抗HPV16E6与抗HPV18E6核酶的设计,表达与活性鉴定

获得特异性抗人乳头瘤病毒１６型和１８型Ｅ６基因的核酶,用以在基因调控水平防治ＨＰＶ相关性肿瘤,采用计算机软件针对ＨＰＶ１６Ｅ６基因和ＨＰＶ１８Ｅ６基因,设计相应的ｒｉｂｏｚｙｍｅ;体外合成核酶基因后,克隆于原核表达质粒中,将ＨＰＶ１６Ｅ６,ＨＰＶ１８基因片段也克隆入原核表达质粒中,体外转录而得到核酶和病毒ｍＲＮＡ,进行体外切割实验以鉴定核酶的抗性。抗ＨＰＶ１６Ｅ６核酶与抗ＨＢＶ１８Ｅ６核酶（抗１６     

慢病毒载体介导E6AP基因敲低乳腺癌细胞株的构建及其功能检测

目的：构建E6AP基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,并检测其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法利用RNA干扰（RNAi）技术设计并合成两条E6AP基因的siRNA,并将其与siRNA表达载体pSIH-H1连接。经过酶切和测序鉴定成功后,人胚肾细胞293T包装E6AP siRNA的慢病毒,然后感染乳腺癌细胞ZR75-1,建立敲低E6AP表达的稳定细胞株。稳定细胞株建立后通过实时定量PCR（ qRT-PCR）和Western 印迹等方法检测RNAi的干扰效果,并利用细胞生长实验检测E6AP siRNA对乳腺癌细胞生长的影响。结果 DNA测序证明,成功构建了E6AP siRNA的表达载体。实时定量PCR和Western 印迹实验证明,构建的siRNA确能有效抑制E6AP基因的表达,并建立了敲低E6AP表达的稳定细胞株。生长实验表明,E6AP siRNA可有效抑制细胞的生长。结论成功构建E6AP基因的siRNA真核表达载体,转染细胞后能有效地抑制E6AP基因的表达,且抑制细胞ZR75-1的生长。     

新疆维、汉族宫颈鳞癌病变中HPV16E6基因变异分析

目的 分析新疆地区维、汉族妇女宫颈鳞癌组织中HPV16型E6基因的变异情况.方法 从新疆地区5例维吾尔族妇女和5例汉族妇女宫颈活检组织中提取病毒基因组DNA,经反向膜杂交检测确定为HPV16单一感染.采用PCR技术扩增HPV16 E6基因片段,克隆到pUC18-T载体中进行DNA测序.结果 成功克隆了HPV16 E6基...     

食管鳞状细胞癌HPV感染与病毒致癌基因E6关系的研究

目的:研究食管鳞状细胞癌患者在HPV感染与病毒致癌基因E6的关系.方法:采用多重引物PCR和免疫组化技术对104例食管鳞状细胞癌进行HPV DNA和E6蛋白检测.结果:HPV DNA阳性者占50.96%(53/104),其中HPV-16型为49.06%(26/53),YPV-18型DNA5.6%(3/53),HPV6/11DNA7.5%(4/53);混合感染占43.39%(23/53).E6蛋白阳性56例(53.84%),以低分化鳞状细胞癌表达强度最高.结论:提示新疆地区食管鳞状细胞癌中有较高的HPV感染率,HPV16型E6蛋白在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中具有重要的作用.     

HPV E6蛋白调控miRNA-145表达的分子机制及其在宫颈癌侵袭转移中的意义

目的研究宫颈癌细胞中HPV E6蛋白调控miRNA-145表达的分子机制及其在宫颈癌侵袭转移中的意义。方法 Northern-blot方法检测宫颈癌细胞中过表达p53对miR-145表达的影响;检测宫颈癌细胞中敲低HPV E6表达对miR-145表达的影响。Western-blot方法检测过表达HPV E6对内源性及外源性p53表达的影响;检测宫颈癌细胞中敲低HPV E6对外源性p53的表达的影响。应用划痕愈合实验,检测过表达miR-145的HeLa细胞与母本HeLa在细胞迁徙能力上的差异;Trans-well试验观察过表达miR-145的HeLa细胞与母本HeLa在细胞侵袭能力上的差异。结果宫颈癌细胞中过表达p53可显著上调miR-145的表达;过表达HPV E6可降低p53的表达;宫颈癌细胞中敲低HPV E6表达可增强p53的表达,并且可增强双氧水诱导的miR-145表达;过表达miR-145抑制细胞的迁徙、侵袭能力。结论 HPV E6通过抑制p53下调miR-145表达,从而促进宫颈癌细胞侵袭。     

