疏肝润肠方防治慢传输型便秘可能机制及效应靶点的探讨

[目的]探讨疏肝润肠方干预慢传输型便秘可能机制及效应靶点.[方法]60只SPF级Balb/c雄性小鼠,按体质量随机分为:正常组、模型组、治疗组(含低、中、高剂量亚组).除正常组外,模型组、治疗组均以复方地芬诺酯灌胃制模.观察所有小鼠排便时间、排便次数及粪重,应用免疫组化SABC法检测Cajal细胞标志物C-kit表达,实时荧光定量PCR技术检测血浆中P物质(SP)和血管活性肠肽(VIP) mRNA表达变化.[结果]模型组大便次数减少、排便时间延长、粪便少而且硬;治疗组较模型组大便次数增加、排便时间缩短、大便性状偏软(P＜0.05).与正常组比较,模型组小鼠结肠黏膜Cajal细胞阳性分布面积及数目减少(P＜0.05).模型组小鼠结肠SP、VIP mRNA表达呈下降趋势;治疗组小鼠结肠SP、VIP mRNA表达呈上升趋势(P＜0.05).[结论]疏肝润肠方可能通过调控SP及VIP的分泌,从而缩短慢传输型便秘小鼠排便时间、增加排便次数及便重、促进小鼠粪便软化,增加肠推进,促进小肠的传输功能而发挥其治疗慢传输型便秘的药效.     

急性胆源性胰腺炎LTB4、TRPV1及CGRP表达的意义

目的:通过检测白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、瞬时电位香草酸亚型受体1(Transient receptor potential vanilloid channel-1,TRPV1)及降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide,CGRP)等指标变化,分析LTB4-TRPV1信号活化在急性胆源性胰腺炎中的作用。方法:清洁级SD大鼠60只,按体重随机分为3组,正常组、模型组、TRPV1拮抗剂组。采用胆胰管开口十二指肠结扎法制备重症胰腺炎模型,术后3h开始分组给药,术后12h处死全部大鼠,腹主动脉取血并收集胰腺组织备测。应用光镜检测胰腺组织超微结构变化,应用ELISA技术检测LTB4变化,应用Real-time PCR技术检测TRPV1、CGRP变化。结果: 正常组胰腺肉眼见胰腺呈浅粉红色;模型组大鼠肉眼见胰腺坏死、出血,部分可见腹水,腹水含血,光镜下见胰腺腺体结构紊乱,小叶间隔明显增大,腺体实质内可见大片凝固性坏死并伴有出血,坏死灶及周围有大量炎细胞浸润;TRPV1拮抗剂组大鼠胰腺组织充血水肿较模型组减轻,未见腹水,光镜下胰腺实质可见少许坏死、出血及少量炎性细胞浸润,其组织病理学评分较模型组下降,有统计学意义(P＜0.05)。模型组见血淀粉酶、LTB4表达明显上升,分别为5672.65±189.54、489.32±22.76;TRPV1拮抗剂组血淀粉酶、LTB4表达下降,分别为2134.54±121.69、231.25±16.78,较模型组有统计学意义(P＜0.05)。模型组胰腺组织TRPV1、CGRP mRNA表达上升,分别为2.78±0.41、2.17±0.33;TRPV1拮抗剂组TRPV1、CGRP mRNA表达下降,分别为1.24±0.21、1.19±0.11;与模型组比较有统计学意义(P＜0.05)。结论: 内源性LTB4活化TRPV1信号在胆道梗阻性胰腺炎可能发挥至关重要的作用,阻断TRPV1信号转导将为急性胰腺炎的治疗提供新的思路。     

疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP的影响

目的：观察治疗前、后腹泻型肠易激综合征患者结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP表达,探讨疏肝健脾方防治肠易激综合征的可能机制.方法：30例符合诊断标准、纳入标准、排除标准的肠易激综合征患者,予疏肝健脾方治疗4周,记录0周、2周、4周症状变化;应用荧光定量PCR技术及免疫组化检测结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP表达变化.结果：治疗前,IBS-D患者腹痛、腹部不适明显,伴见大便次数增多;予疏肝健脾方干预14d、28d后,患者腹痛、腹部不适缓解,排便次数恢复正常,与治疗前比较,有统计学意义（P＜0.05）.治疗前,IBS-D患者结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP呈高表达变化;治疗后,结肠黏膜TRPV1、SP表达下降,有统计学意义（P＜0.05）.但是,治疗后结肠黏膜CGRP表达较治疗前无明显差异（P＞0.05）.结论：疏肝健脾方具有明确缓解腹泻型肠易激综合征效用,其疗效可能与下调TRPV1表达、减少SP释放有关.     

