负载紫红质通道蛋白2重组腺病毒的包装及功能鉴定

背景 紫红质通道蛋白2(ChR2)是从单细胞绿藻莱茵衣藻上分离的一种光敏感通道蛋白,可作为光刺激神经细胞的手段,与电、磁和超声波相比,光在时间和空间上对神经细胞的刺激将更精确. 目的 构建负载ChR2基因的重组腺病毒,并鉴定其功能.方法 将人胚肾293( HEK293)细胞在含质量分数10％胎牛血清的DF12培养基中进行培养及传代.腺病毒穿梭质粒pSB291-hCHR2-GFP与腺病毒包装质粒pBHGlox △E1,3 Cre共转染HEK293,包装得到少量负载ChR2基因的重组腺病毒(Ad-ChR2),经HEK293细胞扩增、CsCl梯度离心,Tris-HCl透析后得到纯化Ad-ChR2.获取4只出生1d的清洁级Long Evans大鼠视皮层组织,用组织块培养法利用无血清培养基原代培养视皮层细胞,用纯化的Ad-ChR2转染培养的视皮层细胞,当转染成功的视皮层细胞表达绿色荧光时给予460 nm蓝光刺激,应用膜片钳技术记录视皮层细胞的动作电位.结果 纯化浓缩后的Ad-ChR2滴度可达7.9×1010PFU/ml,HEK293细胞转染Ad-ChR2 24 h后倒置荧光显微镜下即可见细胞膜上有绿色荧光表达,转染13d可见细胞由扁平变为圆形.无血清培养的视皮层细胞转染纯化的Ad-ChR2后细胞膜上可见绿色荧光蛋白(GFP)的表达,460 nm蓝光刺激后用膜片钳技术可记录到蓝光诱发的视皮质细胞的动作电位.结论 本研究成功构建了负载ChR2基因的重组腺病毒表达载体,并证实ChR2能够感染有功能的视皮质细胞,这对视觉可塑性方面的研究非常重要.     

α-crystallin与多种细胞作用的免疫荧光观察

目的 在α-crystallin(α晶体蛋白)对RGCs保护性作用研究并进行定位研究的基础上,对α-crystallin与其他细胞之间的作用相比较,以期揭示α-crystallin与RGCs作用的本质.方法 原代培养大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)、大鼠巨噬细胞、大鼠心肌细胞以及传代培养的ECV细胞株、293细胞细胞株、猪视网膜色素上皮细胞(RPE).应用免疫荧光结合激光共聚焦技术观察α-crystallin与多种细胞的作用.结果 免疫荧光结合激光共聚焦发现α晶体蛋白在3种细胞中有阳性免疫沉积物出现在细胞膜上,其对照组阴性;3种细胞见实验组和对照组均有阳性免疫沉积物出现在细胞浆、细胞核中.结论 α晶体蛋白不是特异性与RGCs发生作用,它是广泛存在的生物学效应物质.α晶体蛋白具有sHSP的抗应激损伤特性,对于不表达内源性α晶体蛋白的同时又是抗损伤能力较弱的RGCs,可通过增加外源性α晶体蛋白达到有效保护RGCs的目的 .     

人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞超微结构观察方法的优化

背景 视网膜色素上皮(RPE)细胞的正常超微结构是其执行正常生理功能的解剖基础,目前用透射电子显微镜(TEM)检测RPE细胞的超微结构时常用细胞沉淀法,但经过胰蛋白酶消化的细胞会破坏原有的细胞生长状态,无法真实地反映出体外培养的RPE细胞的超微结构. 目的 探索一种能够简单、真实地反映体外培养的入胚胎干细胞(hESC)来源的RPE细胞超微结构的方法. 方法 将hESC经自然分化法诱导为hESC来源的RPE(hESC-RPE)细胞,采用免疫荧光法检测hESC-RPE细胞特异性蛋白小眼畸形相关转录因子(MITF)和人类配对盒基因6(PAX6)的表达.将hESC-RPE细胞种植于Transwell小室上进行培养,待细胞形成细胞片后通过TEM进行超微结构的观察,并与细胞沉淀法制备的hESC-RPE细胞标本的超微结构和90日龄Long Evans大鼠体内RPE细胞的超微结构进行比较. 结果 hESC-RPE细胞MITF和PAX6表达阳性.TEM下可见大鼠体内RPE细胞正常的超微结构,包括顶端微绒毛、极性分布的RPE细胞色素颗粒和细胞核、细胞基底膜和细胞间紧密连接.细胞片法TEM下可见Transwell小室上细胞片中hESC-RPE细胞形成了类似于大鼠体内RPE细胞的超微结构,但细胞顶端微绒毛较短,而细胞沉淀法观察到hESC-RPE细胞的细胞质中散在分布的色素颗粒、非极性的细胞核和少量的微绒毛.结论 TEM观察细胞超微结构时细胞片法不经过细胞的消化过程,保留了hESC-RPE细胞的正常结构,能简单、真实地反映体外培养RPE细胞的超微结构.     

