siRNA联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)联合预照射对肺癌细胞survivin基因表达的影响。方法 在肺癌A549细胞中转染survivin基因的siRNA,分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting方法检测survivin基因mRNA和蛋白的表达。将肺癌A549细胞分为单纯放射组、单纯转染组、转染+放射组,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖情况,采用CCK8测细胞生长曲线。结果 siRNA能抑制肺癌细胞survivin基因mRNA和蛋白的表达。siRNA联合预照射较单纯转染和单纯放射能显著增加细胞凋亡率,降低细胞的集落形成,抑制细胞生长。结论 预照射可以增强siRNA对肺癌细胞survivin基因的抑制作用。     

异体肌腱材料选择及应用Tibial-inlay技术重建膝关节后交叉韧带17例

背景:自体肌腱移植重建后交叉韧带存在供体区域并发症等问题,虽然人工腱的研制与组织工程腱的研究有了长足的进展,但在临床应用上尚存在一些问题.自20世纪80年代起,同种异体肌腱移植的相关研究逐渐被人们所重视.目的:同种异体肌腱材料的选择及其应用于重建膝关节后交叉韧带的效果.方法:17例膝关节后叉韧带损伤患者均使用深低温冷冻同种异体肌腱应用Tibial-inlay技术重建后交叉韧带.术中将用庆大霉素盐水浸泡过15min的两束异体肌腱对折,肌腱的一端套入松质骨螺钉加垫片固定在后叉韧带的胫骨附着点处,另一端通过牵引线引入关节内,修复切开的后关节囊.变换体位为平卧位,患膝屈曲90°,从关节内将移植物的另一端引入股骨隧道,前抽屉拉紧后由外向内拧入挤压螺钉固定.结果与结论:术前后抽屉试验均>2+,其中3+程度7例,4+程度6例,术后后抽屉试验结果0为4例,1+为8例,2+为4例,3+为1例,显示患者膝关节的后移程度较术前有明显改善.患者术前的Lysholm关节评分为(48.5±4.3)分,术后Lysholm关节评分为(88.3±5.4)分.说明深低温冷冻异体肌腱应用Tibial-inlay技术修复膝关节后交叉韧带不损伤正常的自身结构,可恢复后交叉韧带的功能,治疗效果满意.     

组织与脱落细胞中的microRNA表达量检测指示miR-203在口腔扁平苔藓中的潜在作用

口腔扁平苔藓（OLP）是一种癌前病变和慢性炎症,其损伤具有组织学异质性,多种类型的细胞参与其发生与恶性转化,而其分子机制尚不明确。本研究检测了来自于OLP患者和健康志愿者口腔组织和脱落细胞中miR。96／182／183簇、miR-203、miR-375、miR-769—5p的表达水平,并通过双标图法评价了显著差异表达的miRNA与OLP的相关性。研究发现。相对于志愿者正常组织,miR．203在患者病损区组织中显著高表达,其变化程度明显高于其它miRNA。与此相反,miR-203及miR-96／182／183簇的表达在脱落细胞中则没有显著差异,提示OLP病损区中不同类型细胞对miRNA表达的调控不同,可能与OLP的组织学异质性相关。双标图分析表明miR-203与miR-96／182／183簇的表达量在患者病损区组织中呈正相关。本研究结果表NmiR-203不仅在分子层次显示TOLP的组织学异质性,还可能成为潜在的诊断标志物和治疗药物靶标。     

半去势雄性大鼠外周血中睾酮代偿性变化的研究

目的 研究半去势雄性大鼠外周血中睾酮水平变化规律.方法 取20只性功能正常的雄性SD大鼠,随机分为正常组与半去势组(n=10),分别行右侧睾丸摘除术与假手术后,第2,3、5、7、9周放射免疫法检测外周血中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)含量.结果 在各时间段内,半去势组T含量显著低于正常组(P<0.05),半去势组第7周显著高于第2、3、5、9周(P<0.05),正常组各周间差异则无统计学意义(P>0.05).半去势组LH在2、3、5、7、9周后均显著高于正常组(P<0.05),在各时间段内,半去势组第7周显著高于2、3、5、9周(P<0.05),而第3、5周与第9周间差异无统计学意义(P>0.05).半去势组与正常组间FSH含量差异无统计学意义(P>0.05),半去势组2、3、5、7、9周间差异亦无统计学意义(P>0.05)结论半去势后T水平显著降低,其代偿性升高于现象9周后回落,其代偿机制可能与LH相关.     

骨髓间充质干细胞培养并向骨骼肌诱导分化的实验研究

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的定向分化及其在体内的形态发育情况。方法 Wistar大鼠24只，向其左胫前肌处注射0．2ml无水乙醇，致其无菌坏死，右胫前肌注射等渗盐水0．2ml作为对照，制成动物模型后备用；取大鼠第3代BMSCs，5-氮杂胞苷、成肌调节因子（MyoD）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）联合进行诱导分化。诱导后第9天，收集BMSCs，用BrdU标记并诱导后注射到大鼠双下肢胫前肌处，分别在3，6，9和12d取材进行形态观察和免疫组织化学检查。结果 注射诱导后3d，实验组的成活率明显高于注射单纯注射BMSCs的对照组，BrdU标记细胞向骨骼肌分化，结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白均为弱阳性表达，6，9d可见BrdU标记细胞向骨骼肌分化，结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白阳性表达，第9天更为明显，注射后12d后可见新生骨骼肌细胞形成肌小管，细胞核结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白强阳性表达。结论 大鼠损伤肌肉的微环境中，BMSCs可向骨骼肌定向分化，并伴有结蛋白和骨骼肌肌球蛋白阳性表达；定向诱导后BMSCs在体内成活率高，增殖速率快，向骨骼肌分化纯度更高。     

