结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合基因DNA疫苗与抗痨药物联合治疗小鼠结核病

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗及其与抗痨药物联合治疗小鼠结核病的效果.方法 用结核分枝杆菌临床分离的利福平和异烟肼敏感株HB240-1尾静脉注射17～19g的6～8周龄雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3d开始,分别用pVAX1空载体(A组)、利福平和异烟肼(B组)、利福平、异烟肼和Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗(C组)、Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗(D组)、HSP65基因DNA疫苗(E组)治疗40d,每组10只小鼠.治疗结束后2w,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数.结果 小鼠感染5w后,肺内菌量可达到1.8×106 CFU,脾内菌量达到1.7×106CFU.治疗结束后2w,B组和C组肺、脾脏器重量指数显著低于D组和E组,D组和E组脾脏器重量指数低于A组,但差别不显著.A组肺脏病变程度最重,病变范围80%～100%,干酪样坏死灶为弥漫性;D组和E组肺脏病变范围50%,干酪样坏死灶为片状;B组和C组肺脏病变程度较轻,病变范围较小,干酪样坏死灶为点状.A组脾脏9只重度肿大;B组和C组脾脏未见明显病变;D组和E组脾脏各有4只重度肿大.与A组相比,E组、D组、B组和C组肺脏菌落数分别减少了45%、50%、98.9%、99%;脾脏菌落数依次减少了50%、55%、99.2%、98.4%.与pVAX1空载体治疗组相比,各治疗组均有不同程度的疗效,Ag85A/ESAT-6嵌合基因疫苗组与HSP65基因疫苗组疗效相当.结论 Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗组联合化疗的疗效明显强于Ag85A/ESAT6嵌合基因DNA疫苗单独应用.     

小鼠肺、肝、脾组织病理学变化对结核DNA疫苗保护作用的评价

目的:评价结核分支杆菌MPT64、ESAT6 DNA疫苗的保护效力和细胞因子的增强作用.     

牛贝消核提取物血清药物化学的初步研究

目的: 对抗结核中药牛贝消核提取物进行血清药物化学初步研究,通过分析入血成分,探讨牛贝消核发挥药效的物质基础。方法: 2018年4月至2019年6月在中国人民解放军总医院第八医学中心全军结核病研究所制备桔梗、白及、鱼腥草和牛蒡子标准品溶液及牛贝消核供试品;55只小鼠随机分为11组,每组5只:1~5组为牛贝消核提取物组,每只小鼠每天给予 1.25mg/g牛贝消核提取物灌胃;6~10组为牛蒡苷组,每只小鼠每天给予 0.3mg/g牛蒡苷灌胃;11组为空白对照组,给予蒸馏水灌胃;连续灌胃7d。于末次给药后0.5、1、2、4、6h小鼠眼眶后静脉丛取血,制备血清供试品溶液。采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography, HPLC)分析各中药标准品、牛贝消核提取物供试品及各组小鼠给药后血清供试品溶液,分析色谱图中各物质保留时间;然后参照对照品初步鉴定牛贝消核提取物的入血成分。结果: 通过牛贝消核提取物和各药材标准品重叠色谱图中可以看出,牛贝消核提取物保留时间为7.1min处的色谱峰所对应的物质来源于桔梗,保留时间为13.5min、15.5min、21.2min处的色谱峰所对应的物质来源于白及,保留时间为16.3min的色谱峰所对应的物质来源于牛蒡子,并进一步鉴定为牛蒡苷化合物。牛贝消核提取物和牛蒡苷给药后血清样本与空白血清比较,均在17.5~22.5min发现有吸收峰。结论: HPLC分析可作为牛贝消核中桔梗、白及、鱼腥草和牛蒡子提取的质量控制方法,检出的牛贝消核提取物血中移行成分可能是牛蒡苷代谢产物,其余药效成分入血微量未检出。     

