电泳制备家蝇幼虫抗菌肽及其性质

通过体壁损伤法诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,透析浓缩处理,后经Tricine SDS PAGE得到诱导前后家蝇幼虫血淋巴中蛋白差异表达带,将该条带电泳回收,复性,抗菌活性检测等步骤,分离纯化得到3种抗菌肽:MDL 1、MDL 2、MDL 3.研究结果表明:MDL 1分子中富含Gly,相对分子质量为6200,对革兰氏阴性菌E.coli有较强抗性;MDL 2分子中富含Pro,相对分子质量为11000,对革兰氏阴性菌E.coli和革兰氏阳性菌S.aureus均有抗性;MDL 3分子中富含Gly,相对分子质量为14000,对革兰氏阳性菌S.aureus有较强抗性;3种抗菌肽具有很强的温度耐受性,均没有凝血活性和溶血活性.同时电泳制备抗菌肽的实验方法为此类微量生物活性物质的分离纯化提供了有效的途径.     

荧光光谱分析家蝇幼虫抗菌肽MDL-2的结构特性

研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL-2的荧光光谱和淬灭剂对內源性荧光的影响.家蝇幼虫抗菌肽MDL-2在280 am波长的激发光时,荧光光谱为Tyr残基和7rp残基共同提供,KI不能淬灭抗菌肽MDL-2的Trp残基的荧光,而Acr能淬灭几乎所有的Trp残基的荧光(f=0.74),说明Trp残基不是位于抗菌肽分子的表面,而是位于分子的内部.     

设计天蚕素抗菌肽在E．coli中的表达及活性鉴定

为了研究天蚕素抗菌肽的构效关系,进一步提高其抗菌活性,收集并整理了62条天蚕素,通过生物信息学比对(blast),发现其中含有大量保守序列.在此保守序列的基础上,根据天蚕素结构特征,设计了4条抗菌肽.将设计抗菌肽的基因克隆到载体PUC19上,在大肠杆菌JM109中融合表达目的多肽,并促其形成包涵体.包涵体洗涤纯化后,用溴化氰裂解除去融合蛋白质,抑菌圈法测定其抗菌活性,结果表明其中抗菌肽AMP-CecC具有较强的抑菌活性.     

人脐带间充质干细胞对耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性形成的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）体外对耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPA）耐药性形成及对OprD2基因的影响。 方法本实验设立3个组,实验组为hUCMSCs组,对照组为细胞对照组（即人肺成纤维细胞组,NHLF组）和空白对照组。次抑菌浓度肉汤诱导PA耐药传导过程中,hUCMSCs组和NHLF组分别加入其与PA共培育所得的上清液,空白对照组加入细胞培养液,观察3组诱导耐药所需代数以及抑菌圈的大小。诱导耐药前后分别采用K-B法及real-time PCR法测定PA对常见抗菌药物的敏感性及OprD2基因的表达量。 结果经次抑菌浓度的亚胺培南诱导后,hUCMSCs组PA耐药性的出现较NHLF组及空白对照组延迟。NHLF组和空白对照组PA于诱导的第17代出现亚胺培南耐药,而hUCMSCs组PA于第19代出现耐药性。real-time PCR结果显示,诱导耐药后PA中OprD2表达量较诱导前出现减少或消失。其中hUCMSCs组PA OprD2的表达量减少至诱导耐药前的10.96%,而NHLF及空白对照组OprD2无表达,即诱导后出现OprD2基因缺失。 结论人脐带间充质干细胞具有延迟PA耐药性形成的作用,其机制可能是通过分泌抗菌肽LL-37和人β防御素-2从而抑制OprD2表达的减少,而外膜蛋白OprD2表达量减少或缺失是引起PA对亚胺培南耐药的原因。     

木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白的纯化

热海栖热袍菌Thermotogamaritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的耐高温和热稳定性的木聚糖酶B具有很好的工业应用前景.利用PCR技术将嗜热产乙醇菌T.maritima编码高度热稳定性木聚糖酶的基因克隆至原核表达载体pET-20b,使之与组氨酸标签融合,并在大肠杆菌JM109(DE3)中得到了高效表达.最后采用金属Ni2+螯和层析柱对基因表达产物进行了纯化.     

