蝉拟青霉多糖免疫调节和抗肿瘤活性的实验研究

目的：研究蝉拟青霉总多糖(PcPSt)及其组分PcPSAc的免疫调节和抗肿瘤活性。方法：将实验动物分为5组：正常对照组、肿瘤对照组、PcPSt组、环磷酰胺（Cy）组和PcPSt + Cy组，除正常对照组外其余各组均复制荷瘤小鼠模型，每日分别向5组小鼠腹腔注射生理盐水（NS）、NS、PcPSt、Cy和PcPSt+Cy，10 d后，观察各组白细胞、脾指数、瘤重和抑瘤率等指标的变化。以cell counting kit 8（CCK-8）为指标，以脂多糖（LPS）为阳性对照，观察PcPSAc对体外培养的小鼠脾细胞增殖活性影响。以LPS为阳性对照，观察不同浓度PcPSAc刺激体外培养小鼠腹腔巨噬细胞（PMΦ）产生一氧化氮（NO）的作用。结果： PcPSt能增加荷瘤小鼠白细胞数量，缓解Cy所致荷瘤小鼠白细胞数的降低，提高荷瘤小鼠的脾指数，联用小剂量Cy时明显增强其抑制肿瘤作用。PcPSAc在600 mg/L和300 mg/L浓度时能提高体外培养小鼠脾细胞的增殖活性。PcPSAc在15-300 mg/L浓度范围内均能刺激体外培养小鼠PMΦ产生NO，其中以300 mg/L PcPSAc作用最强。结论：体内试验和体外试验表明蝉拟青霉多糖具有促进免疫功能和抗肿瘤的作用。     

霍山石斛多糖对小鼠的双向免疫调节作用

目的观察霍山石斛多糖对小鼠的双向免疫调节作用。方法将90只昆明种小鼠随机分成9组,分别为正常对照组、免疫亢进模型组、免疫亢进+霍山石斛多糖[低(50 mg?kg-1?d-1)、中(100 mg?kg-1?d-1)、高(200 mg?kg-1?d-1)]剂量组、免疫抑制模型组、免疫抑制+霍山石斛多糖[低(50 mg?kg-1?d-1)、中(100 mg?kg-1?d-1)、高(200 mg?kg-1?d-1)]剂量组。采用连续3 d腹腔注射环磷酰胺(80 mg·kg-1)制作免疫抑制模型小鼠,采用连续11 d肌注卡介苗0.5 mg/只制作免疫亢进模型小鼠,观察霍山石斛多糖对免疫抑制模型小鼠和免疫亢进模型小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性、体外脾淋巴细胞增殖能力和胸腺指数的影响。结果霍山石斛多糖能明显改善环磷酰胺所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性降低、脾淋巴细胞体外增殖能力降低和胸腺指数降低,缓解卡介苗所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性亢进、脾淋巴细胞体外增殖能力亢进和胸腺指数降低。结论霍山石斛多糖具有较好的双向免疫调节作用。     

NO介导的巨噬细胞对脾脏T细胞增殖的抑制作用

本文研究一氧化氮(NO)在介导小鼠巨噬细胞抑制脾脏T细胞增殖中的作用。结果显示NO 供体硝普钠(SNP) 呈剂量依赖性抑制脾脏T细胞对ConA增殖反应, 小鼠腹腔巨噬细胞与脾细胞的混合培养也可抑制T细胞增殖, 这种抑制作用与NO产量正相关, NO合酶抑制剂L 硝基 精氨酸(L NNA) 可部分逆转这种抑制作用     

