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【目的】 寻找并鉴定脑血栓患者阿司匹林用药前后差异表达的血浆特异蛋白,探讨阿司匹林与维生素D结合蛋白(Vitamin D binding protein,DBP)相互作用进而预防血栓形成的详细机制,筛选与DBP清除血栓作用相关的候选蛋白,形成网络级联。 【方法】 于潍坊市益都中心医院获取初发脑血栓患者血浆样本18例[男性9例,女性9例,平均年龄(58.11±7.95)岁]。将18例患者随机分为3组(性别、年龄相匹配),分别混合3组用药前后血浆样本,构建6组样品池。针对样品池进行蛋白质提取及定量后,行固相PH双向凝胶电泳(2-DE)。运用ImageMaster 2D Elite 6.0软件比对用药前后2-DE图谱,基于蛋白质点灰度与体积变化,选取差异表达蛋白质点行基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱法(MALDI-TOF/MS)和串联质谱法(MS/MS)分析以鉴定蛋白质,并对差异蛋白应用IPA(Ingenuity Pathway Analysis)软件构建生物信号网络图谱。运用蛋白质印迹法验证用药前后血浆中DBP和肌动蛋白(actin)的表达差异。应用免疫共沉淀法验证DBP与actin相互作用。 【结果】 针对考马斯亮蓝染色得到的2-DE图谱,ImageMaster 2D Elite 6.0软件共筛选出1 256个蛋白点,其中228个具有表达量的差异。筛选差异超过1.5倍的30个蛋白质点行质谱分析得到28项检测结果(比对概率分数大于55分的结果有意义),包括DBP及与DBP作用相关联的11种差异蛋白:actin、结合珠蛋白、Fibrinogen gamma chain等。蛋白质印迹结果发现,DBP用药后(114.04±16.69)较用药前(66.33 ±5.61)表达显著上调,actin 则由(185.39±3.09)下调至(99.34±10.65)(两者P均 <0.01),与2-DE结果相一致。免疫共沉淀结果证实DBP与actin可直接作用,形成复合物。 【结论】 脑血栓疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高的特点,本实验采用临床样本,针对阿司匹林与DBP在预防血栓形成作用机制中的争论点,首次在中枢系统发现阿司匹林与DBP存在相互作用,使DBP表达上调,从而结合血浆actin防止其进一步聚合,发挥预防血栓形成的作用,DBP可作为预防心脑血管血栓性疾病的靶点应用于临床实验与治疗。此外,本实验筛选出DBP作用相关蛋白质,通过IPA显示Fibrinogen gamma chain与AT-III作用直接相关,可为阿司匹林预防和治疗血栓形成提供作用靶点。 相似文献
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目的 初步探讨山东汉族人群中DBP基因416和420位点基因多态性与多发性硬化(MS)疾病发生的关系。方法 经临床诊断为MS患者46例为MS患病组,同期健康体检者43例为对照组,检测其DBP基因416位点(HaeⅢ酶切位点)和420位点(StyⅠ酶切位点)基因多态性,并进行统计学分析。结果 MS患病组和对照组比较,DBP基因416位点和420位点基因型频率、等位基因频率和表现型频率分布差异均不显著。结论 山东汉族人群中DBP基因416位点和420位点基因多态性与MS疾病发生无显著相关性。 相似文献
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人类脑脊液蛋白质组学研究 总被引:7,自引:0,他引:7
脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)是存在于脑室及蛛网膜下腔内的一种无色透明的液体,循环流动干脑和脊髓表面,大部分由脑室脉络丛分泌。正常成人脑脊液容量大约为90~150mL。CSF中含有一些小分子物质如盐和肽,蛋门质.酶等等一些在生理上有重要作用的物质一这些物质的变化包括浓度.或蛋白和肽的修饰都能够精确反映中枢神经系统疾病的病理过程, 相似文献
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目的:建立用于脑脊液(CSF)蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找多发性硬化患者和对照组脑脊液蛋白质差异,从分子水平探讨多发性硬化患者脑脊液蛋白整体变化规律。方法:分别取对照组及多发性硬化患者的脑脊液,用三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白质后,加入适量裂解液使蛋白质充分裂解,离心后取上清液上样。进行第1向等电聚焦(IEF)电泳和第2向十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),染色脱色后,分析所得蛋白质斑点。结果:对照组和多发性硬化患者脑脊液2-DE图谱上均可得到近200个蛋白质斑点,其中2个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量增加,4个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量减少,12个蛋白质斑点为多发性硬化患者脑脊液特有。结论:对照组和多发性硬化患者脑脊液的双向电泳图谱存在明显差别,这些发现可为研究多发性硬化疾病机制提供线索。 相似文献
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蛋白质组学及其在疾病研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
生命的表现形式最终是由蛋白质决定的。因此,对蛋白质组的研究具有很现实的意义。从研究之初至今,研究技术不断提高,涉及面日益广泛,其应用价值越来越大。本着重从技术及应用的角度,追踪最新的研究进展,对蛋白质组学及其在疾病研究中的应用作一的概述。 相似文献
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核磁共振波谱技术诊断恶性肿瘤的临床研究 总被引:2,自引:0,他引:2
使用低磁场质子核磁共振波谱仪,采用双重抑制法,冷冻干燥法及预饱和法抑制血液样品质子NMR谱中的水峰,分别测量和比较甲基,次甲基的平均线宽及其两者的平均线宽。通过NMR检测236份临床血标本发现,恶性肿瘤患者血的甲基和次甲基峰明显窄于正常人和良性肿瘤患者,其平均线宽差异有高度显著性(P〈0.001),检测准确率均达85%以上,此法可作为临床早期诊断恶性肿瘤的检测方法并可用以监测癌症患者的治疗过程。 相似文献
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为研究雄激素致前列腺良性增生的分子机理,分离培养了人胎儿前列腺间质细胞,并给予DHT(1~10000μg/L)刺激,MTT法测定。结果显示,DHT对该细胞具有刺激增殖作用,其最适刺激浓度为1000μg/L。斑点杂交结果显示,鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA的表达在DHT(1000μg/L)刺激6h时开始升高,24h时达高峰,30h时有所降低。提示雄激素刺激前列腺间质细胞增殖的分子机理部分是通过刺激前列腺间质细胞的ODC基因表达来完成的。 相似文献
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RH株弓形虫表面抗原p22基因与p30基因联合表达后的免疫活性 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究弓形虫表面抗原p22基因与p30基因的联合表达。方法:用RT-PCR及PCR方法获得p22和p30基因,联合构建在表达载体中,经酶切与测序鉴定后,用IPTG对工程菌进行诱导表达,表达产物行SDS-PAGE蛋白凝胶电泳及Western-blot免疫印迹检测。结果:经RT-PCR可得到长约438bp的p22外显子基因片段,蛋白电泳结果显示,阳性重组菌在66.5Kda位置上明显多一条带,此条带可与p22抗体结合并使免疫印迹显示阳性结果。结论:弓形虫表面抗原p22基因的有效基因片段与p30基因片段联合表达后,在融合蛋白中仍具有免疫原性。 相似文献
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利用低分辨质子核磁共振波谱仪,采用双重抑制法抑制血中水的质子峰,并和由作者曾报道过的冷冻干燥及国外报道的预饱和法进行比较,对236例临床血标本的甲基和次甲基的平均线宽进行测量和分析比较,结果表明,恶性肿瘤患者血的甲基和次甲基峰的平均线宽值明显低于正常人和良性肿瘤患者,其差异非常显著(P〈0.001),这一结果为临床检测提供了有价值的数据,同时可用来监测癌症病人的治疗过程。 相似文献