“双一流”建设背景下地方高校研究生培养模式探索

一流的研究生教育是“双一流”建设的重要基础。从健全导师责权机制、深化课程体系改革、强化共享平台建设、完善培养质量评价机制等方面，探讨我校在“双一流”建设中研究生教育改革与创新的具体举措，展示了研究生培养模式改革的初步成效，为地方高校推进“双一流”建设提供有益借鉴。     

针对gyrA基因突变的反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的研究

目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果。方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照。结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49%(41/59)、100%(51/51),符合度为83.63%;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56%(40/41),98.55%(68/69),符合度达98.18%。结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度。     

肺炎嗜衣原体感染与动脉粥样硬化的关系

本文介绍了肺炎嗜衣原体感染与动脉粥样硬化的关系、肺炎嗜衣原体在体内的传播及其与血管内皮细胞、单核/巨噬细胞、平滑肌细胞之间的相互作用,以及肺炎嗜衣原体感染对动脉粥样硬化斑块稳定性的影响和肺炎嗜衣原体感染致动脉粥样硬化的机制。     

EB病毒gp350/220抗原T-B联合表位生物信息学预测

为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。本文运用生物信息学方法确定了gp350/220分别存在5个T细胞抗原表位﹑6个B细胞表位和3个T-B细胞联合表位区域,为进一步研发gp350/220高价优势表位疫苗奠定基础。     

肺炎支原体P1C-IL-2融合基因疫苗鼻饲对小鼠免疫效果的检测

目的 研究肺炎支原体(Mp) P1C-IL-2融合基因疫苗经鼻饲免疫小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用,了解IL-2对P1C核酸疫苗的免疫佐剂效应.方法 将构建的P1C-IL-2核酸疫苗鼻饲免疫BALB/c鼠,ELISA检测免疫小鼠血清IgG滴度、IgG亚类和支气管肺泡灌洗液中IgA及IFN-γ、IL-4的水平;建立小鼠Mp感染模型,观察Mp攻击后小鼠肺组织炎症情况和支气管肺泡灌洗液中Mp菌落数的变化.结果 P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a亚类和支气管肺泡灌洗液中IFN-γ和IL-4水平均较PIC疫苗组小鼠显著增高(P＜0.05),但两组支气管肺泡灌洗液IgA差异无显著性(P＞0.05).用Mp滴鼻感染免疫小鼠,第1、3、6天P1C-IL-2双基因融合疫苗组小鼠肺组织炎症病理评分显著高于P1C单基因疫苗免疫组小鼠,两组小鼠支气管肺泡灌洗液中的Mp菌落数差异无显著性(P＞0.05).结论 IL-2能显著增强PIC疫苗的免疫应答水平,但在感染早期也激发了较强的肺组织炎症.     

微生物工程网络教育资源建设研究

网络教育资源建设是实施教育信息化的基础,网络教育资源的广泛应用给教育事业带来了蓬勃生机。加强微生物学工程课程教学、辅导、研究建设,实现网络教学资源与微生物工程课程的整合,促进微生物工程教学方式与教学手段的根本变革,对于高等院校培养高素质创新型生命科学人才具有极其重要的意义。     

新发感染病毒诊断方法研究进展

近年在全球范围内已先后发现70多种新发病原体,以病毒居多,主要包括呼吸道感染病毒、出血热病毒、胃肠道感染病毒、肝炎病毒、逆转录病毒等。这些病毒病原体严重威胁人类健康并影响社会的稳定和发展。因此,新发感染病病毒的快速检测对病毒性疾病治疗和公共卫生监督显得非常重要。逐年发展的分子生物学方法不仅可发现和认识新发病毒,同时对难分离培养病毒,尤其是不能用常规实验方法进行及时诊断的病毒,分子生物学检测显得非常重要。本文就新发感染病病毒的生物学特征和检测方法,尤其是分子生物学方法进行了简要综述。     

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0463的表达与抗原性鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0463(rTp0463)并鉴定其抗原性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断和免疫保护中的作用奠定基础。方法 PCR扩增Tp0463基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0463,转化宿主菌诱导表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Westernblot鉴定表达产物的抗原性。结果成功构建了原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0463,经诱导高效表达了一分子量大约为16KDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>90%;Westernblot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论高效表达了rTp0463,该重组抗原有良好的抗原性。     

沙眼衣原体质粒蛋白pORF5生物学特性初步研究

目的 分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨其生物学特征.方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建pORF5原核表达重组体并诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性;分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布及表达模式特征.采用ELISA分析pORF5质粒蛋白在自然感染状态下的表达情况及免疫原性.结果 pORF5主要分布于宿主细胞质,但也少量分布在原体(EB)和网状体(RB)上,在细胞质中的分布模式与衣原体分泌蛋白酶样活性因子(CPAF)基本相似,激光共聚焦结果显示两者并不重叠;pORF5能与Ct生殖道感染患者血清发生强烈的免疫应答.结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性;在自然感染状态下,pORF5质粒蛋白基因被激活产生内源性靶蛋白.

Abstract：

Objective To localize and characterize the plasmid protein pORF5 in the Chlamydia trachomatis(Ct) infected cells. Methods The open reading frame encoding for pORF5 protein from the Ct plasmid was amplified and cloned into the pGEX-6p vector. The recombinant plasmid pGEX-pORF5 was transformed into XL1-blue E. coli to express fusion protein with the glutathione-s-transferase (GST). After purified with Glutathione Sepharose 4B beads, the pORF5 fusion protein was used to immunize mice to make monoclonal and polyclonal antibody. The antibodies were used to localize the endogenous pORF5 protein and detect the expression pattern in Chlamydia-infected cells using an indirect immunofluorescence assay (IFA). At the same time, ELISA was used to determine whether pORF5 plasmid protein was expressed and immunogenic during Ct infection in humans. Results pORF5 was detected a dominant signal in the cytosol of the Chlamydia-infected cells with a pattern similar to that of anti-CPAF. pORF5 also appeared in the RBs and EBs in small quantity. Athough pattern was similarly, pORF5 did not overlap with CPAF. pORF5 protein was strongly recognized antiserum in an ELISA. Conclusion The pORF5 plasmid protein was identified as a secreted protein with good immunogenicity, pORF5 gene was to express the endogenous target protein during human infection.     

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究

目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93％;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.