乳杆菌调节小鼠空肠派伊尔结基因表达的通路分析

目的:探索乳杆菌免疫作用机制.方法:BALB/c小鼠灌胃乳杆菌,从小鼠空肠派伊尔结提取RNA,基因芯片分析基因表达情况,基于已知的基因网络数据库利用Onto-Tools分析乳杆菌刺激引起的特异性基因网络.结果:Onto-Tools分析得到的通路中,涉及到免疫的通路有T细胞受体信号通路、B细胞受体信号通路、细胞因子和细胞因子受体通路、抗原加工和呈递等;涉及到粘膜屏障的有粘着斑、粘着连接、紧密连接和细胞粘附分子;还有涉及到细胞周期和凋亡的通路;其中通路中影响因子最高的为MAPK信号通路和粘着斑.结论:乳杆菌刺激引起大量蛋白表达,激活粘膜屏障,引起T细胞受体信号通路、B细胞受体信号通路、细胞因子和细胞因子受体通路等通路,从而造成免疫应答.     

利用GO数据库分析与预测乳杆菌肽聚糖对小鼠免疫细胞基因表达的影响

目的：探索乳酸菌肽聚糖对小鼠免疫细胞基因表达的影响。方法：给BALB／c小鼠腹腔注射乳杆菌肽聚糖1次或3次，从腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞合并细胞提取RNA，利用Affymetrix MOFA30A基因芯片分析基因表达，利用基于G0数据库的芯片数据分析工具分析乳杆菌肽聚糖诱导后的代表性G0定义。结果：腹腔注射一次乳杆菌肽聚糖（i.p．）引起了腹腔巨噬细胞和脾脏淋巴细胞基因表达的广泛变化，但特异性不强。注射三次后表达显著改变的基因主要与免疫反应有关。定义两次刺激引起显著变化的所有基因为肽聚糖响应基因，其代表性G0生理过程定义预测主要与巨噬细胞吞噬活力增强、淋巴细胞激活、炎性反应正调节有关。结论：肽聚糖刺激的早期反应涉及先天性免疫激活和抗原呈递过程。     

重组阿片肽包涵体的溶解工艺

通过SDS PAGE凝胶电泳确定了目的重组阿片肽存在于包涵体中,系统研究了影响大肠杆菌表达的重组阿片肽包涵体溶解的因素,确定了重组阿片肽包涵体制备溶解的最佳工艺条件,即菌体超声破碎5min,间隔时间6s,破碎效果最好;包涵体洗涤温度为4℃,尿素洗涤液的浓度为2mol/L,洗涤时间7～8h,8mol/L的尿素溶液对包涵体进行溶解,蛋白质质量浓度约为600μg/mL,其效果最佳.     

外源质粒DNA对小鼠肝脏基因表达谱的影响

研究了外源质粒DNA经胃肠道吸收可能对肝脏产生的作用机制。给Balb／c小鼠灌胃质粒pcDNA3 200μg，在灌胃后4h分离肝脏，提取肝脏的总RNA。利用寡核苷酸芯片对灌胃质粒pcDNA3后的Balb／c小鼠肝脏进行基因表达谱研究。结果发现17664个基因中，表达上调100条，表达下调41条。按基因功能分类，表达上调的基因可分为免疫应答基因、转录因子基因、信号转导基因、转运相关基因及代谢相关基因等；表达下调的基因主要为脂质代谢基因。灌胃外源质粒DNA后，肝脏组织主要表现为急性时相反应的加强、免疫反应的活化、细胞信号通路的活化以及脂质代谢途径的抑制。表明外源质粒DNA通过胃肠道途径可广泛调控肝脏的基因表达。     

日粮核苷酸对早期断奶小鼠生长发育的影响

实验观察日粮核苷酸混合物对早期断奶小鼠生长发育的影响.采用16～17日龄的断奶Balb/c雄性小鼠60只,分成6组,其中3组饲喂半纯合日粮作为对照,另外3组饲喂添加质量分数0.25%核苷酸混合物的日粮,在实验的第2,4,10天分别取对照组和实验组各一组,测定生长发育指标.随着时间的延长小鼠体增重、胸腺和脾脏重量以及胸腺指数和脾脏指数都显著下降(P<0.01),第10天时核苷酸组体重损失显著低于对照(P<0.05),日粮核苷酸对胸腺和脾脏质量没有显著影响,但有减缓质量下降的趋势.肝脏质量、肝脏指数、小肠质量以及肠壁厚度在第4天显著下降,第10天时基本恢复或超过第2天.日粮核苷酸对肝脏、小肠质量、肠壁厚度没有显著影响,但在第4天时能够减轻肝脏和小肠质量的下降,使肝脏指数显著高于对照(P<0.05).核苷酸能改善消化道形态,提高小肠绒毛高度和绒毛高度/腺窝深度(P<0.05).实验组小鼠脾细胞淋巴细胞转化率在第10天时显著高于对照(P<0.05).结果表明日粮核苷酸能够减轻断奶对小鼠造成的应激,促进机体生长和免疫功能的恢复.     