成肌分化因子和5-氮杂胞苷联合诱导骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞分化的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外定向分化为骨骼肌细胞的干预条件。方法取健康4周龄Wistar大鼠MSCs制成细胞悬液接种于培养瓶中，置于37C、5％CO2恒温培养箱中培养，倒置相差显微镜下观察，细胞布满瓶底即为1代，取第3代MSCs，以5-氮杂胞苷10μmol／L、成肌分化因子0．1ng／ml、转化生长因子β1 0.1ng／ml、胰岛素样生长因子12ng／ml进行联合诱导，使之分化。诱导后第9天，收集细胞，行MTT比色法、流式细胞仪和免疫组织化学检测鉴定细胞。结果原代培养的MSCs呈贴壁生长，3～5d呈集落样生长，5～7d后有体积不等的多突成纤维细胞、较大的扁平多角形细胞、中等的多角形细胞和较小的三角形细胞。培养12d后，细胞融合，铺满瓶底，MSCs形态变化不明显。联合诱导后，部分细胞死亡，生长缓慢；7d后见细胞明显增殖，体积逐渐增大，呈椭圆形、梭形或不规则形状；14d后，大量增殖的长梭形细胞开始增多；18～22d后，肌管数量增多，体积增大，核数亦明显增多，初生肌管与长梭形成肌细胞呈平行排列，间隔分布。MSCs免疫组织化学法测定CD44反应阳性，胞质呈棕褐颗粒，核周明显，CD34呈阴性反应；诱导后MSCs结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白均为阳性表达。流式细胞仪测定MSCs和诱导后MSCs大部分处于G0／G1期，分别占79．4％、62．9％，而G2／S／M期仅占20．6％、36．1％。根据MTT绘制生长曲线，可见MSCs生长速度明显高于诱导后的MSCs。两种细胞并未达到平台期，都有继续增殖的趋势。结论在体外，MyoD、5-氮杂胞苷可以诱导MSCs向骨骼肌细胞定向分化，并伴有结蛋白和骨骼肌肌球蛋白阳性表达；定向诱导后MSCs增殖期比例大，向骨骼肌细胞分化纯度更高。     

3.0 T MRI在直肠癌术前分期和评估中的应用价值

目的　探讨3.0 T MRI在直肠癌术前分期和评估中的应用价值。方法　收集经肠镜及病理确诊的76例直肠癌患者资料,通过术前MRI影像判断T分期、N分期并测量肿瘤下缘至肛缘距离,将MRI分期和评估结果与术后病理进行对照分析。结果　MRI诊断T1期9例,T2期19例,T3期32例,T4a期14例,T4b期2例。病理诊断T1期9例,T2期22例,T3期28例,T4a期15例,T4b期2例。MRI T1、T2、T3、T4a、T4b期诊断敏感度和特异度分别为67%和100%、68.2%和92.6%、89.3%和85.4%、80.0%和96.7%、100%和100%,两者一致性较好（Kappa=0.708,P＜0.05）。MRI诊断肠旁淋巴结转移36例,术后病理诊断肠旁淋巴结转移33例, MRI诊断肠旁淋巴结转移敏感度、特异度分别为85.2%和83.3%（Kappa=0.701,P＜0.05）。76例患者中有12例患者行Miles术,术前均通过MRI曲线测量技术测量肿瘤下缘至肛缘距离,与术后病理标本数据进行对比,差值≤7 mm,差异无统计学意义（t=0.480,P＞0.05）。结论　3.0 T MRI可准确地对直肠癌患者进行术前分期和评估,为临床诊疗提供帮助。     

3D高清全腹腔镜残胃癌切除术的临床疗效分析

探讨因良性疾病而行胃大部切除术后发生的残胃癌患者,应用3D全腹腔镜残胃癌切除术的临床疗效。　方法　收集2015年5月至2018年6月大连医科大学附属第二医院收治的19例行3D高清全腹腔镜残胃癌手术患者资料,所有患者既往因胃良性疾病而行胃大部切除术,本次入院术前均经胃镜和病理活检确诊为胃癌。采用回顾性横断面研究方法,对患者手术及术后恢复情况、病理情况、住院费用等进行统计学分析,并随访其生存及复发情况。　结果　（1）手术情况：19例残胃癌患者中,行3D高清全腹腔镜根治性残胃切除术18例,行3D高清全腹腔镜姑息性残胃切除术1例。19例行3D高清全腹腔镜残胃切除术患者,手术时间为（223.63±53.47）min,术中出血量为（136.32±82.95）mL,淋巴结清扫数目为（26.05±6.84）枚。（2）术后情况：术后离床活动时间（1.39±0.46）d,术后肛门首次排气时间（2.08±0.92）d,术后进流食时间（4.45±2.39）d,拔除引流管时间（9.95±5.28）d,术后住院时间为（13.74±9.69）d。总费用（80271.69±22536.91）元。患者术后出现食管空肠吻合口漏1例,十二指肠残端漏1例,切口感染1例,肺部感染2例,无围手术期死亡。（3）随访情况：对19例行3D高清全腹腔镜残胃切除术患者随访,随访时间3~40个月,中位随访时间17个月;随访期间死亡7例,存活12例。　结论　对于因良性疾病而行胃大部切除术后发生的残胃癌,应用3D全腹腔镜行残胃切除术是安全、有效的。