肝细胞癌门静脉癌栓相关血清小分子量蛋白质标志物的筛选

目的筛选肝细胞癌门静脉癌栓相关的血清小分子量蛋白质标志物。方法收集健康志愿者、肝细胞癌无癌栓患者和肝细胞癌门静脉癌栓患者3组血清各l2份，用16％SDS-PAGE进行双向电泳，得到3组血清小分子量蛋白质表达图谱；经Image Master软件比对分析后，用基质辅助激光解析飞行时间质谱对差异点进行鉴定。结果在16％SDS-PAGE凝胶中，3×10^3～20×10^3区域内蛋白质条带间距较12．5％SDS-PAGE明显增宽，条带数目明显增多，且3组血清小分子量蛋白质表达图谱中均可清晰显示〈20×10^3的小分子量蛋白质斑点。组间比较显示，3组血清共有15个小分子量差异蛋白质点，经鉴定为5种蛋白质。与健康组比较，无癌栓组中载脂蛋白A-I、脂蛋白CⅢ、转甲状腺素蛋白和DNA拓扑异构酶Ⅱ表达降低，而结合珠蛋白-2表达增高；门静脉癌栓组5种蛋白质表达均较无癌栓组降低。结论在肝细胞癌的发生和发展过程中，血清小分子量蛋白质表达谱发生明显变化，差异表达的小分子量蛋白质有可能为肝细胞癌和门静脉癌栓早期预测及治疗监测提供参考。     

糖蛋白质组学技术在肿瘤研究中的应用

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,50%以上的蛋白质存在糖基化现象[1]。蛋白质糖基化涉及到细胞免疫、细胞粘附、蛋白翻译调控、蛋白降解等多种生物过程。在肿瘤的发生、发展进程中,某些糖基化修饰会随着疾病进程发生改变,     

低密度脂蛋白受体基因与家族性高胆固醇血症

低密度脂蛋白受体基因突变可导致家族性高胆固醇血ＦＨ是一种多基因遗传病，并且受环境因素的影响，本文重点讨论ＬＤＬＲ基因突变与家族性高胆固醇血症的关系。     

应用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱诊断乳腺钙化病变

进行乳腺X线检查的妇女,有30%～60%发现钙化[1].有报道约50%临床触诊阴性的乳腺病变进行活检是由于钼靶片发现钙化灶,恶性病变占40%～50%.     

N-甲基-D-门冬氨酸受体重组肽抗血清对谷氨酸兴奋毒性导致神经元坏死和凋亡的保护作用

目的 观察N-甲基-D-门冬氯酸受体(NMDAR，NR)主亚基(NR1)M3M4环重组肽自身抗血清对不同浓度谷氨酸诱导的神经元死亡的保护作用。方法 用NR1 M3M4环重组肽免疫Balh／C(H-2^d)小鼠制备抗血清，用锥虫蓝染色法和原位末端标记(TUNEL)法观察抗血清对原代培养海马神经元兴奋毒性坏死和凋亡的保护效应。结果 在高浓度谷氨酸(500μmoL／L)条件下，阳性抗血清可以使神经元坏死减少16％；在低浓度谷氨酸(50μmol／L)作用下，阳性抗血清保护可使神经元凋亡率减少13％。结论 NMDAR重组肽自身免疫抗血清具有抗兴奋毒性作用，这一结论为免疫防治兴奋毒性脑损伤策略的建立提供了坚实的体外基础。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中癌前病变阶段差异表达蛋白质的筛选

目的 通过比较二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝细胞癌发生过程中不同阶段的蛋白质表达谱,筛选在大鼠肝癌前病变阶段起重要作用的蛋白质分子. 方法大鼠分为DEN组和正常对照组,诱癌过程中定期处死动物并取其肝组织;以γ-谷氨酰转肽酶染色阳性的肝细胞增生灶为标志,识别和获取肝癌前病变的组织标本.用双向电泳及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法对大鼠正常肝组织、癌前病变组织和肝癌组织的全蛋白质组表达谱进行比较和鉴定.用Western blot和RT-PCR方法对部分差异表达蛋白质(如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶)进行表达水平的验证.结果 筛选出表达水平差异≥2倍的蛋白质共82种,其中在癌前病变阶段即发生明显改变的差异表达蛋白质有47种,包括在正常对照组、癌前病变组、肝癌组呈现依次上调的层黏连蛋白受体1等8种蛋白质和在上述组织中呈现依次下调的鲱精胺酶等22种蛋白质.Western blot和RT-PCR方法对层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶表达水平的验证结果与双向电泳的结果相似.结论 大鼠肝癌形成过程中不同阶段的蛋白质表达谱有所不同,对癌前病变的差异表达蛋白质如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶等进行深入探讨,有望为人类肝癌的早期诊断和治疗提供线索.     

肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的比较

目的 比较肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的表达变化情况,从中寻找特异性标志物.方法 用双向凝胶电泳分离正常人,慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血清蛋白质,结合质谱技术对差异点进行鉴定; Western blot检测结合珠蛋白β链以验证蛋白质水平的表达.计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析和LSD检验进行两两比较.结果 4组血清的双向电泳图谱经软件匹配分析,并与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱相结合,成功鉴定出结合珠蛋白,SAA1、SP40等30个差异蛋白质点,K cluster聚类分析不同的变化模式.在差异蛋白质点中,7个蛋白质点均为结合珠蛋白,呈现由正常→肝炎→肝硬化持续下调、到肝癌又上调的模式.Western blot证实结合珠蛋白β链的表达与双向电泳表达相一致.结论 在肝癌发生的动态过程中各疾病阶段的血清蛋白质差异表达有4种明显变化模式,可能为肝癌的早期诊断和预后提供依据,与肝癌发生发展相关的结合珠蛋白很可能是肝硬化发展到肝癌的一个潜在早期诊断标志物.     

黄曲霉毒素B1与乙肝病毒协同诱发树鼩肝癌形成过程中的差异表达蛋白

目的 比较黄曲霉毒素B1(AFB1)与乙肝病毒(HBV)协同诱发树鼩肝细胞癌生长不同阶段的蛋白质表达谱的改变,筛查在AFB1与HBV共同诱发的肝癌发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子.方法 用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF-MS/MS)对同一动物自身的癌发生前的肝组织(C45w)、癌发生后的肝癌组织(Cca)及未经AFB1处理的对照组动物肝组织(E45w、E105w)进行了相互比较.结果 C45w组、Cca组、E45w、E105w组分别平均检测到(1 233±30)个蛋白点(n=3),(1257±35)个蛋白点(n=3),(1 249±51)个蛋白点(n=3)和(1 208±36)个蛋白点(n=3).以各组中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,分别进行两组间的匹配分析(E45w vs C45w、C45w vs Cca、E45w vs E105w),筛选出两组之间差异大于或等于2倍的蛋白点65个.应用质谱鉴定出细胞色素C氧化酶等25种胶内差异蛋白质.结论 在AFB1与HBV共同诱发的树鼩肝癌发生发展不同阶段有明显的差异性蛋白表达谱,为进一步对人肝癌蛋白质组的研究提供了线索.     

肝细胞生长因子(HGF)诱导肝癌Huh7细胞发生上皮间质转化(EMT)后细胞膜表面糖蛋白糖谱的变化

 目的  应用凝集素芯片技术寻找肝癌细胞表面转移相关的特征性糖谱。方法  应用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导建立肝癌上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)细胞模型。通过凝集素芯片比较诱导前后细胞膜的糖谱改变,采用凝集素印迹和荧光细胞凝集素免疫组化方法验证芯片结果。结果  诱导后细胞对凝集素ACL、BPL、JAC、MPL、PHA E、SBA和SNA的亲和作用减弱,而对凝集素AAL、ConA、DBA、GSL Ⅱ、ECL、HAL、LCA、LTL、NML、NPL、PHA L、PTL Ⅱ和WFL的亲和作用增强。提示诱导后肝癌细胞表面出现了黏蛋白T/Tn抗原、平分型N-乙酰葡萄糖胺、α 2,6唾液酸和末端α或β连接的N-乙酰半乳糖胺结构减少;而末端和核心岩藻糖、高甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺β 1,6分支和复杂型寡糖分支结构增多。结论  肝癌细胞发生EMT过程中细胞膜表面糖链结构改变,提示糖链结构与肝癌的转移密切相关,为有效控制肝癌转移、改善预后提供了新思路。     

双向电泳分离技术的比较和优化

目的:比较优化人血清蛋白双向电泳(2-DE)分离技术,提高2-DE对血清蛋白的分辨能力.方法:收集健康人群标本,分别进行多次双向电泳,比较高丰度蛋白的去除前后及传统的考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色两种不同的染色方法等因素对双向电泳图谱质量的影响.结果:考马斯亮蓝染色和SYPRO-ruby荧光染色相比,血清2-DE图谱检测到平均蛋白质点数分别是(324±25)(n=3)和(785±30)(n=3);去除高丰度蛋白前后比较,未做处理的血清、去除蛋白和IgG血清的2-DE图谱检测到平均蛋白点数分别是(501±25)(n=3)和(813±22)(n=3).结论:去除高丰度蛋白并结合SYPRO-ruby荧光染色可以大大提高血清低丰度蛋白的解析能力.此方法优化了血清蛋白质2-DE技术,为进一步开展疾病血清蛋白质组研究奠定了基础.