一种应用于视皮质假体图像压缩及编码系统的设计

背景：目前，视皮质假体已成为视觉修复实现的主要方法之一，图像压缩在视皮质假体的前期图像处理过程中占有重要地位。 目的：探讨从空域及亮度信息两个方面分别对图像信息进行压缩的方法。 方法：选取哈尔小波基对原始图像进行空间分辨率的压缩，并采用多尺度小波变换的方法对空间频率信号进行合理选取，实现信息的进一步压缩。同时，结合视觉皮质放大的特性，通过模拟视网膜对图像的前期处理，建立了非均匀压缩模型，使得图像压缩过程更接近视觉处理过程。还对亮度信息进行压缩及编码，实现了图像信息最终的压缩编码。 结果与结论：构建了基于数字信号处理器的前期图像压缩及编码系统，最终实现了在10*10的点阵图阵列中进行图像信息的表达。     

PRK与LASIK矫治远视的疗效比较

目的 对准分子激光屈光性角膜切削术（PRK）和准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）联合可蚀盘矫治远视的疗效进行比较。方法 使用可蚀盘联合三棱镜抛光技术。对25例患者40只远视眼进行矫治。其中PRK16眼，LASIK24眼，患者术前屈光度 1.62- 6.25D。术后随访12个月。结果 术后12个月，PRK组有2眼（12.5%)，LASIK组有3眼（12.5%)最佳矫正远视力丢失2行以上；而最佳矫正近视力丢失2行以上者分别为1眼（6.3%)和2眼（8.3%)。平均裸眼远视力PRK组为0.55,LASIK组为0.68；平均裸眼近视力PRK组为0.66，LASIK组为0.85，PRK组有12眼（75.0%)，LASIK组有20眼（83.3%)残余屈光度在-1.00D- 1.00D之间。术后1-3个月，PRK组平均回退量为0.95D,LASIK组的平均回退量为0.76D；术后3-6个月，其回退量分别为0.35D和0.08D；术后6-12个月，回退量分别为-0.22D和0.00D。两种术式疗效比较差异均有显著意义。结论 使用可蚀盘联合三棱镜矫治远视是安全的，PRK与LASIK两种方法均可获得满意的远期疗效。但LASIK较PRK更容易稳定，且有效性和预测性更好。     

大鼠视觉发育可塑性关键期视皮层LTP的研究

研究大鼠视觉发育可塑性可塑性关键期内视皮层LTP与大鼠生理年龄及视觉经验的关系,探讨视觉经验依赖性可塑性的突触机制和细胞机制.用低频刺激视皮层脑片Ⅳ层伴随突触后神经元去极化至-20 mV,以诱发视皮层Ⅱ～Ⅳ层LTP,用膜片钳全细胞记录法记录,并观察NMDA受体拮抗剂APV对LTP的影响.结果表明:①视皮层LTP诱发率在生后1周龄组最低(3/14),2周龄组略微增加(9/29),3周龄组最高(11/19),4周龄组次之(7/14).睁眼前后LTP诱发率差异显著(P＜0.05).②APV处理组LTP诱发率(4/33)显著低于非APV处理组(24/54)(P＜0.01).但有4例来自Ⅳ层水平联系的突触,APV不能阻断LTP诱发.结果提示:①视皮层LTP反映了生理状态下视皮层经验依赖性可塑性.睁眼前视皮层大多数突触的可塑性处于潜伏状态,而睁眼后形觉刺激激发了视皮层突触的可塑性.②大鼠视觉发育可塑性关键期内低频刺激视皮层Ⅳ层伴随突触后去极化所诱发的LTP是NMDA受体依赖性的.但视皮层Ⅳ层水平联系突触中存在不被100 μmoL/L APV阻断的LTP.     