高危型人乳头瘤病毒E6蛋白与hTERT的相互作用研究进展

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）是一类能特异性感染人皮肤和黏膜基底上皮细胞的双链闭合环状DNA病毒。宫颈癌的病因学研究表明,生殖道感染高危型HPV（High-risk HPV,HR-HPV）是宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithel ialneoplasia,CIN）高发的关键诱因。     

eIF4E生物学功能及其在肿瘤中作用研究进展

 随着分子生物学及肿瘤基因组学的研究进展,近年,针对肿瘤的分子靶向治疗进展迅速。肿瘤分子靶向治疗药众多,根据其作用机制可以分为两大类,一类是针对癌基因依赖靶点的靶向治疗^[1],这类药物以引起肿瘤的驱动基因为靶点。另一类针对非癌基因依赖靶点的靶向治疗^[2],这类药物的靶点蛋白在正常细胞中也存在,只是肿瘤细胞为了快速生长增殖对这类蛋白质需求量远大于正常细胞,例如针对分子伴侣热休克蛋白的靶向治疗。肿瘤细胞的生长增值需要大量的蛋白质,研究表明真核生物蛋白质调控相关蛋白异常与肿瘤发生发展有关,因此针对蛋白质翻译调控靶点成为非癌基因依赖靶向治疗的研究热点。而真核细胞蛋白质翻译调控的限速步骤主要在翻译起始阶段,而真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic traslation initiation factor 4E, eIF4E)作为翻译起始阶段的重要调控因子在多种肿瘤中表达异常。本文就eIF4E在肿瘤中的作用及以其作为靶点的分子靶向治疗研究现状给予综述。     

CD44v6蛋白在舌鳞癌组织中的表达及其意义

探讨舌鳞癌中CD44v6蛋白的表达及其对舌鳞癌进展和转移的影响。应用常规ABC免疫组织化学染色技术检测40例舌鳞癌组织中CD44v6的表达,其中包括无淋巴结转移24例及有淋巴结转移16例,舌乳头状瘤12例及正常舌粘膜组织9例。结果显示,舌鳞癌组织中CD44v6阳性率为72.5%(29/40),有淋巴结转移者CD44v6高表达的阳性率为81.3%(13/16),无淋巴结转移者CD44v6高表达的阳性率为41.7%（10/24）;舌乳头状瘤中仅有2例阳性高表达,阳性率为16.7%(2/12);而正常舌粘膜组织中未见有CD44v6蛋白的表达,研究表明,对舌鳞癌组织进行CD44v6蛋白的检测,有助于预测其进展程度和对淋巴结转移的诊断 。     

抗原特异性免疫治疗对过敏性鼻炎的疗效评价

目的探讨抗原特异性免疫治疗(STT)对过敏性鼻炎的疗效及作用机制。方法将豚草致敏的季节性过敏性鼻炎患者132例随机分为治疗组(STT组，n=68)、对照组(症状性治疗组．ST组,n=64)，另选40例健康人为健康组。用豚草变应原进行季节前6个月的抗原特异性免疫治疗，疗程为3年。分别测定各组细胞因子IL-4、IL-4，IEN-γ的含量．血清sIgF、TlgE、ECP、IgG水平和外周血嗜酸性粒细胞(Eos)计数。比较STT组和ST组治疗前、后上述各指标及肺功能、鼻炎症状评分和皮肤试验指数的变化。结果与ST组比较，ST组血清TIgE、ECP水平，血Eos计数．细胞因子IL-4、IL-5水平均明显下降(P＜0．01)，而IgG和lFVy含量明显上升(P＜0．01)。两组sIgE水平差异无统计学意义(P＞0．05)。STT组临床控制30．88％，显效41．18％。好转20．59％，无效7．35％；其中出现轻发不良反应的占16．18％。ST组治疗前、后上述各种参数无明显改变．其中25％(16/64)的过敏性鼻炎患者在第3年发生哮喘。结论SIT能明显改善过敏性鼻炎的临床症状和相关实验室指标．是治疗过敏性鼻炎的有效方法之一。     

肿瘤-睾丸抗原研究进展

肿瘤-睾丸抗原又称CT抗原,是一类在多种肿瘤组织中表达而在正常组织中除睾丸外不表达的抗原,因而是很有前途的肿瘤疫苗候选抗原.本文就目前肿瘤-睾丸抗原的定义、分类及其在肿瘤组织及正常组织中表达的特点和作为疫苗的临床研究进展作一综述.     