云芝多糖对小鼠细胞因子的影响

目的：研究云芝多糖（CVPS）对小鼠T、B淋巴细胞及细胞因子IL-1、IL-2、IFN-γ和TNF功能的影响。方法：体外试验将指数生长小鼠淋巴细胞与不同浓度的CVPS共培养，用MTT法观察CVPS对小鼠T、B淋巴细胞的增殖作用；用胸腺细胞增殖法观察CVPS对细胞因子IL-1活性的影响；用脾细胞增殖法观察CVPS对IL-2活性的影响；用中性红染色法观察CVPS对细胞因子TNF活性的影响；体内实验给药组小鼠每天分别腹腔注射CVPS100、50和25mg／kg，连续注射5天，取出小鼠脾脏观察CVPS对小鼠T、B淋巴细胞的增殖作用；用IL-2依赖细胞株CTLL-2法检测IL-2活性，用细胞病变抑制法检测IFN-γ活性。结果：CVPS在体外给药浓度为31．25—500μg/ml时，可明显促进小鼠T、B淋巴细胞的增殖，明显增强TNF吞噬中性红的能力，明显提高细胞因子IL-1的活性。CVPS给药组小鼠IL-2、IFN-γ的活力值明显高于空白对照组，且呈良好剂量依赖关系。结论：云芝多糖对小鼠T、B淋巴细胞及细胞因子IL-1、IL-2、IFN-γ及TNF功能均有增强作用。     

四氧嘧啶糖尿病小鼠免疫状态及胰岛素免疫调节作用的研究

本文以四氧嘧啶糖尿病小鼠为模型,探讨了糖尿病小鼠在高血糖低胰岛素状态下对免疫器官、自然杀伤活性细胞、脾淋巴细胞增殖及IL-2产生的影响。结果表明,高血糖低胰岛素状态可致小鼠脾脏及胸腺明显萎缩,脾细胞总数减少(均P<0.01)。体内YAC-1细胞清除率降低,淋巴细胞对ConA的增殖反应及IL-2产生能力减弱。体外给予胰岛素可使病鼠淋巴细胞对ConA的增殖反应显著升高,IL-2合成增多,表明胰岛素具有重要的免疫调节作用。     

榄香烯复合瘤苗HSP70与HSP70BCG对巨噬细胞功能影响的比较

目的 :比较Hca F榄香烯复合瘤苗HSP70 (HSP70 HTCV)和卡介苗HSP70 (HSP70 BCG)对小鼠腹腔或脾脏巨噬细胞功能的影响 ,分析HSP70 HTCV诱导抗瘤免疫作用的机制。方法 :给正常BALB C小鼠腹腔注射HSP70 HTCV 或HSP70 BCG ,共 3次 ,并用多聚甲醛固定的Hca F细胞体内冲击。收集腹腔和脾脏的巨噬细胞 ,并用HSP70 HTCV或HSP70 BCG 体外再致敏 ,用MTT法测细胞毒活性、细胞的增殖和分泌TNF的能力 ,用中性红吞噬试验测巨噬细胞的吞噬能力。结果 :用HSP70 HTCV 免疫小鼠的腹腔巨噬细胞对Hca F的细胞毒活性强于用HSP70 BCG 免疫小鼠的腹腔巨噬细胞 (4 2 7%VS 31 0 % ,P <0 0 5 ) ;用HPS70 HTCV 免疫小鼠的脾脏巨噬细胞分泌TNF的能力高于用HSP70 BCG免疫小鼠的脾脏巨噬细胞 ,细胞培养上清对L92 9的细胞毒活性分别为 5 7 4 %和 35 9% (P <0 0 5 ) ,脾脏巨噬细胞吞噬中性红的能力的变化两组之间无明显差别 ;免疫巨噬细胞的上述功能均高于未经免疫的对照小鼠的巨噬细胞 (P <0 0 1) ,而三组巨噬细胞的增殖改变无明显差别 (P >0 0 5 )。结论 :HSP70 HTCV 或HSP70 BCG 免疫都能增强巨噬细胞功能 ,但HSP70 HTCV免疫诱导的巨噬细胞对肿瘤细胞有更强的杀伤活性     

连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响

目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响.方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3 h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响.用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响.结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160 mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05).不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05).结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放.     

