小分子干扰RNA真核表达载体阻断U937细胞肿瘤坏死因子α基因的表达

背景:无菌性松动是导致人工关节置换后失败和降低人工关节使用寿命的主要原因,肿瘤坏死因子α是一个极具吸引力的无菌性松动治疗新靶点.小分子干扰RNA作为一种新型的基因阻断技术,被广泛用于新基因筛选、基因功能鉴定、信号转导研究以及基因治疗方面,显示出广阔的应用前景.目的:构建人肿瘤坏死因子α基因的小分子干扰RNA真核表达载体,观察其对U937细胞中肿瘤坏死因子α基因表达的干涉作用.方法:将合成的2对小分子干扰RNA寡核苷酸链分别退火形成双链,连接入pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体,分别命名为pSilencer-T1和pSilencer-T2,经酶切及测序鉴定.电转染法转染重组质粒入U937细胞,G418筛选后反转录-聚合酶链反应检测其对肿瘤坏死因子α基因mRNA的干涉效果.结果与结论:经酶切及测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体,经电转染法转染U937细胞后,反转录-聚合酶链反应显示所构建的干涉肿瘤坏死因子α基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达,U937细胞中肿瘤坏死因子α基因的mRNA表达水平明显降低.提示成功构建了人肿瘤坏死因子α基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-T1和pSilencer-T2,并在U937细胞中有效地发挥了对肿瘤坏死因子α基因表达的干涉作用.     

辛伐他汀对钛颗粒刺激人单核细胞形成破骨细胞的影响

目的研究体外辛伐他汀对钛颗粒刺激单核细胞形成破骨细胞的影响,探讨辛伐他汀防治人工关节无菌性松动的可能性。方法体外分离培养人外周血单个核细胞并分成5组,A组为钛颗粒刺激组（单核细胞和磨屑混合培养）,B组为10^-5mol／L辛伐他汀组（单核细胞、磨屑混合培养＋10^-5mol／L辛伐他汀）,C组为10^-6mol／L辛伐他汀组（单核细胞、磨屑混合培养＋10^-6mol／L辛伐他汀）,D组为10^-7mol／L辛伐他汀组（单核细胞、磨屑混合培养＋10^-7mol／L辛伐他汀）,E组为单核细胞组。各组细胞培养24h后取上清液,用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的含量。分别培养10d、18d后进行TRAP染色阳性细胞计数,采用扫描电镜检测骨磨片的吸收陷窝,观察钛颗粒对破骨细胞形成的影响。结果磨屑刺激单个核细胞分泌溶骨因子,辛伐他汀抑制磨损颗粒刺激单核／巨噬细胞分泌TNF-α及MCP-1;且破骨细胞数明显减少,骨吸收陷窝数减少,与钛颗粒组刺激组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论辛伐他汀通过抑制TNF-α、MCP-1的释放而有效防止磨屑诱导的骨溶解,有望成为防治人工关节无菌性松动的一种有潜力的药物。     

三氧化二砷抑制兔血管平滑肌细胞增殖及诱导凋亡的相关机制

目的 研究三氧化二砷（As2O3）对免血管平滑肌细胞（VSMC）的抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用.方法 经组织块贴壁法原代培养的兔VSMC,应用3H-胸腺嘧啶胞苷渗入法、透射电镜、TUNEL法、流式细胞术和基因芯片测定As2O3对VSMC的细胞活力、生长、增殖及凋亡.结果 随着三氧化二砷浓度的增加显著抑制了细胞生长,且呈剂量依赖性,透射电镜下可见凋亡小体,TUNEL检测出现了凋亡细胞,流式细胞术出现了典型的凋亡峰.基因芯片扫描杂交结果数据显示其中26条基因表达有差异.结论 As2O3对VSMC具有抑制增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用.     

