白细胞介素-1受体相关激酶-4短发夹RNA阻断库普弗细胞激活效应的实验研究

目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）特异性短发夹RNA（shRNA）阻断内毒素诱导的库普弗细胞（KCs）激活效应的可行性。方法 构建两对表达IRAK-4-shRNA的阳性载体质粒（pSfIRAK-4-A，pSfIRAK-4-B）及一对阴性载体质粒（pSⅡRAK-4-C）。分离培养小鼠KCs，分为正常对照组，RNA干扰（RNAi）对照组（转染pSⅡRAK-4-C）与RNAi抑制组（转染pSⅡRAK-4-A，pSⅡRAK-4-B）。质粒转染后24h，加入0．1μg／ml脂多糖（LPS）。6h后，蛋白免疫印迹法及逆转录聚合酶链反应测定IRAK-4蛋白和mRNA表达水平；酶联免疫吸附法检测0、1、3、6、12h后KCs的核因子-κB（NFKB）活性及培养上清液中肿瘤坏死因子α含量。结果 RNAi抑制组IRAK-4表达水平，以及LPS刺激后NFKB活性、肿瘤坏死因子α峰值均明显低于正常对照组和RNAi对照组，t值分别为22．50，4．18及958．49，P〈0．01；尤其是pSⅡRAK-4-A组，抑制效果明显优于pSⅡRAK-4-B，t值分别为12．60，3．36及256．39，P〈0．01。结论 以IRAK-4为靶点的shRNA能有效的阻断内毒素诱导的KCs激活效应。     

改良胰空肠端端吻合术对胰十二指肠切除术后胰瘘发生的影响

目的探讨改良胰空肠端端吻合术对胰十二指肠切除术后胰瘘发生率的影响。方法回顾分析施行胰十二指肠切除术71例的临床资料,比较不同胰空肠吻合方法的胰瘘发生率。结果胰瘘总发生率为18.3%(13/71);改良胰空肠端端吻合术后无胰瘘发生(0/22);传统胰空肠端端吻合术后胰瘘发生率为27.6%(8/29);胰空肠端侧吻合术后胰瘘发生率为25.0%(5/20)。改良胰空肠吻合术后胰瘘发生率显著低于传统端端吻合(P0.05)和端侧吻合(P0.05),而端端吻合和端侧吻合术后胰瘘发生率无统计学差异(P0.05)。结论改良胰空肠端端吻合术能显著降低胰十二指肠切除术后的胰瘘发生率。     

腹腔镜直肠癌根治术输尿管损伤的原因及对策(附4例报告)

2002年1月-2004年5月，我院行腹腔镜直肠癌根治术173例，4例（2．3％）输尿管损伤。1例于术后8d，会阴引流管突然有大量淡黄色渗液流出，经静脉肾盂造影及逆行输尿管造影确诊为左侧输尿管下段离断伴尿漏，于术后2个月行膀胱代输尿管术；3例为术中即有淡黄色尿液流出而中转开腹，行输尿管修补术，并置内支架预防狭窄，均痊愈出院。术者经验不足，对输尿管的解剖关系不熟悉及操作视野不佳是造成腹腔镜直肠癌根治术输尿管损伤的重要原因。     

猪原位肝移植体外静脉转流中门脉系统插管的选择

目的比较在猪原位肝移植体外静脉转流中行门静脉插管或脾静脉插管对血流动力学的影响。方法选健康美国杜洛克猪60头，配对施行原位肝移植术，根据术中转流时门脉系统插管的不同．随机分为两组．即门静脉插管组(n=15)和脾静脉插管组(n=15)。术中连续监测两组动物血流动力学指标的变化。结果门静脉插管组15例中死亡2例．其中1例死于术中转流不畅，1例死于DIC；脾静脉插管组15例中死亡1例，死于失血性休克。脾静脉插管组无肝期为(44．5土7．6)min，明显短于门静脉插管组的(51．5土8．7)minoⅢ、Ⅳ期门静脉插管组血流动力学改变与脾静脉插管组相比差异有显著性意义(P＜O．05)。结论在猪原位肝移植体外静脉转流中采用脾静脉插管转流能缩短无肝期，保持术中血流动力学的相对稳定，减少术后相关并发症的发生，是一种有效的静脉转流途径。     