重组结核分支杆菌38000蛋白的理化特征与细胞免疫功能

目的：探讨重组38000蛋白在结核病流行病调查和亚单位疫苗研制中的应用前景。方法：等电点测定，肽图分析和圆二色光谱分析研究重组38000蛋白的理化性质；豚鼠皮试，MTT法测外周血单核细胞增殖和巨噬细胞吞噬探讨重组38000蛋白在细胞免疫中所起的作用。结果：重组38000蛋白是酸性蛋白，其等电点为4．67，肽图分析表明其碱性氨基酸的数量与理论一致；重组38000蛋白的二级结构由α－螺旋（32．6％），β-转角（31．6％）和无规则卷曲（35．8％）组成，它能诱发致敏豚鼠产生DTH反应；增强小鼠巨噬细胞吞噬功能；刺激30．8％健康者和25％所试结核病人的外周血单核细胞增殖。结论：重组38000蛋白可能在结核病流调中具有应用前景，并可作为亚单位疫苗候选者之一。     

异体脐带间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节**☆

背景：有资料表明骨髓间充质干细胞可延长小鼠和狒狒异体皮肤移植存活时间,降低造血干细胞移植后急性和慢性移植物抗宿主病的发生,但目前尚未见关于大鼠脐带间充质干细胞用于心脏移植减少排斥反应的报道。 目的：观察异体脐带间充质干细胞对大鼠心脏移植的免疫调节作用。 方法：DA大鼠20只作为供体,Lewis大鼠20只作为受体,均随机分为2组,即药物干预组、对照组,每组供受体大鼠各10只。采用双套管法将供体大鼠的左肺动脉和无名动脉分别与受体大鼠心脏的颈外静脉和颈总动脉在显微镜下行端端吻合,建立异位心脏移植模型。Wistar孕鼠1只,采用胶原酶消化法分离培养脐带间充质干细胞。造模后,细胞移植组经尾静脉注射脐带间充质干细胞,对照组同法注射氯化钠注射液。检测移植心脏的存活时间,采用心脏移植急性排斥反应诊断标准对移植心脏进行组织病理学评分,苏木精-伊红染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度。 结果与结论：与对照组比较,细胞移植组移植心脏存活时间显著延长(P=0.001),急性排斥反应病理学评分显著降低(P=0.000 4)。对照组心肌组织内有大量淋巴细胞和单核细胞浸润,细胞移植组心肌组织内有少量淋巴细胞浸润,心肌间质轻度水肿。结果证实大鼠脐带间充质干细胞可诱导心脏移植免疫耐受,减轻免疫排斥反应,延长心脏存活时间。     

血清可溶性白介素2受体(sIL-2R)的检测在兔同种骨软骨移植中的意义

血清可溶性白介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的检测在兔同种骨软骨移植中的意义刘蜀彬韩福刚孔祥星卢友发黄迅悟白一冰赵大庆史迎昌Ｒｕｂｉｎ等人１９８５年首次报道可溶性白介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）以来，ｓＩＬ－２Ｒ的测试结果被认为是机体免疫反应的关键，近年来ｓＩ...     

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的：研究结核分枝杆菌重组16000蛋白（rPA16)诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法：家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组，皮下多点注射分别进行免疫，6次免疫后采血，双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验（ELISA）跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应；同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应，并用rPA16抗原检测人血标本，分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果：兔血清抗体效价结果显示：5个月后，加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体，不加佐剂组2个月后血清抗体检测即为阴性，ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感，rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达1：6400，不加佐剂组的血清抗体滴度仅为1：400，ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异笥较好，仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应，与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性，同时又分析了rPA16抗原的特异性，与人型PPD相比，该抗原只与所试各类分支杆菌，BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应，而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应，ELISA检测血清标本结果：肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性分别为64.8%和75.2%；健康组，卡介苗接种阳转健康组，rPA16和PPD检测特异性分别为96.2%,88.5%和94.3%,66.7%。结论：rPA16具有较强的免疫原性和一定的特异性，可能成为结核病血清学诊断试剂之一。     

