胰岛素抵抗与脂代谢紊乱

胰岛素抵抗(IR)是指机体靶组织对胰岛素敏感性/反应性降低,即一定量胰岛素产生的生物效应低于预计正常水平,胰岛素对靶组织作用减弱,加大胰岛素浓度可提高总效应.机体为克服IR常伴有代偿性的高胰岛素血症.     

乙肝表面抗原-CD40L胞外段融合蛋白的设计和生物活性预测

目的：探讨乙肝表面抗原-CD40L胞外段融合蛋白设计的合理性。方法：应用Gene Constructionkit2．5、DNAStar软件和WWW．expasy．org网站提供的分析方案分析重组体的开放读框以及融合蛋白的柔性、亲水性、抗原性、表位等性质，并作了二级结构模拟分析。结果：重组体CMV启动子下游有完整的目的基因ORF，融合蛋白二级结构水平未出现新的抗原性及表位，亲水性无改变，Linker部位抗原性低，呈中性且柔性高，不影响两端的蛋白质二级结构及融合蛋白空间构象。结论：重组体设计合理，融合蛋白很大可能保留了乙肝表面抗原和CD40L胞外段的生物学活性，为进一步研究提供了理论依据。     

假单胞菌外毒素体外靶向抗肝细胞癌的实验研究

目的：构建携铜绿假单胞菌外毒素PE38基因及甲胎蛋白（AFP）启动子的重组载体,并研究其在体外对AFP阳性肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）的靶向杀伤作用。方法：构建重组免疫毒素表达质粒pAFP-PE38,通过转染细胞观察其作用,RT-PCR法测定PE38 mRNA表达,CCK-8法检测细胞毒性。结果：各组细胞转染质粒pAFP-PE38后仅AFP阳性的HepG2细胞表达PE38 mRNA,且形态发生改变,生长显著受抑（P〈0.01）,48 h和72 h抑制率分别为27.2%、58.3%,而AFP阴性的PC-3和HeLa细胞未受明显影响。结论：PE38基因真核表达载体可实现HCC基因治疗的靶向性和高效性,有望成为肝细胞癌靶向基因治疗的有力工具。     

HBVS-ecdCD40L融合基因构建及相应融合蛋白的二级结构预测

目的构建HBVS—ecdCD40L融合基因,并利用软件对其相应融合蛋白的二级结构进行预测。方法利用分子生物学技术将HBVS基因与人CD40L胞外段基因进行融合,构建融合基因及其真核表达载体,并利用蛋白质分析软件对相应融合蛋白二级结构水平的一些生物学特性进行预测。结果融合基因序列与设计一致,其相应氨基酸序列经软件分析,并与HBsAg和CD40L胞外段氨基酸序列分析结果比较,发现在二级结构上几乎无变化,亲水性和抗原性等生物学活性几乎未受影响。结论HBVS-ecdCD40L融合基因构建成功,软件分析表明融合过程未影响HBsAg和人CD40L胞外段的生物学活性,为进一步研究奠定基础。     

肝癌靶向性AGAP表达载体构建及生物信息学分析

目的：构建肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）特异性镇痛抗肿瘤肽（analgesic-antitumor peptide,AGAP）基因真核表达载体,利用计算机辅助分析和预测所表达蛋白质的理化和结构特征,为探索生物毒素靶向抗肝癌作用奠定基础。方法：提取东亚钳蝎总RNA,用RT-PCR法扩增出AGAP基因,与载体pGL3/AFP连接构建重组质粒,酶切及测序鉴定,并利用蛋白质分析软件对其表达的蛋白二级结构水平及一些生物学特性进行预测,并转染HepG2细胞检测其是否表达。结果：重组质粒所表达的目的多肽经软件分析,发现在二级结构上没有变化,亲水性、抗原性等生物学活性也未受影响,转染HepG2细胞后能成功表达。结论：人AFP基因顺式作用元件调控AGAP真核表达载体构建成功。     

原发性肝细胞癌的肿瘤标志物

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤，每年大约有250000名患者死于肝细胞癌。虽然外科手术切除仍然是治疗HCC最为有效的方法，但是大多数患者就诊时已届中晚期而失去了外科手术的机会，所以早期发现和治疗是提高患者生存率的关键。甲胎蛋白是目前临床上诊断HCC最常用的肿瘤标志物。随着对HCC研究的深入，越来越多的与HCC相关的肿瘤标记物受到人们重视。     

