LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达

目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的序列完全一致。重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体〔pET-26b(+)/LEN-5〕构建成功。表达蛋白的等电点为7.6。结论β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。     

93例强直性脊柱炎患者抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体的检测

目的探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体在强直性脊柱炎（AS）诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测93例AS患者（AS组）,40例RA患者（RA组）及40例健康体检者（对照组）血清抗MCV抗体、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体。分别采用魏氏法、电化学发光免疫法检测其红细胞沉降率（ESR）及C反应蛋白（CRP）。采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术检测人类白细胞抗原B27（HLA-B27）基因型。结果 AS、RA患者的抗MCV抗体浓度分别为8.2~76.7U/mL[（21.3±13.8）U/mL]、10.5~176.2U/mL[（65.7±48.5）U/mL],明显高于对照组[〈20U/mL（10.7±4.2）U/mL]（P〈0.05）。AS组、RA组和对照组患者抗MCV抗体的阳性率分别为32.2%（30/93）、72.5%（29/40）和0.0%（0/40）。仅3%（3/93）的AS患者呈抗CCP抗体阳性,且滴度不高[（4.5±1.4）RU/mL],对照组无阳性。67.5%（27/40）RA患者可检测出抗CCP抗体,滴度较高[（67.6±53）RU/mL]。AS患者中,抗MCV抗体阳性率与ESR相关（r=0.447;P=0.03）,而与性别、年龄、CRP水平及HLA-B27不相关（P〉0.05）。结论抗MCV抗体可作为AS的血清标志物。     

荧光环介导等温扩增检测化脓性链球菌sdaB方法的建立

目的 建立荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测化脓性链球菌毒力基因sdaB的方法。方法 根据GenBank公布的化脓性链球菌sdaB基因保守序列(GenBank:69901515)，使用引物设计软件Primer Explorer V5.0获得LAMP引物。在LAMP体系中加入荧光染料，对引物、MgSO₄、甜菜碱、脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate, dNTP)、Bst DNA聚合酶的使用浓度进行了筛选，MgSO₄浓度范围为0～12 mmol/L、甜菜碱浓度范围为0～2.4 mol/L、dNTP浓度范围为0.2～2μmol/L、上游内部引物(forward inner primer, FIP)和下游内部引物(backward inner primer, BIP)浓度范围为0.2～2μmol/L、上游外部引物(forward outer primer, F3)和下游外部引物(backward outer primer, ...     

超广谱β-内酰胺酶研究进展

目前，超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的种类已超过200种，有30多个国家发表了对ESBLs的研究报道，反映了产ESBLs菌株呈世界范围流行，因此控制产ESBLs菌株感染的意义也日益重大，有效的感染控制可以降低病死率。现将近年来有关ESBLs的分类、产ESBLs菌感染的危险因素以及医院内感染的控制等方面的研究进展作一综述。     

HCV感染者检测抗SSA/Ro52抗体及其IgG亚型的意义

目的观察HCV感染者的抗SSA/Ro52抗体的情况。方法选取HCV感染者123例、SLE患者61例、干燥综合征(SS)患者20例和健康人对照52例,用线性免疫印迹法(LIA)筛查抗SSA/Ro52抗体;间接ELISA检测抗SSA/Ro52抗体IgG亚型。结果 HCV感染者检出率最高的是抗SSA/Ro52抗体29例,单项阳性20例;SLE患者抗SSA/Ro52抗体阳性39例,单项阳性1例;SS患者抗SSA/Ro52抗体阳性17例,单项阳性2例;健康人对照0例。HCV感染者抗SSA/Ro52抗体阳性率低于SLE和SS患者,差异有统计学意义(P均0.01)。抗SSA/Ro52抗体阳性者中,HCV感染的单项阳性率高于SLE和SS患者,差异有统计学意义(P均0.01)。HCV感染抗SSA/Ro52抗体阳性率与性别、年龄无关;抗SSA/Ro52抗体IgG亚型阳性率依次为IgG1(83%)、IgG3(31%)、IgG2(17%)、IgG4(7%)。结论单项抗SSA/Ro52抗体阳性是区分HCV感染是否合并SS的重要指标之一。     

丙型肝炎病毒感染者17种自身抗体的检测及其临床意义

目的：观察丙型肝炎病毒（HCV）感染者的自身抗体情况,了解 HCV 感染后疾病严重程度与抗核抗体（ANA）谱阳性率的关系。方法收集123例 HCV感染患者的血清标本作为 HCV组,根据病毒感染的严重程度将其分为3组：A组,急性丙型肝炎17例;B组,慢性丙型肝炎64例;C组,肝硬化42例。将排除病毒感染和自身免疫性疾病的健康者52例作为对照组。采用间接酶联免疫吸附测定法检测抗 HCV 抗体,线性免疫印迹法检测123例 HCV 感染者血清中抗 dsDNA、核小体、组蛋白、SmD1、增殖细胞核抗原（PCNA）、P0、SSA/Ro60kD、SSA/Ro52kD、SSB/La、CENP-B、Scl70、U1-snRNP、AMA-M2、Jo-1、PM-Scl、Mi-2和Ku 抗体。结果47．2％（58/123）HCV 感染者至少1种自身抗体阳性,明显高于对照组的9．6％,差异有统计学意义（P＜0．01）。ANA谱17种自身抗体阳性率由高到低依次为：抗SSA/Ro52kD抗体（23．6％）、抗SSB/La抗体（6．5％）、抗 Mi-2抗体（5．7％）、抗PCNA抗体（4．9％）、抗核小体抗体（3．3％）、抗 Ku 抗体（3．3％）,抗 dsDNA、SmD1、AMA-M2、PM-Scl 抗体均为1．6％,抗组蛋白、P0、SSA/Ro60kD、CENP-B、U1-snRNP、Jo-1抗体均为0．8％,未发现抗Scl-70抗体。ANA谱阳性率与 HCV感染者的性别和年龄无关（P＞0．05）。急性丙型肝炎患者、慢性丙型肝炎患者与肝硬化患者的 ANA 谱阳性率分别为47．1％、40．6％和57．1％,差异无统计学意义（P＝0．25）。结论 HCV感染者可检测到多种自身免疫性疾病的特异度抗体,其ANA谱阳性率与性别、年龄及 HCV感染疾病的严重程度均无关。