重症急性胆管炎时核因子-kB活性的变化及其临床意义

目的　观察重症急性胆管炎 (ACST)患者术后外周血单核细胞 (PBMC)中核因子 kB(NF kB)活性的变化及其与胆道感染严重程度和预后的关系。方法　 2 0例ACST患者根据其预后情况分为生存组 ( 14例 )和死亡组 ( 6例 ) ,同时选择胃溃疡行大部切除术或疝修补术等非炎症疾病患者 10例作为对照组 ,分别于术后 2 4h取外周血 ,用密度梯度离心法分离PBMC ,提取核蛋白 ,并用凝胶电迁移改变分析法 (EMSA)测定PBMC中NF kB活性的变化 ,所得结果用图像分析仪分析并以相对光密度 (ROD)表示。用酶联免疫法 (ELISA)测定血浆中TNF α、IL 6和IL 10含量的变化。结果　ACST死亡组NF kB活性最高 ( 5.0 2± 1.0 3 ) ,生存组次之 ( 2 .98± 0 .51) ,对照组最低 ( 1.0 2± 0 .3 4 ) ,各组间比较差异有显著性意义 (P<0 .0 5)。ACST死亡组血浆TNF α和IL 6含量明显增高 ,分别为 ( 4 96.2 8± 52 .3 5)ng/L和 ( 578.13±67.72 )ng/L ,生存组分别为 ( 2 84.47± 3 9.41)ng/L和 ( 3 18.67± 3 4 .92 )ng/L ,对照组分别为 ( 89.43± 10 .3 9)ng/L和( 10 1.2 7± 13 .47)ng/L ,各组间比较差异有显著性意义 (P<0 .0 5)。ACST死亡组和生存组IL 10分别为 ( 3 78.42± 41.0 2 )ng/L和 ( 3 84.75± 3 9.2 4)ng/L ,均明显高于对照组的 ( 69.3 6±     

内毒素血症时大鼠脂多糖结合蛋白的变化及其意义

目的　探讨内毒素血症时大鼠肝组织中脂多糖结合蛋白mRNA的表达、血浆中脂多糖结合蛋白 (LBP)含量的变化及其意义。方法　经大鼠尾静脉注入内毒素 (5mg/kg)建立内毒素血症动物模型 ,检测不同时点模型鼠肝组织中LBPmRNA的表达 ,同时检测血浆中LBP、内毒素、TNF α及IL 6含量的变化 ,并与对照组相比较。另取肝组织在电镜下观察其病理学改变。结果　随着内毒素血症时间的延长 ,内毒素组大鼠肝组织LBPmRNA的表达明显增强 ,血浆中LBP、TNF α和IL 6含量也明显增加 ,与对照组比较差异有高度显著性 (P<0 .0 1)。电镜观察见肝细胞脂肪变 ,线粒体空化 ,枯否氏细胞数量增多、体积增大、吞噬功能增强。结论　内毒素血症时 ,大鼠肝组织中LBPmRNA表达明显增强 ,血浆中LBP含量也明显增加。由此提示 ,增高的LBP可能在脂多糖介导的枯否氏细胞激活及产生、释放各种炎性介质中可能起了重要作用。     

