阿克拉霉素对Hela细胞染色体形成及细胞凋亡的影响

①目的探讨阿克拉霉素对Hela细胞染色体形成的影响机制及与细胞凋亡的关系。②方法　MTT测定阿克拉霉素对Hela细胞的IC50值。不同浓度阿克拉霉素作用于Hela细胞24h后,制备染色体,Giemsa染色、观察。应用吖啶橙和嗅乙啶双荧光染色及DNA凝胶电泳检测细胞凋亡。Western-blot分析丰胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)含量变化。③结果　阿克拉霉素对Hela细胞的IC50值为6.83μg/ml。染色体分析表明,阿克拉霉素作用于Hela细胞一定时间后,染色体凝集不规则.正常M期染色体形成受阻。细胞凋亡检测可见不同药物组差异显著。Western-blot分析表明,高浓度药物处理组Caspase-3表达比对照组显著增加。④结论　阿克拉霉素能够阻止Hela细胞染色体形成与分离.导致细胞G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡。Caspase-3在Hela细胞凋亡中发挥重要作用。     

威猛（VM—26）诱导Hela细胞G2期停滞及染色体损伤分析

本文采用抗癌药物ＶＭ－２６诱导Ｈｅｌａ细胞周期Ｇ２停滞，并应用染色体预凝集技术，显示其对染色体的影响。结果表明：５μｇ／ｍｌＶＭ－２６作用２４ｈ后，Ｇ２期停滞细胞的染色体异常主要表现为染色何不规则凝缩和较严重的染色体断裂。由此提示：ＶＭ－２６通过抑制拓朴异构酶Ⅱ活性，除可造成ＤＮＡ和染色质袢的断裂外，染色体骨架本身的断残暴呈上起细胞周期Ｇ２期停滞和细胞死亡的原因之一。     

逆转录病毒介导IL-18基因在大鼠胶质瘤细胞C6中的表达

目的 :建立表达IL 18基因的大鼠胶质瘤细胞C6 /IL 18,并探讨外源性IL 18基因对C6细胞生长的影响。方法 :应用逆转录病毒载体 ,将IL 18基因导入C6细胞。经G4 18筛选后 ,获得表达IL 18分子的细胞克隆C6 /IL 18。用RT PCR法检测目的基因mRNA的表达 ;用流式细胞和免疫细胞化学染色法检测目的蛋白的表达。用ELISA法检测C6 /IL 18细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN γ的能力 ,以确定IL 18的生物学活性。用MTT比色法检测细胞体外增殖的状况 ,用流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并建立大鼠胶质瘤模型 ,观察C6 /IL 18细胞体内致瘤性的改变。结果 :外源IL 18基因于mRNA水平和蛋白水平可获得稳定表达 ,并可诱生大鼠脾细胞分泌IFN γ。同时 ,该细胞系的体外增殖率及体内致瘤性 ,均较亲代C6胶质瘤细胞明显下降。结论 :外源性IL 18基因能部分地抑制C6细胞的体外增殖率和体内致瘤性。建立了可进一步用于相关肿瘤基因免疫和基因治疗研究的大鼠胶质瘤细胞系C6 /IL 18。     

大鼠神经干细胞体外生长特性

目的 :观察大鼠神经干细胞的体外生长特性。方法 :利用无血清培养基悬浮培养 ,观察神经干细胞的体外生长过程。并比较不同接种密度 ,不同传代时间对神经干细胞生长的影响。用免疫细胞化学技术检测神经干细胞巢蛋白 (nestin)的表达 ;用吖啶橙 (AO) /溴化乙啶 (EB)检测细胞活性 ;用DAPI荧光染料标记细胞。结果 :神经干细胞聚合成细胞团生长 ,细胞团成分复杂。细胞接种密度以 5× 1 0 5个细胞 /ml组生长较好 ;原代细胞生长 3～ 4d后传代为宜。传代后 4d时可获得大量nestin阳性细胞。DAPI标记率为 1 0 0 %。结论 :细胞团成分复杂。神经干细胞要高密度接种 ,及时传代。DAPI可作为有效的体外标记物     

新生大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养及标记方法

本文用等密度沉降离心法分离出新生大鼠骨骼肌卫星细胞，观察其生长规律，检测分裂指数及生长曲线。用胶体金、DAPI及Brdu标记液分别标记细胞8、24、48h，测标记后细胞的生长曲线及标记率。结果表明分离所得肌卫星细胞纯度95％以上，梭形，培养第5天细胞排列出现方向性，并开始融合成肌管，第3—5天增殖旺盛，5代以内生长较快。三种标记方法对肌卫星细胞有不同程度毒性。胶体金标记法毒性最小，标记率100％；DAPI标记细胞率为100％；Brdu毒性最大且标记率仅为10％。本实验方法简单、快速，所得肌卫星细胞纯度高，性能好。胶体金标记法适合于电镜研究，DAPI标记法适合于光镜研究，Brdu标记法较差。     

婴幼儿秋季腹泻病原学研究及临床症状初步分析

婴幼儿秋季腹泻,每年在我国都有流行或散发。病原学是一个较为复杂的问题,以前曾认为与柯萨基病毒 B2、3型和呼肠病毒2、8、12、18等型有关。近年来又有了新的认识,其主要病毒为轮状病毒、诺沃克病毒、星状病毒、腺病毒、萼状病毒等等。     

用冷冻复型法观察细菌的超微结构

用冷冻复型法观察细菌的超微结构郑力芬，王美华，陈嘉乃基础医学研究所微生物学研究室（０５００１７）关键词四联球菌；八叠球菌；透射电镜１９６３年Ｍｏｏｒ将冷冻蚀刻技术用于酵母菌的研究［１］，后来，许多学者在分子水平上用此技术研究了细菌的生物膜结构［２，３...     

大鼠神经干细胞体外培养

目的:介绍一种较成熟的大鼠神经干细胞体外培养方法。方法:取新生大鼠(1d之内)侧脑室前角周围的脑组织,用EDTA:胰蛋白酶(1:1)消化,制成单细胞悬液,以2-5×105个细胞/ml接种于无血清培养基中。观察其增殖、分化情况,并用nestin、GFAP、NSE免疫细胞化学对细胞进行定性。结果:培养细胞呈悬浮生长,具有增殖能力,倍增时间为2d,nestin阳性。诱导分化后细胞贴壁生长,体积增大,并发出形态各异的突起。可见GFAP和NSE阳性细胞。结论:培养细胞经鉴定为神经干细胞。本方法简单、易操作,可行性强。     

人自体表皮细胞培养及移植研究

目的为提供烧伤、创伤大面积皮肤缺损修复时所需的表皮细胞.方法用少量的自体表皮细胞体外培养后移植于创面.结果移植后表皮细胞成活增殖,皮肤表皮获得重建.结论为皮源严重不足的烧伤、创伤患者的皮肤修复提供了一种方法.