雷公藤多甙(T_Ⅱ)对肾移植大鼠外周血可溶性白细胞介素2受体的影响

目的:探讨雷公藤多甙(T_Ⅱ)对同种异体大鼠的免疫抑制机制。方法:将肾移植大鼠分为3组:对照组、T_Ⅱ组与环抱素 A(CsA)组。检测肾移植大鼠术后外周血可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)的变化及其与移植大鼠存活的关系。结果:对照组大鼠平均存活(7.3±2.2)天,sIL-2R 平均水平为(39.4±11.6)U/ml;T_Ⅱ组大鼠平均存活(18.1±3.7)天,sIL-2R 平均(27.6±10.4)U/ml;CsA 组大鼠平均存活(26.1±4.6)天,sIL-2R 平均(18.2±9.2)U/ml。T_Ⅱ组大鼠存活时间比对照组明显延长(P<0.01),但不及 CsA 组(P<0.05),sIL-2R 水平低于对照组(P<0.05),高于 CsA 组(P<0.05)。结论:T_Ⅱ可以显著抑制移植大鼠外周血 sIL-2R 水平,sIL-2R 外周血水平与移植鼠存活时间呈明显负相关     

不同浓度的月桂氮(艹卓)酮对双氯芬酸钠凝胶剂透皮吸收的影响

目的通过动物离体透皮吸收试验,选择双氯芬酸钠凝胶剂中最佳浓度的月桂氮(艹卓)酮(氮酮,Azone)作为渗透促进剂.方法采用改良的Franz扩散装置,以离体鼠皮为屏障、生理盐水为接受介质,研究了不同浓度的月桂氮(艹卓)酮(0%、1%、2%、3%、5%Azone)对双氯芬酸钠凝胶剂透皮吸收的影响.结果双氯芬酸钠凝胶剂12h累积透皮释药百分率依次为38.42%、62.35%、72.80%、32.10%、55.36%.结论 Azone促进双氯芬酸钠凝胶剂透皮释药的最大浓度为2%,筛选出2%月桂氮(艹卓)酮作为促进剂,制备了具有良好经皮吸收性能的双氯芬酸钠凝胶剂.     

达那唑海藻酸钠微球用于豚鼠子宫肌瘤动脉栓塞术后细胞凋亡的研究

目的 研究达那唑海藻酸钠微球(DKMG)用于子宫肌瘤动脉栓塞术后细胞凋亡的特点.方法 2005年6月至11月于北京协和医院实验动物中心,对24只豚鼠采用雌孕激素负荷法建立子宫肌瘤模型,雌孕激素负荷16周后,随机分为3组:即DKMG栓塞组(DKMG组,8只)、海藻酸钠微球(KMG)栓塞组(KMG组,8只)和未进行子宫动脉栓塞组(对照组,8只).豚鼠双侧子宫动脉栓塞术在麻醉下开腹直视下进行.于子宫动脉栓塞术4周后,用TUNEL法检测肌瘤细胞凋亡情况,同时用免疫组织化学方法检测肌瘤组织中Bcl-2蛋白的表达.结果 DKMG组、KMG组和对照组TUNEL法凋亡细胞比率分别为:(44.6±11.9)%,(33.7±7.3)%和(22.8±9.7)%.DK-MG和KMG组间凋亡细胞比率比较,差异有统计学意义(P<0.05),DKMG组、KMG组和对照组Bcl-2免疫组化染色H评分值分别为:2.7±0.7,2.1±0.3和1.3±0.6.3组间H评分值比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 达那唑海藻酸钠微球用于子宫肌瘤动脉栓塞术可造成细胞凋亡增加,其机制为微球中达那唑药物的局部释放,增加了子宫平滑肌细胞的凋亡比率.