半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件

从嗜热脂肪芽孢杆菌 (IAM 110 0 1)中克隆出编码热稳定的半乳糖苷酶蛋白基因bgaB ,构建具T7强启动子的pET 2 0 (b) bgaB质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 .经IPTG诱导后 ,重组菌周质中乳糖酶酶活达到 0 .12U /mL ,胞内酶活为 1.35U /mL ,比酶活为 6 .6 6U/mg蛋白 ,比酶源菌产生的酶活提高 5 0倍 .通过对IPTG诱导时机、诱导浓度和诱导时间的优化研究 ,重组菌产生的比酶活进一步提高至酶源菌的 90倍 .     

黄芪在抗菌肽Brevinin-2Ta治疗创面感染耐药鲍曼不动杆菌中的增效机制研究

目的：探讨中药黄芪在抗菌肽Brevinin-2Ta治疗创面感染耐药鲍曼不动杆菌中的增效作用及机制。方法：选取SD大鼠60只,采用皮肤切开注菌法建立皮肤感染泛耐药鲍曼不动杆菌溃疡模型,将模型大鼠随机分为3组：空白组、抗菌肽组及抗菌肽+黄芪组,分别于造模成功后第3天、第15天取大鼠伤口观察愈合情况,取伤口处组织,在电镜下观察细菌形态,并用荧光PCR法测定carO基因表达水平。结果：用药后第3天,空白组的carO相对定量为（28.770±8.829）;抗菌肽组carO相对定量为（14.721±3.879）;抗菌肽+黄芪组carO相对定量为（11.768±2.752）。抗菌肽组、抗菌肽+黄芪组carO表达较空白组明显受抑制（P <0.05）,而抗菌肽组与抗菌肽+黄芪组carO表达无明显差异（P>0.05）。用药后第15天,空白组carO相对定量为（28.113±4.996）;抗菌肽组carO相对定量为（17.490±2.648）;抗菌肽+中药组carO相对定量为（11.082±2.476）,空白组、抗菌肽组及抗菌肽+黄芪组间差异均有统计学意义（P <0.05）。用药后电镜下显...     

群落空间结构影响多种微生物感染伤口中金黄色葡萄球菌对药物的敏感性

群落间的相互作用可塑造群落功能是微生物生态的一个特点。微生物在感染人类, 尤其是人类的慢性创面时, 微生物群落间相互作用可能导致人类患更严重的疾病。金黄色葡萄球菌是人类慢性创面感染中最常见的微生物, 与在同一伤口中出现的铜绿假单胞菌具有合作和竞争关系, 但目前这种关系仅在体外研究中被证实。该研究在小鼠慢性溃疡创面中描述了金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的相互影响, 两者在创面中以较高的细菌密度共存, 并在高分辨率成像下呈斑块状分布, 占伤口体积的5%～25%。进一步地, 研究者们在毫米和微米2个尺度上观察了创面中细菌群落形成的空间结构, 结果显示该结构很大程度上是由铜绿假单胞菌产生的抗菌剂2?庚基?4?羟基喹啉N?氧化物介导的, 而铜绿假单胞菌产生的另一种抗菌剂绿脓素则对该结构的形成没有影响。另外, 这种细菌群落的精确空间结构可以增强金黄色葡萄球菌对氨基糖苷类抗生素的耐受性, 但不会增强其对万古霉素的耐受性。该研究结果为金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌共感染创面的生物地理学提供了机制上的解释, 并暗示细菌群落的精确空间结构可能是创面感染中抗菌药物耐受性的关键决定因素。     