红细胞比容和血肌酐测定对胰腺坏死早期预测的价值

目的探讨检测红细胞比容（HCT）和血肌酐（Scr）对急性胰腺炎（AP）患者发生胰腺坏死（PN）早期预测的价值。方法采用回顾性分析的方法,比较胰腺坏死组和非胰腺坏死组患者人院时HCT值和48小时内Scr峰值的差异,以及高、低HCT组,高、低Scr组的胰腺坏死发生率、CTSI评分、APACHEⅡ评分之间的差异。并对HCT和Scr这两项指标判断胰腺坏死的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值进行计算。结果低HCT组胰腺坏死发生率低于高HCT组（P〈0．01）,高Scr组胰腺坏死发生率高于低Scr组（P〈0．01）,HCT值判断胰腺坏死的的敏感度、特异度分别为68．8％和82．8％,阳性预测值、刚忡颅洲位分别为52．4％和90．6％,Scr值判断胰腺坏死的敏感性、特异性分别为37．5％和99．1％,阳性预测值、阴性预测值分别为92．3％和85．2％。结论HCT和Scr有助于胰腺坏死的早期预测。     

先天性胆总管囊肿癌变危险因素及预后分析

目的 探讨先天性胆总管囊肿(congenital choledochal cysts,CCC)患者癌变危险因素及预后。方法 回顾性分析2002年2月至2014年4月温州医科大学附属第一医院收治的115例CCC患者,按照癌变的发生与否,将病例分癌变组(A组)和非癌变组(B组),通过单因素及多因素Logitic回归分析与囊肿癌变有关的危险因素,同时对A组进行生存分析。结果 115例CCC患者癌变12例,癌变率10.4％。单因素分析结果得出：年龄增加、病程长、合并黄疸、合并胆石症、肝功能异常［包括结合胆红素(CB)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨肽转肽酶(γ-GT)的升高］与CCC癌变具有相关性(P<0.05)。多因素Logitic回归分析显示,年龄增长、病程长、CB升高是CCC癌变发生的独立危险因素(P<0.05)。A组患者术后生存1～72个月,生存期(28.1±8.8)个月(95%CI 10.817～45.461)。结论 CCC是一种癌前病变,年龄增长、病程长、CB升高是CCC癌变的危险因素。CCC癌变患者预后不佳,确诊CCC患者,应尽早行囊肿切除、肝管空肠吻合术,防止癌变。     

羊栖菜多糖对软脂酸诱导的HL-7702细胞凋亡的保护作用

目的:探讨羊栖菜多糖(SFPS)对软脂酸诱导的肝细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法:SFPS不同浓度(25、50、100μg/mL)预处理24h后,0.5mmol/L软脂酸(PA)作用48h诱导正常人肝细胞株(HL-7702)凋亡。MTT比色法检测SFPS对细胞增殖的影响;Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡;RT-PCR法检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达并计算其比值(Bcl-2/Bax)。结果:0.5mmol/L PA处理48h的HL-7702细胞存活率下降为正常对照组的64.9%,细胞凋亡率为35.1%,Bax表达上升,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值明显下降(均P<0.05);与模型组相比,SFPS不同浓度(25、50、100 ug/ml)预处理后细胞存活率逐渐升高,细胞凋亡率显著降低,Bax表达逐渐下降,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值逐渐上升(均P<0.05)。结论:SFPS对PA诱导的肝细胞凋亡有较好的保护作用,其作用机制可能与调节Bcl-2、Bax基因的表达有关。     

镇痛抗肿瘤肽基因真核表达载体构建及其体外抗肝细胞癌作用

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我国的发病率及病死率均高.西医治疗肿瘤有起效快的优点,但往往有较大的副作用和局限性.我国传统中药中许多成分具有抗肿瘤作用,作为中药蝎毒成分之一的东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(analgesic-antitumor peptide,AGAP)近来备受关注,将其与现代生物技术结合开发新的抗肿瘤药物具有很好的发展前景.本研究通过构建甲胎蛋白(AFP)启动子及增强子调控的AGAP真核表达载体,观察其对HCC的治疗作用,为蝎毒在肝癌基因治疗方面的价值提供实验依据.