S-O_2-1菌苗对小鼠淋巴细胞的作用

动物实验和初步临床应用表明有抑制肿瘤生长作用的S-O_2-1菌苗,在体外能直接刺激小鼠脾细胞淋巴细胞的增殖,并协同增强脾细胞的Con A增殖反应、S-O_2-1菌苗诱导和增强小鼠腹腔粘附细胞的抑制活性,后者表现在直接抑制脾细胞和肠系膜淋巴结细胞对Con A和S-O_2-1菌苗的增殖反应。腹腔转移菌苗活化的腹腔粘附细胞能抑制受体小鼠对SRBC的PFC应答。提示:S-O_2-1菌苗诱导增强巨噬细胞的抑制活性,以致间接抑制淋巴细胞的免疫应答。     

仙茅多糖对小鼠免疫功能调节作用实验研究

仙茅多糖体外单独能刺激小鼠脾淋巴细胞增殖，而单独对小鼠胸腺细胞无作用，但在ＣｏｎＡ存在条件下对胸腺细胞增殖有协同作用，体外对尼龙毛柱分离小鼠脾Ｔ细胞富含部分有明显刺激增殖作用：体外能对抗由氢化可的松（ＨＣ）抑制ＣｏｎＡ诱导脾Ｔ细胞增殖，体内对ＨＣ诱导免疫受抑小鼠胸腺及脾脏重量降低，胸腺细胞及脾Ｔ、Ｂ细胞增殖降低有明显对抗作用。     

三七提取物对小鼠淋巴细胞活化、增殖和腹腔巨噬细胞产生NO的影响

目的 分析三七提取物（SE）对小鼠淋巴细胞体外活化、增殖以及对巨噬细胞产生NO的影响，探讨其免疫抑制作用的机制。方法 以多克隆刺激剂刀豆蛋白A（ConA）刺激淋巴细胞活化和增殖，利用荧光标记的单克隆抗体双染技术和流式细胞术检测SE对小鼠CD3^＋T细胞CD69表达的影响；通过CFSE染色流式细胞术检测SE对淋巴细胞增殖的影响；用脂多糖（LPS）或淋巴细胞培养上清液（lymphocytes culture supernate，LCS）体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO，采用Griess试剂盒检测NO的水平。结果 在ConA刺激6h后小鼠T细胞活化率为59．79％，50、100μg／ml的SE可显著降低其活化率，分别为46．50％和37．73％（P〈0．01）。在培养72h后，不同浓度SE能明显抑制ConA诱导T细胞的增殖。SE在12．5～100μg／ml的浓度范围内对淋巴细胞培养上清和LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放具有抑制作用（P〈0．01）。结论 三七提取物对小鼠淋巴细胞的活化、增殖有明显抑制作用，并能抑制巨噬细胞产生NO（P〈0．01）。     

脂质体介导的IL—2基因疗法的建立及其免疫增强作用

用反相蒸发技术制备出包裹有ＩＬ－２ＤＮＡ的脂质体，将其直接注射至小鼠腹腔中，经１０ｄ后发现，腹腔细胞体外培养的上清中含有较高水平的ＩＬ－２，腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强，脾细胞体外增殖、脾细胞ＮＫ活性及体外诱导的ＬＡＫ活性均明显高于对照组；同时经脂质体转染ＩＬ－２基因的脾脏细胞具有较高的内源性ＬＡＫ活性。这表明，脂质体能将目的基因经腹腔途径直接转染体内细胞，表达出基因产物－ＩＬ－２。这种     

磨菇多糖对小鼠S180肉瘤抗瘤效应的初步研究

研究了磨菇多糖（Ｌｅｎｔｉｎａｎ）抑制肿瘤生长和免疫调节作用，结果表明：磨菇多糖对小鼠肉瘤Ｓ１８０有较强的抑瘤作用，在体内可明显促进小鼠脾淋巴细胞转化率，增强小鼠ＮＫ细胞活性和腹腔巨噬细胞的杀伤活性，提示磨菇多糖可刺激机体免疫系统，激发机体的抗肿瘤机制，具有明显的抗肿瘤效应。     

波形蛋白的警报素功能鉴定

目的：鉴定胞外可溶性波形蛋白（Vim）促进相关细胞增殖、活化、趋化的能力。方法：体外检测Vim刺激大鼠脾细胞的增殖情况。体内检测Vim免疫小鼠的外周血淋巴细胞数及Vim抗体水平。收集小鼠腹腔巨噬细胞与不同浓度Vim共培养,检测其对巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响。以Transwell小室法检测Vim对NIH3T3成纤维细胞的趋化作用。结果：体外实验Vim剂量依赖性地促进大鼠脾细胞增殖,16 μg/ml浓度的Vim刺激预致敏或未致敏脾细胞增殖率分别高达（196.0±9.7）%、（208.9±4.6）%,且该二者无显著性差异。体内实验单用Vim免疫小鼠的外周血淋巴细胞浓度（10.9 L -1 ）激增（5.74±0.51 vs 1.69±0.13）,同时激发了Vim特异性抗体水平（OD值2.31±0.06 vs 0.19±0.08）;且与Vim辅以佐剂免疫小鼠的相应指标均无显著性差异。体外实验Vim浓度依赖性地促进巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力,并能够对NIH3T3成纤维细胞产生趋化作用。结论：胞外可溶性Vim非特异性促进炎症反应相关细胞增殖、活化、趋化,具有警报素功能。     