健康志愿者自体富血小板凝胶体外抑菌作用研究

目的自体富血小板凝胶(autologous platelet-rich gel,APG)作为一种新技术和有希望广泛用于临床的抗感染治疗方法,其作用机制尚不清楚。许多研究表明血小板具有抗菌的多功能属性,可直接与病原微生物作用将病原体从血液中清除。通过体外实验评价APG是否具有抑菌作用。方法抽取17例健康志愿者外周静脉血,制备富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)、贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP)及APG。通过抑菌实验观察APG、PRP以及加入夹竹桃麻素(apocynin,APO)的APG(APG-APO)对金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌及铜绿假单胞菌是否有抑菌作用。结果APG和APG-APO对金黄色葡萄球菌的生长具有明显抑制作用,最大抑制作用出现在前4h,抑菌作用分别可持续至24h和8h。APG与PRP、PPP相比,24h内均具有显著的抑菌作用(P0.05);在前8h APG与APG-APO的抑菌作用差异无统计学意义(P0.05),12h后差异有统计学意义(P0.05);APG-APO与PRP、PPP相比在前4h具有显著的抑菌作用(P0.05),6h后差异无统计学意义(P0.05)。各时间点APG和APG-APO对大肠埃希杆菌的抑菌率分别为27.36%～52.97%和18.82%～51.52%,对铜绿假单胞菌的抑菌率均在35%以下,与PRP比较差异均无统计学意义(P0.05);各时间点PRP对金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌及铜绿假单胞菌的抑菌率均在15%以下。结论APG对金黄色葡萄球菌有抑菌作用,抑菌作用可能来自于血小板;对大肠埃希杆菌及铜绿假单胞菌无明显抑菌作用。PRP对金黄色葡萄球菌、大肠埃希杆菌及铜绿假单胞菌均无明显抑菌作用。     

CDMP-1促进成人骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的 探讨软骨源性形态发生蛋白1(CDMP-1)诱导成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的可行性及最佳诱导浓度.方法 分离培养BMSCs,免疫荧光法检测BMSCs表面CD34,CD45,CD105表达.采用含0、10、50、100ng/ml CDMP-1的软骨诱导液诱导培养BMSCs 21 d,倒置显微镜观察细胞形态变化;RT-PCR检测不同浓度CDMP-1组细胞Ⅱ型胶原和Aggrccan表达:免疫组化检测Ⅱ型胶原表达;番红O和阿利新蓝染色检测蛋白多糖表达.结果 成人BMSCs呈梭形漩涡状生长,CD44、CD105表达阳性,CD34呈阴性表达.CDMP-1诱导7 d后细胞形态逐渐由长梭形向多边形、多角形转化.不同浓度CDMP-1诱导21 d,Ⅱ型胶原表达量各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);Aggrecan的表达CM组和10 ng组之间差异无统计学意义(P>0.05),其他各组间差异均具有统计学意义(P<0.05).免疫组化检测Ⅱ型胶原表达阳性,阿利新蓝和番红O染色均为阳性.结论 含100 ng/mJ CDMP-1软骨诱导液能有效促进成人BMSCs向软骨表型分化.     

精囊蛋白Semenogelin Ⅰ小分子片段的功能

Semenogelin Ⅰ及其被前列腺特异性抗原水解后的小片段肽具有多种生物学活性,其中抑制精子活力的关键小片段肽备受争议。本文主要对其抑制精子活性、抗菌活性等进行综述,并就目前争议较大之处提出猜想进行解释。深入研究这些肽的作用机制有助于改进人工受精筛选精子的方法,也可能为治疗弱精子症及泌尿系感染提供新的方向。     

中药五谷虫粗提物对感染创面抗菌活性的实验研究

目的 探讨中药五谷虫抗菌物质的提纯方法和抗菌活性.方法 对五谷虫虫体进行匀浆并分离提纯.以金葡菌为指示菌,采用平板法对粗提物进行抗菌活性测定;SDS-PAGE分析纯化过程中蛋白质组成的差异.结果 五谷虫抗菌物质粗提物的抑菌圈直径明显大于对照组,抗菌物质提取物的蛋白质总类以小分子量的蛋白质成分为主.结论 五谷虫的抗菌成分为某种具有抗菌活性的小分子量蛋白肽类物质.     

乳铁蛋白活性多肽的抑菌性能

概述了乳铁蛋白活性多肽的结构、制备方法、抑菌谱、抑菌机理及抑菌活性的影响因素.     

蝇蛆分泌物提取液对感染创面抗菌作用的初步研究

目的 研究丝光绿蝇幼虫分泌物对细菌感染创面的抗菌活性及作用.方法 提取蝇幼虫分泌物,以临床感染创面上分离培养出的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,采用琼脂平板法做抑菌实验,记录对以上细菌的抑制效果,生理盐水和头孢哌酮盐水溶液做对照.结果 蝇幼虫分泌物对分离培养出的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较强的抗菌活性.结论 蝇蛆分泌物对感染创面具有较强的抗菌作用.     