Wnt/β-catenin-TCF信号通路介导溃疡性结肠炎相关癌变分子机制研究

溃疡性结肠炎相关癌变机制尚未明确,可能与炎症反复发作以及炎症细胞产生多种细胞因子、活性氧等因素,激活经典的Wnt/β-catenin-TCF通路突变,出现结肠黏膜上皮细胞反复坏死、再生、增殖,甚至癌变。该文主要探讨Wnt/β-catenin通路介导溃结癌变相关机制研究进展。     

DMH/DSS复合法诱导小鼠溃疡性结肠炎相关癌变的实验研究

目的 探讨DMH腹腔注射结合3%DSS自由饮用法制备溃疡性结肠炎相关癌变小鼠模型.方法 适应性喂养1周后,30只BALB/c小鼠按体重随机分为4组,正常组6只,模型Ⅰ组8只,模型Ⅱ组8只,模型Ⅲ组8只.除正常组外,其余3组,分别按15,20,25 mg,/kg腹腔注射0.4%DMH,每周2次,继而连续自由饮用3%DSS 2周为1循环;连续3个循环.第9周末将全部小鼠脱椎处死,截取全部结肠(回盲部-肛门),肉眼及光镜下观察小鼠结肠组织形态学变化.结果 模型Ⅲ组全部小鼠在造模过程中死亡.肉眼见模型Ⅰ组小鼠结肠黏膜充血水肿;模型Ⅱ组小鼠结肠散在、多处息肉状隆起变化;正常组小鼠结肠黏膜未见异常.镜下见模型Ⅰ组小鼠结肠可见腺体萎缩、低级别上皮内瘤变;模型Ⅱ组小鼠结肠可见腺体萎缩、高级别上皮内瘤变,部分癌变;正常组小鼠结肠黏膜未见异常.结论 0.4%DMH 20 mg/kg腹腔注射结合3%DSS自由饮用复合法,可以成功复制渍结相关癌变模型,该方法简单易行,与人溃疡性结肠炎相关癌变较为相似,值得推广应用.     

基于CD14表达及胃癌SGC-7901细胞凋亡变化探讨清热化湿类方药防治胃癌研究

目的 观察人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及CD14表达变化,探讨清热化湿类方防治人胃癌的可能机制.方法 将SGC-7901细胞分为空白组、治疗组,采用血清药理学方法,空白组予胎牛血清;治疗组分别予等比稀释不同浓度含药血清干预体外培养的胃腺癌细胞SGC-7901(24 h),应用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡率、细胞周期,Real-time PCR技术检测CD14 mRNA表达情况.结果 与空白组比较,治疗组SGC-7901细胞存活率明显下降(P＜0.05);与对照组比较,治疗组S期细胞减少、G1期细胞增多,且与药物浓度有剂量依赖性.治疗组可明显下调CD14表达并促进细胞凋亡率(P＜0.05),以中剂量更为明显.结论 清热化湿类方可能通过调控CD14表达,介导SGC-7901细胞S期,诱导细胞凋亡,发挥防治胃癌的效应.     

