“智三针”电针刺激对老年髋关节置换术后认知功能的影响

【目的】探讨"智三针"电针刺激对老年髋关节置换术后认知功能的影响。【方法】纳入择期行全髋关节置换术老年患者120例,按手术时间随机分为电针治疗组(治疗组)和对照组,每组60例。对照组给予术后临床常规治疗,治疗组在对照组术后临床常规治疗的基础上,于术毕前30 min及术后第1、2天行"智三针"电针刺激疗法。记录2组麻醉停止后自主呼吸恢复时间、唤之睁眼时间、意识完全恢复时间、拔管时间及苏醒评分(Steward评分)情况;采用认知功能恢复质量量表(PQRS)评估2组患者术后第1、2、3、5、7天的认知功能评分,并统计术毕第1、2、3、5、7天认知功能障碍(POCD)发生率。【结果】(1)治疗组唤之睁眼时间、意识完全恢复时间、拔管时间均较对照组缩短(P0.01),苏醒评分(Steward评分)也显著高于对照组(P0.01)。(2)术毕第1、2、3、5、7天,治疗组术后PQRS量表评分均明显高于对照组(P0.01)。(3)术后第1、2、3、5、7天,治疗组的POCD发生率均低于对照组,除术后第7天外,其余各时间点差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】"智三针"电针刺激能改善和提高老年髋关节置换术后认知功能,其术后认知功能障碍的发生率较低。     

低剂量盐酸罗哌卡因臂丛神经阻滞用于高龄肩关节脱位的临床体会

目的：观察低剂量盐酸罗哌卡因用于高龄肩关节脱位的临床效果和安全性。方法：92例ASAⅠ-Ⅱ级肩关节脱位患者随机分为两组，采用臂丛肌间沟阻滞，低剂量组注入0.25%盐酸罗哌卡因8mL，对照组注入0.25%盐酸罗哌卡因20mL，观察复位效果，同时对感觉和运动神经阻滞进行评估，记录神经阻滞前后血压心率变化和不良反应发生情况。结果：两组患者复位都易于成功，但小剂量组恢复快，不良反应少。结论：低剂量盐酸罗哌卡因臂丛神经阻滞用于高龄肩关节复位是一种安全、有效的方法。     

抗A型肉毒毒素鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备与鉴定抗A型肉毒神经毒素重链C端（ heavy chain of botulinum neurotoxin serotype A, BoNT／AHc）特异性鼠单克隆抗体。方法通过纯化BoNT／AHc抗原、免疫BALB／c小鼠并建立杂交瘤细胞以制备鼠单抗,用ELISA、Western印迹实验和抗体分型试剂盒进行分析鉴定,并通过ELISA检测鼠单抗与BoNT／AHc突变体结合,初步鉴定其在BoNT／AHc的结合表位。结果得到纯度较高的BoNT／AHc抗原,制备了4株特异性鼠单抗1A4、3H3、3H7、5H8。间接ELISA结果显示,单抗细胞上清效价均＞3．0×103;Western印迹检测结果显示,单抗均能与BoNT／AHc特异性结合;抗体亚型鉴定结果为1A4、3H7属于IgG1（Κ）,3H3属于IgM（Κ）,而5H8属于IgG2b （Κ）;叠加ELISA实验表明,4株单抗抗原识别表位相近;用ELISA检测单抗与BoNT／AHc突变体结合实验结果初步确定了4株单抗与BoNT／AHc的结合表位。结论对抗A型肉毒毒素鼠源性抗体完成了制备和鉴定,为肉毒毒素中和抗体的开发与阐明中和抗体的表位奠定了基础。     