IRAK-M在内毒素诱导Kupffer细胞耐受中的表达及其意义

目的:观察内毒素耐受状态TKupffer细胞中白介素-1受体相关激酶-M(IRAK-M)的表达并探讨其在Kupffer细胞内毒素耐受形成中的作用.方法:通过脂多糖(LPS,10μg/L)预处理建立内毒素耐受Kupffer细胞模型,并与对照组细胞进行比较;在LPS(100 μg/L)刺激后不同时点,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中TNF-α水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中TNF-α和IRAK-M的mRNA表达,TransAM NF-kB Kit检测细胞中NF-kB活性,蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中IRAK-M蛋白表达.结果:LPS刺激在两组细胞中均引起TNF-α释放增加.TNF-α mRNA表达以及NF-kB活性增强,但耐受组细胞的三种指标明显低于对照组(P＜0.05);对照组细胞在LPS刺激24 h后才能检测出IRAK-M mRNA的表达,而耐受组细胞在LPS刺激前已可检测到IRAK-M的基因表达,且该表达在LPS刺激后迅速增强,于6 h达高峰,24 h时仍明显高于对照组(P＜0.05);对照组细胞在LPS刺激24 h后才有微弱的IRAK-M蛋白表达,而耐受组细胞在LPS刺激前已有IRAK-M的蛋白表达,并随LPS刺激进一步上调,两组有显著差异(P＜0.01).结论:内毒素耐受状态下,Kupffer细胞中的IRAK-M表达明显增强,IRAK-M可能在Kupffer细胞内毒素耐受形成中起重要作用.     

阻断内毒素胞内信号转导通路对大鼠移植肝脏再灌注损伤的影响

目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）为靶点，阻断内毒素胞内信号转导后对大鼠移植肝脏再灌注损伤（I／RI）的影响并探索肝移植时可行的RNA干扰（RNAi）治疗途径。方法 两袖套法建立SD大鼠同种异体原位肝移植模型，随机分为冷缺血转染组、活体转染组及对照组。冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带IRAK-4-shRNA的质粒pSIIRAK-4；活体转染组在门静脉袖套吻合完成后，经门静脉分支注入pSIIRAK-4；对照组不予任何处理。按门静脉血流恢复后第0min、60min及180min分为三个亚组，RT—PCR及Western—blot测定肝组织的IRAK-4mRNA和蛋白表达水平；ELISA法测定受体血清TNF-α含量。采用TUNEL法检测肝细胞凋亡状态，透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化。结果 再灌注后冷缺血转染组的IRAK-4表达明显低于同时点的活体转染组及对照组（P〈0．01）；同时，肝细胞凋亡指数、血清TNF-α含量及肝细胞、血窦内皮细胞损伤程度也明显低于后者。结论 以IRAK-4为靶点的冷缺血期shRNAs转染途径能有效阻断内毒素胞内信号转导，进而减轻肝移植时的I／RI程度。     

枯否细胞在昆明小鼠实验性肝癌发生中的作用及机制

【目的】研究枯否细胞（KCs）与肝细胞癌（HCC）发生发展的相关性。【方法】60只昆明小鼠,分成三组：GdCl3预处理组（A组）;肝癌组（B组）;正常对照组（C组）。绘制Kaplan-Meier生存曲线比较各组生存期;光镜下观察肿瘤组织生长情况,免疫组织化学染色鉴定肝脏及肿瘤组织KCs并观察其分布范围和及计数。【结果】①生存曲线显示：A,B组生存时间逐渐缩短,且差异具有显著性（P〈0．05）。②H22肿瘤细胞接种3周后,肉眼观察A组癌灶的体积明显大于B组,差异具有显著性（P〈0．05）。③HE染色显示光镜下可见三组病理组织学变化差异显著。④A组、B组的癌旁肝组织及远癌肝组织的KCs数量较C组明显增加（P〈0．01）,但两组之间差异无显著性（P〉0．05）。⑤A、B及C组各组小鼠血清TNF-α水平有显著性差异（P〈0．01）;【结论】KCs有保护肝细胞、抑制其恶性转化的功能。     

胆道残余结石和复发结石25例手术治疗分析

由于胆道结石常合并胆道解剖结构变异,胆管狭窄及胆道感染,因此首次手术后结石残余和复发在临床较为常见.再次手术往往因腹腔粘连重、解剖结构变化、反复发作的胆管炎、淤胆性肝硬化甚至门静脉高压而变得更加困难.回顾我院2005年1月至2010年1月收治的25例胆道残余和复发结石再次手术的临床资料,分析结石残余和复发的原因及再次手术方式选择,现报告如下.