右克隆形成。光镜下可观察SHC核仁小而清晰,胞质少,细胞体积较小;电镜下可见SHC表面少量短而小的微绒毛突起,细胞体积小,核浆比例高,呈现未分化细胞的形态。免疫细胞化学染色显示SHC胞质AFP、CK-7、CK-8及CK-19呈棕黄色阳性信号。结论:改进后的两步胶原酶灌注消化方法能较容易地获得大量纯度较高的SHC。 相似文献
7.
TURP术后排尿异常的原因分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分析经尿道前列腺电切除术(TURP)后发生排尿异常的原因,提高TURP的治疗效果。方法回顾性分析TURP后发生排尿异常的102例患者临床资料,对TURP术后排尿异常进行多因素分析。结果102例患者中,尿道狭窄64例经尿道扩张及尿道狭窄切开治疗治愈;腺体残留12例,经再次TURP治疗治愈;膀胱功能异常26例,经非手术方法治愈。结论尿道狭窄、膀胱功能异常和腺体残留是TURP术后排尿异常的常见原因。 相似文献
8.
9.
目的 探讨和建立体外扩增胚胎肝干细胞并抑制其分化的培养条件及方法.方法 胶原酶结合机械消化法制备14 d胎龄大鼠胎肝干细胞悬液.将细胞随机分为两组.一组接种至Ⅰ型胶原包被的培养板中,常规贴壁培养.另一组细胞则接种至软琼脂培养基中进行悬浮培养.倒置显微镜下观察两组细胞的生长.培养2周后收集两组细胞,电镜观察两组细胞超微结构的差异,流式细胞仪检测其CD90.1+、CD49F+等干细胞标志物表达特征,碱性磷酸酶染色检测其分化状态的差异.结果 悬浮培养的胎肝干细胞具有高核浆比、胞浆内细胞器不发达等超微结构特征,并高表达CD90.1、CD49F等干细胞标志物,碱性磷酸酶染色阳性;而常规贴壁培养的胎肝干细胞则在培养过程中显示出显著的分化特征.结论 琼脂克隆培养的胎肝干细胞较有血清贴壁培养分化程度低,在琼脂克隆培养条件下能增殖形成具有显著干细胞特征的克隆球. 相似文献
10.
肝内嵌合Sertoli细胞对肝组织中Fas/FasL表达的影响及其意义 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 :探讨大鼠肝内嵌合Sertoli细胞对肝组织中Fas/FasL表达的影响及其意义 .方法 :将雄性SD大鼠的睾丸Sertoli细胞以不同浓度 (1× 10 5·mL-1、1× 10 6·mL-1,1×10 7·mL-1,1× 10 8·mL-1)和培养 4 8h的上清液 ,经门静脉向每只雌性SD大鼠肝内注入 1mL .2wk后取肝组织 ,应用半定量RT PCR(QRT PCR)的方法检测各组肝组织中Fas/FasLmRNA相对含量 ,与正常肝组织比较 .结果 :正常、上清液组及 1× 10 5·mL-1,1× 10 6·mL-1,1× 10 7·mL-1,1× 10 8·mL-1浓度组肝组织中FasmRNA表达相对量分别为 :0 .77±0 .0 5 ,0 .78± 0 .0 4 ,0 .78± 0 .0 4 ,0 .78± 0 .0 4 ,0 .81± 0 .0 3,0 .80± 0 .0 4 ,FasLmRNA表达相对量分别为 :0 .18± 0 .0 4 ,0 .2 0± 0 .0 4、0 .2 4± 0 .0 4 ,0 .2 4± 0 .0 4 ,0 .4 3± 0 .0 4 ,0 .4 3± 0 .0 4 .各组间FasmRNA表达水平无显著差异 ;FasLmRNA相对含量 ,正常、上清液组与 1× 10 5·mL-1和 1× 10 6·mL-1组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,与 1× 10 7·mL-1和 1× 10 8·mL-1组比较相差非常显著 (P <0 .0 1) .结论 :Sertoli细胞经门静脉肝内注入 ,可在肝内嵌合并能有效提高FasL表达 相似文献