抗菌肽Maximin衍生物的体外杀精效果研究

目的比较抗菌肽Maximin衍生物(M1~M19)的体外杀精效果和细胞毒性作用,筛选有进一步研究价值的候选体外杀精剂。方法利用Sander-Cramer方法评价抗菌肽的体外杀精效果;CCK-8试剂盒测定抗菌肽对Hela-229的细胞毒性,筛选出具有较强杀精作用和低细胞毒性的抗菌肽。结果 19种抗菌肽衍生物中,M1、M7、M11、M15和M17五种抗菌肽在2 000mg/L时均能完全制动精子,其中100%制动精子的最低浓度EC100分别是:M7=M11=2 000mg/L,M1=M15=M17=1 500mg/L;利用Hela-229细胞分析细胞毒性时,M11的细胞毒性明显低于其他4种抗菌肽,表现出较高的安全性。结论对19种抗菌肽衍生物的体外研究表明,抗菌肽M11具有较强的杀精作用,且细胞毒性低,有望成为体外杀精剂的候选药物。     

蛆虫治疗糖尿病足溃疡的临床与实验研究

目的 研究蛆虫对糖尿病足部溃疡创面的清创和抗菌作用.方法 以糖尿病足溃疡创面上分离培养出的金黄色葡萄球菌为指示菌,提取丝光绿蝇幼虫血淋巴分泌物,采用平板法做抑菌实验,头孢哌酮盐水溶液做对照,记录对细菌的抑制效果.对临床上6例糖尿病足部溃疡患者行蛆虫清创治疗,观察创面情况.结果 蝇幼虫分泌物对金黄色葡萄球菌,有较强的抗菌活性.6例糖尿病足部溃疡病例平均治疗12天,创面坏死组织均清除干净,新鲜的肉芽组织生长,创面培养无细菌生长.结论 蛆虫对糖尿病足部溃疡创面,有较强的清创和抗菌作用.     

无机抗菌剂的添加对新型自酸蚀处理剂黏结性能和颜色稳定性的影响

目的:测试无机抗菌剂的添加对新型自酸蚀处理剂ESP黏结性能和颜色稳定性的影响。方法:6种无机抗菌剂分别加入ESP中,测试牛牙釉质粘结强度、边缘封闭性以及粘结样本颜色稳定性的变化。结果:抗菌剂添加比为0.5%对ESP牙釉质剪切强度无不利影响(P>0.05),比例增至2.5%时,黏结强度呈不同程度降低。抗菌剂添加比为0.5%时,仅有一种抗菌剂的添加使冠方微渗漏指数较对照组显著增加(P<0.05)。粘结样本经不同处理以老化1年后颜色参数变化最为显著,但与ESP空白对照相比,抗菌剂添加后的颜色变化仍在临床可接受的范围之内。结论:控制适当的添加比例,5种受试的无机抗菌剂的添加对ESP的黏结性能可无显著影响,对颜色稳定性的影响在临床可接受的范围之内。     

Ⅲ型前列腺炎患者精液参数、锌浓度及抗菌活性的变化

目的:探讨Ⅲ型前列腺炎(CP/CPPS)患者精液常规参数、锌浓度及抗菌活性的关系。方法:对60例CP/CPPS患者和20例健康男性进行精液常规参数、锌浓度及抗菌活性的检测。结果:CP/CPPS患者精液液化时间、精子活力、精浆抗菌活性及精浆锌离子浓度与对照组相比,差异有显著性(P均<0.01)。CP/CPPS患者精子活力与精浆锌离子浓度间有显著相关性(r=0.272,P=0.015)。精浆抗菌活性与精浆锌离子浓度间有显著相关性(r=0.449,P<0.01)。结论:CP/CPPS患者精液液化时间延长,精子活力下降,精浆锌浓度和抗菌活性降低。精浆抗菌活性与精浆锌浓度、精子活力间有显著相关性。     

银离子抗菌凝胶用于Ⅱ度烧伤创面的疗效观察

目的:观察银离子抗菌凝胶应用于烧伤创面的临床效果。方法:选择烧伤深度基本一致,面积相近、相邻部位或对称部位的浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面患者60例,随机分为两组。试验组应用银离子抗菌凝胶敷料,对照组外用1%磺胺嘧啶银乳膏,对两组同期愈合率、愈合时间、抗菌性三方面进行对比。结果:两组药物在浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面的同期愈合率、愈合时间方面比较无明显差异。在抗菌性方面银离子抗菌凝胶明显优于磺胺嘧啶银软膏。结论:银离子抗菌凝胶与其他形式银制剂相比具有良好的抑菌作用。