β-casomorphin-7对小鼠的免疫调节作用

目的：通过体外和体内方法研究β-casomorphin-7对小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用.方法：利用脾细胞增殖试验和腹腔巨噬细胞中NO浓度的变化来研究体外不同的β-casomorphin-7浓度对脾脏淋巴细胞的增殖和腹腔巨噬细胞中NO浓度变化的影响,以及腹腔注射β-casomorphin-7和饮用β-casomorphin-7溶液对上述两个指标的影响.结果：体外试验表明,β-casomorphin-7在不同浓度对脾脏淋巴细胞的增殖显示了刺激和抑制的双向作用,而对NO的产生显示了明显的抑制作用（P＜0.01）.体内试验表明,β-casomorphin-7通过腹腔注射和饮用两种给药方式对脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的作用是一致的.β-casomorphin-7显著地增强了脾淋巴细胞的增殖反应（P＜0.01）,且抑制了腹腔巨噬细胞NO的产生.结论：当前的试验表明,β-casomorphin-7具有免疫调节作用,且小鼠在2～3周龄时,可吸收入血发挥免疫调节作用.     

不同微生物诱导家蝇幼虫表达抗菌肽的特性

研究不同微生物诱导家蝇幼虫表达的抗菌肽特性.用3种不同的病源菌通过针刺感染的方法诱导家蝇幼虫表达抗菌肽,通过Sephadex G25分离,用Hult mark改进法和抑菌圈测定法作抑菌试验,用毛细管电泳（CE）分析不同微生物诱导得到的抗菌肽样品差异,检测抗菌肽的热稳定性和酸碱耐受性.发现不同微生物诱导产生的家蝇抗菌肽具有广谱抑菌性,但不同样品对不同病源菌抑菌活性有差异,不同测定抑菌效果的方法对抑菌结果有影响,各种抗菌肽样品CE蛋白谱具有明显不同.抗菌肽样品都具有热稳定性和酸碱耐受性.说明不同微生物诱导产生的家蝇抗菌肽类型以及抗菌肽含量与诱导源有关,抗菌肽为家蝇幼虫体内固有成分,诱导增加了抗菌肽的表达量同时刺激新抗菌肽的产生.用志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌诱导家蝇幼虫可产生较多含量高活性好的抗菌肽.     

外源核苷酸对免疫抑制小鼠胸腺细胞DNA损伤的影响

目的:检测外源核苷酸对经环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠胸腺细胞DNA损伤的影响。方法:采用18～20 g昆明种小鼠30只,雌雄各半,随机分成阴性对照组(NEC)、阳性对照组(POC)和核苷酸组(NTG),每组10只。NEC组和POC组小鼠均饲喂半纯合无核苷酸的基础日粮,NTG组则在基础日粮中添加0.25%的核苷酸,实验期为21 d。在实验结束前18 h POC组和NTG组小鼠按照150mg/kg bw的剂量腹腔注射环磷酰胺,NEC组注射生理盐水,实验结束时测定脾脏和胸腺脏器指数,并取胸腺细胞,做单细胞凝胶电泳,观察细胞DNA损伤情况。结果:在基础日粮中添加核苷酸对小鼠免疫器官重量没有显著影响(P>0.05),但能极显著降低受损胸腺细胞百分率(P<0.01)和受损细胞DNA尾长(P<0.01)。结论:外源核苷酸能显著降低免疫抑制小鼠受损胸腺细胞百分率和损伤程度。     

毕赤酵母表达阿片肽发酵条件的研究

研究了由毕赤酵母胞内两步发酵法表达活性小分子阿片肽的条件.正交实验确定最佳生长条件为:甘油24g/L、酵母膏11g/L、蛋白胨22g/L、YNB 20ml/L,初始pH5.0.菌体密度可达2.46;以单因素实验确定最佳表达条件为:起始菌体浓度2.44,初始pH 6.25,每10h流加0.6%甲醇(v/v),表达时间96h.阿片肽250ml摇瓶产量由196mg/L提高至496mg/L.