超微量脑脊液蛋白定量测定法

脑脊液蛋白定量分析测定,为临床生化检验的常规项目,是神经系统某些疾病的重要辅助诊断之一。目前临床一般采用的分析测定方法或样品用量较多,或结果不够精确,或方法比较复杂烦琐,或仪器设备昂贵难得,而影响临床生化检查的开展。我们实验室研究应用醋酸纤维膜染色法,可以测定微量脑脊液的蛋白质含量,     

宁夏回族MMP-9基因多态性-1562C/T和腰椎间盘突出症的关系研究

目的探讨宁夏回族MMP-9基因多态性-1562C/T和腰椎间盘突出症的相关性。方法采用病例-对照研究的方法,对来自宁夏回族的128例LDH患者和132例匹配的正常对照采集血样,用PCR-RFLP方法对MMP-9基因多态性-1562C/T多态性进行了检测。结果携带CT/TT基因型的个体患LDH的风险是携带CC基因型的个体1.61倍（95%C I：0.89-2.89）,但其差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 MMP-9基因多态性-1562C/T可能与宁夏回族人群的LDH不相关。     

MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达及意义

目的检测MMP-13在大鼠退行性变腰椎间盘中的表达,探讨其在大鼠腰椎间盘退变中的作用。方法雄性大鼠24只,随机分为两组,实验组建立大鼠手术制备腰椎间盘退变模型,正常组不做处理,采用免疫组织化学方法检测两组椎间盘组织中MMP-13的表达。结果组织病理学显示实验组髓核细胞数目较正常组减少。实验组和正常组椎间盘组织中均有MMP-13的表达,实验组表达较对照组显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 MMP-13在腰椎间盘退变的过程中发挥着重要作用。     

三种药物注射治疗膝关节骨性关节炎的疗效评价

目的:探讨膝关节骨性关节炎采取不同药物注射治疗的疗效.方法:选取120例于2014年5月～2015年5月我院接收的膝关节骨性关节炎患者,将其根据注射药物分为A组、B组、C组,分别采取玻璃酸钠、曲安奈德及联合曲安奈德及玻璃酸钠治疗,观察三组疗效.结果:治疗后,C组疗效明显优于A组、B组(P＜0.05);治疗前,三组膝关节功能评分及疼痛评分比较无明显差异(P＞0.05),疗程结束后,C组明显优于A组、B组(P＜0.05).结论:联合应用曲安奈德和玻璃酸钠治疗膝关节骨性关节炎,能显著改善膝关节功能,减轻疼痛症状,疗效显著,值得推广.     

SiRNA真核表达载体阻断U937细胞TNF-α基因表达研究

背景：无菌性松动是导致人工关节置换后失败和降低人工关节使用寿命的主要原因，肿瘤坏死因子α是一个极具吸引力的无菌性松动治疗新靶点。小分子干扰RNA作为一种新型的基因阻断技术，被广泛用于新基因筛选、基因功能鉴定、信号转导研究以及基因治疗方面，显示出广阔的应用前景。 目的：构建人肿瘤坏死因子α基因的小分子干扰RNA真核表达载体，观察其对U937细胞中肿瘤坏死因子α基因表达的干涉作用。 方法：将合成的2对小分子干扰RNA寡核苷酸链分别退火形成双链，连接入pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体，分别命名为pSilencer-T1和pSilencer-T2，经酶切及测序鉴定。 电转染法转染重组质粒入U937细胞，G418筛选后反转录-聚合酶链反应检测其对肿瘤坏死因子α基因mRNA的干涉效果。 结果与结论：经酶切及测序鉴定，成功构建了siRNA真核表达载体，经电转染法转染U937细胞后，反转录-聚合酶链反应显示所构建的干涉肿瘤坏死因子α基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达，U937细胞中肿瘤坏死因子α基因的mRNA表达水平明显降低。提示成功构建了人肿瘤坏死因子α基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-T1和pSilencer-T2，并在U937细胞中有效地发挥了对肿瘤坏死因子α基因表达的干涉作用。