BMP-12重组腺病毒载体转染外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化研究

目的探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。方法取3~4月龄新西兰兔外周血,体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用Ad Easy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转染第3代外周血MSCs,转染后24 h通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测转染效率,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,转染后8、24 h在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达;转染后0、7、14 d,采用免疫组织化学染色观察I型胶原表达情况;实时定量PCR检测肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平,并设未转染细胞作为对照组。结果转染后24 h,倒置相差显微镜观察示细胞生长增殖缓慢,细胞形态清晰;FCM检测示,转染组转染效率为99.57%,未转染组为2.46%;转染后8 h,荧光显微镜下即可见GFP表达,随培养时间延长GFP表达逐渐增多,24 h时几乎所有细胞均可见GFP表达。免疫组织化学染色示,随转染时间延长,Ι型胶原表达逐渐增强;转染组转染后14 d,肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平分别为0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067,均显著高于未转染组的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024,差异有统计学意义(t=—7.700,P=0.031;t=—5.741,P=0.020;t=—12.998,P=0.000)。结论 BMP-12重组腺病毒载体可明显促进外周血MSCs向肌腱/韧带成纤维细胞表型分化,并促进肌腱/韧带特异基因表达和细胞外基质产生,为外周血MSCs用于肌腱/韧带再生提供了依据。     

HPLC法测定宫颈炎康栓的含量

目的 建立高效液相色谱法测定宫颈炎康栓中苦参碱的含量.方法 采用Diamonsil C18 (2)(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,乙腈-水相(0.1％磷酸+0.4％三乙胺,pH7.0)(30∶70)为流动相,流速为1.0ml·min-1,检测波长为220nm.结果 苦参碱在0.0620-0.620mg/mL范围内线性关系良好,r=0.99991,平均回收99.56％,RSD=0.64％.结论 该法简便、快速、专属性好,结果准确、可靠.     

兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究

目的:比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果:半月板纤维软骨细胞原代接种后8~12 h开始贴壁,48~72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7~10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达:随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论:体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生去分化,逐渐变为成纤维细胞的表型。体外单层分离培养的第5代前半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型和生物学特性,可作为组织工程半月板的种子细胞。     

便携式化疗泵配合外周中心静脉置管持续化疗的护理

目的:总结便携式化疗泵加外周导入中心静脉置管(PICC)持续化疗的护理经验.方法:对67例癌症患者采用化疗泵加PICC持续化疗.结果:全部病例化疗均顺利完成全程治疗,未出现任何不良反应及并发症.结论:便携式化疗泵加PICC持续化疗不仅使药物在体内保持一定的血药浓度,而且为肿瘤病人提供了一条安全、方便的无痛性治疗途径,提高了患者的生活质量.     

无糖型益气补血颗粒的工艺研究

[目的]筛选出无糖型益气补血颗粒的最佳的处方及成型工艺.[方法]以粒度、溶化性、临界相对湿度为考察指标,筛选出其处方中加入辅料的品种、配比及其最佳的成型工艺.[结果]一份益气补血颗粒的浸膏(2.5 kg,可制备1000袋颗粒剂)加入50 kg可溶性淀粉、15 g的甜菊糖苷为最佳处方.[结论]该处方的溶化性、粒度均较好.     

1例血小板输错事件的根本原因分析

针对1例血小板输错事件,成立RCA团队,完成事件描述表,应用鱼骨图寻找近端原因,采用五问法剖析根本原因,制定针对性改进对策并落实,为临床安全用血提供保障。     

方形截囊术在皮质性白内障超声乳化摘除术中的应用

目的 探讨方形截囊术在皮质性白内障超声乳化摘除术中的临床应用效果。方法 采用方形截囊术对３２例（３５眼）皮质性白内障行超声乳化摘除及后房型人工晶体植入术。术后三月散瞳后通过房角镜观察人工晶体的固定位置。结果 术中３３眼（９４．３％）成功完成方形截囊，２眼（５．７％）失败改为开罐式截囊。术后有３０眼（８５．７％）人工晶体的双襻均在囊袋内。结论 方形截囊术为皮质性白内障超声乳化摘除提供了一个边缘光滑整     

顾乃强治疗乳癖的经验

乳腺增生病，属中医文献“乳中结核”、“乳癖”的范畴。顾先生治癖先治肝，气调癖自平；冲任病之本，益肾调冲任；癖由痰瘀凝，散结重化瘀；乳衄肝火盛，火旺血离经。对乳癖的论治、立法用药具有指导意义，取效较好。现将其论治乳癖的学术经验，介绍如下。１治癖先治肝气...     

乳腺增生病病理分类与中医证型相关性研究：附360例临床资料分析

乳腺增生性疾患是最常见的乳腺疾病，各证型的预后转归各不相同，它与中医对本病的辨证分型也存在着相关性。因此，探索本病病理分类与中医辨证分型的相关性，可以提高辨证论治可靠性、可重复性和治愈率。我们自１９９６年至１９９７年共观察３６０例，现将本组病例病理分...     

一个先天性无虹膜合并白内障家系PAX6基因突变研究

目的 鉴定一个先天性无虹膜合并白内障家系的致病是否与PAX6基因突变有关.方法 提取该家系全部12名存活成员和96名正常人外周血白细胞DNA,PCR扩增PAX6基因的第4～13编码外显子及侧翼内含子剪切区域,通过直接测序比较家系患者与正常人序列差异以确定致病突变.结果 对PAX6基因序列分析结果显示,该家系3例患者中均存在一个无义突变,而在正常人和家系中非受累成员中则未发现.无义突变位于PAX6基因第10外显子1143位核苷酸c.1143C>T,突变导致精氨酸替换为终止密码(R261X).结论 PAX6基因突变R261X是中国人先天性无虹膜合并白内障的致病突变.