戴氏虫草和粉被虫草多糖对巨噬细胞等活性的影响

目的 研究虫草属新种-戴氏虫草菌丝体胞外水溶性多糖（CDP1）和粉被虫草菌丝体多糖（CPP1）在体外对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）吞噬功能和脾细胞免疫功能的影响。方法 MTT比色法测定淋巴细胞增殖,孔雀绿比色法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,中性红比色法测定细胞毒淋巴细胞（CTL）活性,结果 CDP1在正常情况下不能促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,而CPP1却有促进作用;在免疫抑制的情况下,一定浓度的戴氏虫草菌丝体胞外水溶性多糖和粉被虫草多糖能恢复提高吞噬细胞的吞噬功能,而CPP1却有促进作用;在免疫抑制的情况下,一定浓度的戴氏虫草菌丝体细外水溶性多糖和粉被虫草多糖能恢复提高吞噬功能,它们不仅能促进正常脾活化T淋巴细胞的增殖,而且能恢复环磷酰胺和氢化可的松抑制免疫小鼠脾活化T淋巴细胞的增殖,在合适的浓度下能增高小鼠脾CTL活性,同时在一定浓度下能恢复免疫抑制小鼠脾CTL活性。结论 两者具有增强免疫功能的作用。     

柔毛淫羊藿提取液对小鼠免疫反应影响的体内外观察

经50％甲醇回流处理的柔毛淫羊藿提取液,在体外可强烈地抑制小鼠淋巴细胞对ConA、LPS的增殖反应和小鼠混合淋巴细胞反应(MLR),其抑制率与药物的浓度呈正相关。体内试验,给小鼠腹腔注射淫羊藿提取液,可部分延长同种异体新生鼠心脏移植物的存活期。     

当归多糖对小鼠粒单系血细胞发生的影响

采用造血祖细胞体外培养等技术研究当归多糖(AP)对小鼠粒单系血细胞发生的影响.结果表明:注射AP对正常或骨髓抑制,贫血鼠的粒单系祖细胞(CFU-GM)增殖有明显刺激作用;AP体内、外刺激制备的脾细胞条件培养液,腹腔巨噬细胞培养上清液对CFU-GM增殖具有较高刺激活性;AP体内注射制备的肌条件培养液亦对CFU-GM增殖有较高调控活性;注射AP对骨髓粒单系造血有显著促进作用;并能增高外周血白细胞.提示AP可能通过直接和/或间接途径激活造血微环境中的巨噬细胞、淋巴细胞等,也可刺激肌组织,促进其产生造血调控因子,进而促进多能造血干细胞和CFU-GM增殖分化,这或许是当归"补血"的细胞生物学机理之一.     

巨噬细胞在新生小鼠移植耐受维持和崩溃中的作用

本文采用体外混合淋巴细胞反应(Mixed Lymphocyte Reaction,MLR)与体内细胞过继转移试验进一步对巨噬细胞(Mφ)在新生小鼠移植耐受维持和崩溃中的作用进行了研究。体外MLR中,耐受小鼠的脾脏单层粘附细胞不能重建去粘附细胞的同系正常鼠的MLR,相反呈现出抑制作用。另一方面,正常小鼠的脾脏与腹腔单层粘附细胞却能恢复同系耐受鼠脾细胞的MLR至正常水平。体内实验中,过继转移正常小鼠腹腔Mφ 能恢复同系耐受鼠(切除或未切除脾脏、淋巴结)对同种心移植物的排斥反应。这种作用明显地见于新移植心,而对已耐受的移植心则作用不明显。本文结果提示,耐受鼠Mφ 递呈耐受原功能的缺陷以及Mφ 抑制作用可能是免疫耐受得以维持的重要原因,一旦功能恢复(体内外重建)则耐受崩溃。     