LASIK矫治儿童重度远视屈光参差性弱视的远期疗效观察

目的 通过远期临床观察评价准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)矫治儿童高度远视性屈光参差的安全性、有效性、可预测性和稳定性,并探讨其对术后长期弱视治疗效果的影响.方法 采用回顾性研究方法观察自2000年9月开始接受LASIK手术矫治的61例61眼高度远视屈光参差性弱视儿童病例,年龄6～14岁.使用SVS Apex plus准分子激光系统及科医人公司鹰视世纪波及鹰视酷眼准分子激光系统,在局麻或基础麻醉下对患儿重度远视眼施行LASIK手术,矫治屈光度范围:(+3.00～ +7.50)D.术后根据患儿年龄、弱视类型及弱视严重程度制定后期弱视治疗方案.22例随访时间60个月以上.结果 术前患儿裸眼远视力为(0.12±0.07),裸眼近视力为(0.25±0.14),矫正远视力为(0.23±0.14),矫正近视力为(0.35±0.23).双眼扩瞳等值球镜屈光参差度为(+6.41±1.24)D,小瞳等值球镜屈光参差度为(+5.52±1.16)D.中心同时视47.5％,中心融合16.4％,立体视3.3％,≤3％不等像14.8％.术后60个月:裸眼远视力为(0.35±0.13),裸眼近视力为(0.70±0.19),矫正远视力为(0.48±0.18),矫正近视力为(0.81±0.18),与术前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).双眼扩瞳等值球镜屈光参差度为(+0.61±1.43)D,小瞳等值球镜屈光参差度为(+0.59±1.37)D,与术前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).中心同时视91.7％,中心融合75.0％,立体视33.3％,≤3％不等像66.7％,与术前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).术后60个月所随访的22眼均没有发现最佳矫正远、近视力丢失.结论 LASIK手术可显著降低儿童高度远视性屈光参差,长期随访结果表明其具有较好的安全性、有效性、可预测性和稳定性,术后可显著提高弱视治愈率.     

脉络膜黑色素瘤的影像学评价

现代医学影像学的发展非常迅速,新技术不断涌现.就脉络膜黑素瘤的影像学诊断而言,吲哚青绿血管造影(indocyanine green angiography, ICGA)、彩色多普勒血流成像(colour Doppler flood imaging, CDFI)、计算机体层成像(computed tomography, CT)和磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)等的临床应用已引起重视[1～3].     

体视学技术在视乳头血管的定量分析

目的观察和测定原发性开角型青光眼患者视神经乳头的血管形态、数量变化,探讨血循环障碍对青光眼所致视神经损害的影响并提供病理依据.方法将青光眼患者和正常人视神经乳头标本连续半薄垂直切片,采用计算机图像分析和生物体视学方法测定血管的体积密度、数量密度和相对面积比率.结果血管的体积密度和相对面积比率均较对照组显著降低,而两组的血管数量密度无明显差异.结论原发性开角型青光眼视乳头筛板区的血管形态发生变化,提示原发性开角型青光眼患者存在视乳头血循环障碍.     

高度近视性黄斑病变光学相干断层扫描检查的临床意义

目的观察高度近视眼黄斑区病理改变.方法采用Zeiss OCT 3 A黄斑区扫描程序,对观察组21例36只眼,以视物变形、变暗,复视,近期视力下降为主诉症状的高度近视患者,以及对照组11例21只眼为无主诉症状的高度近视患者进行对照分析.结果两组病例的眼轴长比较差异有显著性(P<0.05).有主诉症状组:主要表现为黄斑裂孔2例2只眼,玻璃体后脱离3例4只眼,视网膜前膜2例2只眼,视网膜劈裂2例3只眼,黄斑区视网膜浅脱(局限性色素上皮脱离和局限性神经上皮层脱离)5例7只眼,黄斑区CNV4例6只眼,视网膜玻璃体黏连2例2只眼,眼底后极部OCT扫描异常率为86.3%,未发现异常者2例4只眼,黄斑区视网膜厚度变化以及矫正视力与黄斑区异常OCT表现直接相关.而FFA检查未发现异常改变者为14例22只眼,异常率仅为26.3%.无主诉症状组:仅有1例1只眼见黄斑颞侧视网膜前膜.结论建议对高度近视患者定期采用OCT检测将有助于黄斑病变的早期诊断、选择手术方式以及随访.