抗Rh（D）抗体制备的研究进展

RhD抗原是表达在人类红细胞表面的血型抗原,其在免疫原性和临床上的应用仅次于ABO血型系统,相应的抗Rh（D）抗体在血型鉴定和预防新生儿溶血等方面均具有重要意义。传统的抗Rh（D）多克隆抗体来自健康人的血清,由于来源受限和血浆制品的安全问题,人们开始了抗Rh（D）的单克隆抗体和基因工程抗体的研究。国外研制的抗Rh（D）的单克隆抗体已成功用于血型鉴定,但到目前为止,还没有一个单克隆或者基因工程抗Rh（D）抗体作为多克隆抗Rh（D）抗体的替代品,在临床上用于预防Rh（D）免疫和新生儿溶血。本文对抗Rh（D）抗体制备的研究进展进行了综述。     

红细胞血型抗原化学修饰的研究进展

采用化学修饰方法制备免疫原性低的红细胞，有可能成为目前解决临床输血反应的一个发展方向。本文综述了mPEG化学修饰红细胞血型抗原采用的工艺以及化学修饰对红细胞形态、结构和功能影响的研究进展。     

炭疽毒素受体及其与保护性抗原结合机制的研究进展

本文阐述了炭疽毒素的细胞表面受体研究及其与保护性抗原结合分子机制等方面的进展。到目前为止，共发现两种炭疽毒素受体，分别由TEM8和CMG2基因编码。炭疽毒素受体的发现和鉴定时炭疽的病理学研究具有重要的意义，而且体外实验发现的受体与毒素的高亲和力也为受体本身作为炭疽的治疗剂带来了希望。CMG2和PA结合状态晶体结构的解析使我们能够对毒素进入细胞质过程的分子细节有所推论。所建立的理论模型为研究其他类型穿透细胞膜发挥作用的毒素的作用过程提供了重要的参考。     

前列腺特异膜抗原的研究进展

前列腺特异膜抗原（prostate－specific membrane antigen,PSMA）是存在于前列腺细胞膜上的组织特异性抗原,因其在前列腺癌,尤其是激素难治性前列腺癌及转移灶中的高表达而具有重要的临床意义。本文综述了PSMA的生物学特性及其在前列腺癌诊断和治疗中的研究进展。     

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎是一种类似于甲型肝炎的急性病毒性疾病。介绍了戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）在基因结构、基因变异、抗体和ＲＮＡ检出以及疫苗基础研究中的重要进展。     

干细胞研究进展

干细胞是近年来医学研究的最热门课题之一 ,由于它对疾病防治潜在的重要性 ,特别是用于组织器官移植的可能性 ,以及伦理上的争议 ,因此引起了社会各界广泛的关注。 1981年Ｅｖａｎｓ等[1] 首次成功地从小鼠胚泡内层细胞团中分离培养出胚胎干细胞(ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ) ;1998年 ,Ｔｈｏｍｓｏｎ等[2 ] 首次培养出人的胚胎干细胞 ;同年 ,Ｓｈａｍｂｌｏｔｔ等[3 ] 首次从 5～10周胎儿的性腺嵴中培养出人的胚胎生殖细胞 ,目前正研究在体外培养胚胎干细胞并使其直接分化成人类组织 (如胰岛、心肌等 ) ,从而为器官或组织移植的长…     

miRNA功能研究进展

miRNA是一类长度为20~25nt的小分子非编码RNA。在线虫、小鼠、人、植物等多种生物中已发现了数百种miRNA。无论在低等的线虫还是在高等的哺乳动物中，miRNA都起着调控基因表达的重要作用。生物信息学分析表明人类全部基因的三分之一都受到miRNA的调控。这表明，miRNA分子实际上是基因调控网络中的核心成分。近来研究发现miRNA与人类的某些疾病密切相关。本文对miRNA分子功能及其研究方法的进展做一概述。     

硝酸酯偶联药物的研究进展

一氧化氮作为体内重要的信使分子和功能分子，参与众多的生理病理过程。随着对体内一氧化氮功能的研究与认识的深入，出现了新型的硝酸酯与非甾体抗炎药、糖皮质激素及熊去氧胆酸等相偶联的药物，本文就此类药物的研究背景、作用机制及临床应用前景等作一综述。     

毛发移植进展

目的:综述毛发移植的研究进展。方法:采用文献回顾和综合分析方法。结果:毛发移植有许多新的术式、新设备出现,毛发移植的基础研究已达到分子和基因水平,然而毛囊干细胞的研究和毛囊体外培养的临床应用还很不成熟。结论:毛发组织工程学的重大突破将提供更好的毛发移植技术,对整形科技极具现实意义。