RNAi沉默CD14基因对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在细胞水平观察沉默CD14基因对胃癌细胞增殖、凋亡、周期及下游靶因子TNF-α、IL-8的影响,探讨CD14基因在胃癌中的发病地位。方法重组CD14shRNA慢病毒为载体转染胃癌SGC-7901细胞。实验分3组,正常组、慢病毒阴性对照组(NCshRNA)、CD14沉默组(CD14shRNA)。采用荧光显微镜观察转染效率,确定最佳转染时间;Western blotting检测CD14蛋白的沉默效率;MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real-time PCR技术检测TNF-α、IL-8表达。结果成功转染慢病毒CD14shRNA的SGC-7901人胃腺癌细胞可表达绿色荧光蛋白,测得在病毒MOI=10时,转染72 h后,慢病毒的转染效率最佳。转染后24 h,正常组细胞增殖率为218.18%,阴性对照组为216.27%,CD14shRNA组为211.63%,各组间相比,差异无统计学意义(P0.05);转染后48 h、72 h,正常组细胞增殖率为427.49%、479.22%,阴性对照组为417.84%、473.37%,CD14shRNA组为345.54%、362.64%,经比较,CD14沉默后细胞增殖率下降(P0.05)。CD14shRNA组细胞早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率均高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。CD14shRNA组细胞G1期42.57%、S期38.65%、G2期13.22%,正常组细胞G1期35.91%、S期52.60%、G2期11.49%,差异有统计学意义(P0.05)。Western blotting结果显示,在转染胃癌细胞后,CD14shRNA慢病毒载体组细胞CD14蛋白表达相对于正常组及阴性对照组明显减少(P0.05);Real-time PCR结果显示,CD14shRNA转染胃癌细胞后,TNF-α、IL-8 mRNA表达较正常组、阴性对照组明显下降。结论 CD14基因沉默后,胃癌细胞增殖能力减弱,细胞周期阻滞在S期,细胞合成减少,凋亡率增加,TNF-α、IL-8表达下降,这说明CD14基因在胃癌细胞增殖、发展过程中占据重要地位。     

稳定沉默CD14胃癌SGC-7901细胞系变化及清热化湿类方药干预研究

目的构建稳定沉默CD14胃癌SGC-7901细胞系,从细胞增殖、周期、凋亡等变化,观察清热化湿类方药防治胃癌协同作用的研究。方法将胃癌SGC-7901细胞分为正常组、对照组、治疗组,除正常组外,对照组CD14shRNA转染后,予正常大鼠血清处理24h,治疗组CD14shRNA转染后,予不同剂量清热化湿方含药血清处理24h,应用MTT/CCK-8法检测细胞增殖及抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V法检测细胞凋亡。结果各组加药前,细胞增殖比较,无显著性差异,具有可比性;加药第1天,治疗组有抑制细胞增殖效应,与正常组比较,有统计学意义(P0.05);对照组无抑制细胞增殖效应,无统计学意义(P0.05)。加药第2天、第3天,清热化湿类方药仍有抑制SGC-7901细胞增殖的效应,与对照组比较有统计学意义(P0.05)。治疗组细胞G1期50.09%,S期38.17%,G2期11.73%;对照组细胞G1期30.14%,S期50.68%,G2期13.18%,经比较,治疗组细胞S期较对照组下降(P0.05)。治疗组早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率明显增高,与对照组比较,有统计学意义(P0.05)。结论清热化湿类方药协同抑制胃癌细胞增殖,减少癌细胞合成,促进胃癌细胞凋亡的正效用。     

基于循证医学思维应用PBL教学法提高中医内科研究生科研素质的实践与评价

目的:基于循证医学思维,探讨应用PBL教学法在培养中医内科研究生科研素质的教学效果与评价。方法:观察我校2011级、2012级中医内科学研究生24人,基于循证医学思维在科研选题、撰写研究报告和论文方面应用PBL教学模式,采用问卷调查形式就查阅文献、学习兴趣、分析解决问题能力、对专业现状与动态了解情况等方面对研究生进行调查,在PBL教学法结束后发放问卷调查及评价效果。结果:PBL教学模式使研究生查阅文献能力得到提高,学习主动性和兴趣得到充分调动,78%以上的研究生认为PBL教学模式对自身分析解决问题能力、对本专业知识动态了解和个人临床科研综合素质的提高有极大帮助,近80%的研究生对于PBL教学模式在科研工作中的作用给予了充分肯定。结论:与传统教学相比较,PBL教学法结合循证医学思维模式更能调动学生自主学习的兴趣,增强学生的中医科研思维能力。