重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化的影响

目的探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9(Adv-BMP-9)诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响。方法将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,分别感染小鼠胚胎肝干细胞,诱导其分化,然后采用半定量PCR、Real-time PCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18(CK18)等肝细胞标志物的表达。结果半定量及Real-time PCR检测,诱导7 d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△Ct值分别为(0.027±0.003)、(0.023±0.002),较GFP对照组(0.103±0.018)显著下降,ALB的mRNA表达△△Ct值分别(0.041±0.005)、(0.031±0.001),较GFP对照组(0.013±0.002)明显升高,CK18的mRNA表达△△Ct值分别(0.094±0.003)、(0.083±0.007),较GFP对照组(0.040±0.008)明显升高(P<0.05);细胞免疫荧光染色,诱导7 d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白,而对照组几乎无表达;荧光素酶报告基因检测,诱导1、4、7 d的BMP-9组、HGF组的ALB表达荧光素酶A值分别[(5 509.35±213.08),(33 198.14±666.39),(50 815.03±1 730.75)]、[(5 539.25±132.62),(31 400.71±2 622.39),(49 088.28±1 868.03)],较GFP对照组(4 732.49±68.22),(9 407.71±487.84),(20 894.83±1 100.54)明显升高(P<0.05)。结论 BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用,并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当。     

FGF-2真核表达质粒的构建及对C3H10细胞增殖及成软骨分化的影响

目的：构建成纤维细胞生长因子-2（fibroblast growth factor-2,FGF-2）真核表达质粒,检测其对小鼠间充质干细胞C3H10增殖、成骨及成软骨分化作用的影响。方法：以质粒pAd-Trace-FGF-2为模板,PCR扩增目的基因FGF-2,经BglⅡ、SalⅠ双酶切后连接至pIRES2-EGFP表达载体中获得pIRES2-EGFP-FGF-2真核表达质粒,脂质体转染到C3H10细胞中,另设pIRES2-EGFP空载体转染对照组和空白细胞对照组。RT-PCR及Western blot法验证各组FGF-2的表达水平,MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖活力及细胞周期分布,RT-PCR检测成骨及成软骨、Wnt信号通路相关基因的mRNA水平表达变化,Western blot法检测Ⅱ型胶原（collagenⅡ,ColⅡ）的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨基质的表达。结果：重组表达质粒pIRES2-EGFP-FGF-2经双酶切及测序证实构建正确;质粒转染C3H10细胞后,其FGF-2基因的mRNA和蛋白水平表达较2个对照组明显增高,细胞增殖活力明显增高（P<0.05）,软骨相关标志物Ⅰ型胶原（collagenⅠ,ColⅠ）、ColⅡ、蛋白聚糖（aggrecan,ACAN）mRNA转录水平较2个对照组均明显增高（P<0.05）,骨钙蛋白（osteocalcin,OC）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）mRNA转录水平无明显升高（P ＞0.05）,Wnt5a及Fzd8 mRNA转录水平降低（P<0.05）,FGF-2转染组细胞甲苯胺蓝染色呈现紫红色异染。结论：成功构建FGF-2基因重组真核表达质粒,FGF-2过表达可提高C3H10细胞的增殖活力,对C3H10细胞有成软骨效应,但短期成骨效应不明显,可能与下调Wnt5a及受体Fzd8的表达有关。     

后路全脊椎切除术治疗儿童脊柱后凸畸形(附10例报告)

目的 总结采用后路全脊椎切除术治疗儿童脊柱后凸畸形的临床经验、技术要点和疗效.方法 回顾性分析2010年7月-2011年8月在重庆医科大学附属儿童医院骨科接受后路一期全椎体切除+重建治疗的10例脊柱后凸畸形患儿的病例资料,其中男3例,女7例,年龄6～15岁,平均11岁,术前脊柱后凸Cobb角76°～112°,平均97.8°.2例术前有神经系统症状,Frankel分级C级1例、D级1例.所有患儿均行后路一期全脊椎切除、经椎弓根固定、植骨融合术.结果 所有患儿手术顺利,手术时间240～560min,平均373min;出血量550 ～ 2200ml,平均1115ml;术后后凸Cobb角10°～ 43°,平均29.3°,矫正率70.0％;患儿的躯干和双肩失平衡均得到显著改善,腰背部疼痛有明显缓解;术前有神经系统症状的2例患儿术后Frankel分级均恢复到E级.结论 后路全脊椎切除+椎弓根钉-棒系统内固定术矫正儿童脊柱后凸畸形安全有效,并可达到稳定的短节段内固定及优良的融合效果.     

三维CT在儿童脊柱侧弯畸形手术矫正中的应用

目的探讨三维CT在儿童脊柱侧弯畸形手术矫正过程中的应用价值。方法 55例儿童脊柱侧弯(其中特发性脊柱侧弯42例,先天性脊柱畸形13例),术前采用俯卧位三维CT扫描,对椎弓根钉进针点进行三维定位,同时测量相应脊椎椎弓根松质骨宽度、进针长度,以及椎体内倾角、旋转角、矢状角,对手术置钉进行精确评估。术后三维CT扫描评估置钉准确率并测量脊柱冠状位主弯Cobb′s角平均矫正度数。结果 55例儿童脊柱侧弯患儿共置入螺钉450枚,置钉准确率为98.22%;术前冠状位CT测量主弯Cobb′s角平均为62.3°(43.0°～108.6°),术后冠状位CT测量脊柱侧弯主弯Cobb′s角平均为16.5°(2.0°～60.7°)。结论应用三维CT扫描定位进针点,可指导术中准确安置椎弓根钉,有利于提高手术操作安全,减少人为的误差,防止和减少并发症的发生。     

Ilizarov牵拉技术治疗儿童外伤性马蹄内翻足

目的 探讨Ilizarov外固定架结合有限手术治疗儿童外伤性马蹄内翻足的方法和疗效. 方法 选择2006年1月-2012年6月收治的40例43足外伤性马蹄足患者,采用Ilizarov外固定架结合有限的软组织松解术治疗26例(28足)、截骨术治疗14例(15足),治疗前后分别按国际马蹄足研究组(international clubfoot study group,ICFSG)评分标准即功能(36分)、形态(12分)、影像(12分)三个方面评分. 结果 患者均获得随访,时间0.5-6年,ICFSG评分:优28足,良10足,中4足,差l足,优良率达88％,显示外伤性足畸形获得良好矫形,足负重行走功能良好,复发率低. 结论 传统开放手术治疗儿童外伤性马蹄足创伤大、疗效差,Ilizarov微创牵拉技术可弥补其缺点,应用Ilizarov外固定架结合有限手术在治疗儿童外伤性马蹄足中可取得良好疗效.