A型肉毒神经毒素轻链人源性抗体的筛选、表达与检测

目的 从全合成人源性噬菌体单链抗体库中筛选抗A型肉毒神经毒素轻链(BoNT/A LC)特异性单抗,并进行全抗的表达、纯化与鉴定.方法 根据大肠杆菌密码子偏好性优化并合成BoNT/A LC序列,克隆至pTIG质粒,转化BL21(DE3) plysS感受态细胞,IPTG诱导表达后Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白.利用纯化的轻链蛋白从噬菌体抗体库中经“吸附-洗脱-扩增”程序淘选富集抗体并进行特异性筛选.PCR扩增抗体轻重链可变区分别连入L293-CL和H293载体,瞬时共转染293-F细胞,培养上清经Protein A柱纯化,通过SDS-PAGE、Western印迹和ELISA检测抗体纯度和特异性.结果 可溶性表达的BoNT/A LC占全菌蛋白的36.8％,纯化后蛋白纯度达99％.从噬菌体抗体库中筛选到10株单抗,选择其中特异性最好的两株单抗Lab1、Lab2制备了全抗,Western印迹和ELISA检测结果显示其可特异性识别结合BoNT/A LC蛋白.结论 该研究得到了两株特异性的BoNT/A LC抗体,可能用于A型肉毒毒素检测和肉毒中毒治疗.     

破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 一株抗破伤风毒素鼠源单克隆抗体的制备与鉴定.方法 从实验室前期以破伤风类毒素为抗原筛选得到的6株稳定细胞株中选取4E12进行制备及鉴定,首先将4E12细胞株扩大培养后腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,经Protein G柱和PD10脱盐柱两步纯化鼠源单抗;其次通过SDS-PAGE电泳检测抗体纯度并通过分型试剂盒鉴定抗体轻重链亚型,免疫印迹法鉴定抗体结合区域及表位类型,非竞争ELISA法测定抗体亲和力常数以及小鼠中和实验评价抗体中和活性.结果 获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4E12,其细胞培养上清效价为4×103,抗体轻重链分别为κ型和IgG1型,CDR3序列分别为SQSTHVPPT和ARKGTGTGFNY;4E12腹水抗体效价为3.2×104,抗体经纯化后纯度＞95％,以线性表位与TeNT/Hc结构域特异性结合,两者的亲和力常数为3.6×10-10 mol/L,小鼠中和实验结果显示,4E12抗体可部分中和破伤风毒素.结论 筛选到一株高亲和力的鼠源单抗,为破伤风毒素检测及中和抗体研发奠定了基础.     

甲基营养菌MP688甲醛脱氢酶的表达、纯化及酶活性质

目的 克隆甲基营养菌MP688甲醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase)基因adhA,在大肠杆菌中表达、纯化,并研究其酶学性质.方法 PCR扩增甲醛脱氢酶基因adhA,构建表达载体pTIG-AdhA,在BL21(DE3)中诱导表达,经Ni+亲和层析纯化,利用AHMT法进行体外酶学性质分析.结果 成功构建甲醛脱氢酶表达载体,在大肠杆菌中AdhA表达量达总蛋白的50%以上,其中大部分表达产物可溶,纯化得到纯度为95%的甲醛脱氢酶.甲醛脱氢酶能以甲醛为底物,最适pH为7.0,最适反应温度为30℃,室温保存6 d后酶活约保留60%.结论 在大肠杆菌中实现了甲基营养菌甲醛脱氢酶的可溶表达,在所考察的底物中,甲醛为该酶的最适底物.     

A型肉毒毒素双抗夹心ELISA检测方法的建立

目的：建立A型肉毒毒素双抗夹心ELISA检测方法。方法：以高亲和力人源抗体ML01作为捕获抗体，以小鼠腹水诱生法制备的鼠源抗体BAS46为检测抗体，HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗，建立A型肉毒毒素双抗夹心ELISA检测方法，并评价其灵敏度、重复性、检测线性范围和加样回收率等。结果：A型肉毒毒素双抗夹心ELISA检测法的灵敏度为2.56 pg/ml，变异系数为3.183%～12.030%，线性范围为0.244～62.500 ng/ml，回收率为90%～110%。结论：成功建立了A型肉毒毒素双抗体夹心ELISA检测方法，该方法快速、有效。