淋巴细胞抗原6E研究进展

淋巴细胞抗原6E(LY6E)是LY6/uPAR超家族成员之一,通过其C端的糖基磷脂酰肌醇锚定在细胞膜表面.LY6E在T细胞发育和活化、肿瘤细胞生长和迁移以及病毒感染中发挥着重要作用.LY6E广泛表达于人的多种组织器官中,但与正常细胞相比,其在多种癌细胞中的表达量均明显升高.因此,LY6E被视为治疗恶性肿瘤的潜在靶点,目前靶向LY6E的抗体药物偶联物DLYE5953A已完成临床I期试验.此外,LY6E能影响冠状病毒、人类免疫缺陷病毒、甲型流感病毒和登革热病毒等多种病毒感染,其第36位的亮氨酸在病毒感染过程中发挥着重要作用.对LY6E的深入研究,可为人类应对恶性肿瘤和病毒感染治疗提供新的策略.该文将对LY6E的生物学功能进行综述.     

利用CRISPR/Cas9系统构建HepG2细胞THRAP3基因敲除细胞系

目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除人类肝癌细胞HepG2中的甲状腺激素受体相关蛋白3(THRAP3)基因,构建THRAP3基因敲除细胞系.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性靶向THRAP3基因第3个外显子相关序列的多条小向导RNA,通过T7核酸内切酶筛选出切割效率最高的载体,构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒.测序鉴定后,将重组质粒转染至HepG2细胞中,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选细胞株,挑取单克隆,再用PCR、测序等方法鉴定细胞基因型,免疫印迹方法鉴定细胞THRAP3敲除效果.使用高通量测序的方法进行基因表达分析.用流式细胞仪检测基因敲除对细胞周期的影响,CCK-8试剂盒检测细胞增殖.结果 成功构建pSpCas9-THRAP3真核重组表达质粒,筛选出特异性敲除THRAP3基因的细胞系,验证了THRAP3敲除对细胞周期以及细胞增殖的影响.结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建并获得了THRAP3基因敲除细胞系并初步探究了THRAP3基因功能.