白术多糖对小鼠淋巴细胞功能的调节

研究了白术多糖ＰＡＭ体内及体外对小鼠脾淋巴细胞的调节作用。结果表明：白术多糖ＰＡＭ在一定的浓度范围内能单独激活或协同ＣｏｎＡ／ＰＨＡ促进正常小鼠淋巴细胞转化并能明显提高ＩＬ－２分泌的水平。ＰＡＭ对氢化可的松造成的免疫抑制小鼠淋巴细胞的增殖功能有恢复作用。同时还发现白术多糖ＰＡＭ对淋巴细胞的调节与β－肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素相关。     

红车轴草提取物对小鼠淋巴细胞[Ca2+]i及腹腔巨噬细胞NO分泌和吞噬的影响

目的探讨红车轴草提取物(Trifoliumpratense Leguminosae extract,TLE)体外对小鼠淋巴细胞[Ca2+]i及腹腔巨噬细胞NO分泌和吞噬微球的影响。方法无菌条件下制备小鼠淋巴细胞悬液及小鼠腹腔巨噬细胞悬液;MTT法检测药物对细胞悬液的毒性情况;Fluo-4/AM染色结合流式细胞术分析TLE对小鼠淋巴细胞[Ca2+]i的影响;Griess反应系统检测TLE对脂多糖(LPS)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞NO分泌的影响;1μm与2μm直径的荧光微球结合流式细胞术分析TLE对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响。结果终质量浓度为20、40mg/L的TLE对细胞的毒性小;TLE促进了淋巴细胞的Ca2+内流;TLE抑制了巨噬细胞的NO分泌与吞噬作用,与非TLE组比较P<0.01。结论对淋巴细胞[Ca2+]i及巨噬细胞的NO分泌和吞噬的作用可能是TLE调节小鼠免疫系统的途径。     

蛴螬多肽对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的观察蛴螬多肽提取物对免疫抑制小鼠的免疫功能的影响。方法采取蛋白酶水解提取蛴螬多肽,电泳确定相对分子质量大小,然后每天给小鼠灌服不同剂量多肽连续20 d,除对照组外其余小鼠在实验结束前连续3 d腹腔注射环磷酰胺,试验结束小鼠称体质量、采血、无菌操作制备脾脏细胞,体外培养添加脂多糖和刀豆蛋白A诱导细胞分化,采用MTT和Griess法检测细胞增殖率和NO分泌量;分光光度法和流式技术检测血清溶血素及巨噬细胞吞噬功能,迟发型超敏反应分析免疫原性。结果酶解提取蛴螬多肽质量浓度为37.01 mg/ml,提取率为31.63%,Mr在8 000～9 000。模型组小鼠脾脏肝脏胸腺指数显著低于对照组和蛴螬组,小鼠脾脏和骨髓T、B淋巴细胞存活率及NO分泌量明显低于对照组和蛴螬组,其中骨髓B淋巴细胞存活率显著高于T淋巴细胞,但脾脏和骨髓T淋巴细胞NO分泌量高于B淋巴细胞;对照组和蛴螬多肽组小鼠溶血素吸光度值显著高于模型组,随着蛴螬多肽剂量增加溶血素含量逐渐提高,但不存在剂量效应关系;蛴螬组小鼠血液白细胞数均高于模型组,随着剂量增加白细胞数提高;中高剂量蛴螬多肽组小鼠耳肿胀度高于模型组,随着蛴螬剂量增加耳肿胀度显著增加,存在剂量效应关系;蛴螬组小鼠腹腔骨髓脾脏巨噬吸光度值高于模型组,随着蛴螬多肽剂量增加吸光度值提高,存在剂量效应关系;流式细胞技术检测结果蛴螬组巨噬细胞吞噬鸡红细胞荧光强度强于模型组,巨噬细胞吞噬鸡红细胞阳性细胞数不明显高于模型组,结果提示巨噬细胞吞噬能力强。结论蛴螬多肽具有明显增强免疫抑制小鼠免疫功能的作用。