耐甲氧西林金黄色葡萄球菌儿童分离株外排泵基因与耐药关系

目的对广州市妇女儿童医疗中心患儿分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药表型,及3个外排泵基因NorA、MepA、SepA的携带情况进行调查,探讨外排泵与儿童MRSA分离株多重耐药的相关性。方法收集2013-2016年分离自就诊患儿的MRSA菌株,分析标本的基本信息和患儿的临床资料,并统计分析菌株抗生素的耐药情况。提取细菌基因组,运用PCR技术扩增3个外排泵基因并测序鉴定,采用卡方检验分析多重耐药外排泵基因携带模式与抗生素耐药率的相关性。结果收集了72株MRSA菌株,患儿以婴幼儿和新生儿为主,分别占62.50%、15.28%。分离自深部感染标本35例,其中血液标本28例,脑脊液标本6例,骨髓标本1例。所有MRSA菌株对万古霉素、替加环素、利奈唑烷、呋喃妥因、喹奴普汀/达福普汀敏感,对克林霉素的耐药率为79.17%、四环素耐药率为44.44%、庆大霉素的耐药率为11.11%,环丙沙星、利福平的耐药率为9.72%。所分离MRSA菌株中,SepA、NorA、MepA基因携带率分别为27.78%(20株)、47.22%(34株)、52.78%(38株)。携带外排泵基因的菌株对克林霉素的耐药率显著高于不携带外排泵基因的菌株,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MRSA为儿童深部感染主要致病菌之一,儿童分离MRSA耐药情况严峻,所分离的MRSA大部分携带外排泵基因,克林霉素的耐药性与携带外排泵基因正相关。     

儿童患者嗜血杆菌的感染源分布与耐药性调查

嗜血杆菌(Haemophilus)可引起多种儿童感染性疾病,除常见的呼吸道感染外,还可引起阴道炎、中耳炎、脓肿及外科感染等.嗜血杆菌生长条件要求较高,需要X和/或V因子,而且临床标本通常含有大量杂菌,传统的巧克力培养基影响嗜血杆菌生长.我们在巧克力培养基中加入了杆菌肽,提高了嗜血杆菌的分离率.为了了解近年我院儿童患者嗜血杆菌的感染情况及其耐药性,我们对2004～2005年从各类临床标本中分离出来的嗜血杆菌进行分析,总结如下.     

环氧合酶-2,核因子-kB异常表达与胃癌关系的探讨

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和核因子-kB(NF-kB)的阳性表达与胃癌的关系.方法应用免疫组织化学染色(SP法)分别检测106例活检标本中COX-2、NF-kB蛋白在人慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、不典型增生及胃癌组织中的表达情况.结果COX-2与NF-kB在胃癌中的表达明显高于在慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎的表达(P＜0.05),但与不典型增生的表达相比,无显著性差异(P＞0.05).COX-2与NF-kB在胃癌中的表达具有显著相关性(P＜0.01).结论COX-2与NF-kB与胃癌的发生有关,NF-kB有可能介导COX-2在胃癌中的表达.     

647株金黄色葡萄球菌儿童分离株的分布和耐药性分析

目的了解儿童金黄色葡萄球菌(金葡菌)分离株耐药情况,为临床治疗用药提供依据。方法采用微生物检验报告系统统计分析金葡菌分离株中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)比率,并分析MRSA和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)对主要抗菌药物的耐药性差异。结果共分离到647株金葡菌,其中MRSA194株,占29.98%。MRSA和MSSA对万古霉素、替加环素、替考拉宁、利奈唑胺、奎奴普丁-达福普汀和呋喃妥因均100%敏感,对甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑、阿米卡星、青霉素的耐药率差异无统计学意义;MRSA对大多β内酰胺类药物及其含酶抑制剂、红霉素、四环素、利福平、庆大霉素、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率较MSSA高,差异有统计学意义。结论金葡菌儿童临床感染形势严峻,MRSA和MSSA对多种抗菌药物耐药率差异明显,儿童金葡菌相关性感染可根据病情及参考药敏结果选用敏感的抗菌药物治疗。     

嗜麦芽窄食单胞菌Smqnr耐药基因的序列分析及原核表达

目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将Smqnr基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果:以染色体DNA为模板,成功扩增660bpSmqnr基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%以上;SMgzch770Smqnr序列已登录GenBank(登录号:HQ315851);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白约为50kDa,其中Smqnr蛋白约为24kDa。结论:从SMgzch770中成功克隆及表达了Smqnr基因,为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供了必须材料。     

无醛固定液在病理技术中的应用

组织固定是病理技术工作的关键步骤,直接决定常规染色效果及分子病理检测项目的实验结果.多年来,病理科一直使用4%中性甲醛作为常规组织固定液,然而,甲醛是一种具有强烈刺激性的挥发性液体,不仅污染环境,而且危害人体健康.无醛固定液是一种新型的组织固定液,因其不含甲醛,对人体无伤害、环境无污染,是病理技术工作中理想的固定液.     

健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌及耐药性分析

目的 为了解广州地区健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌的带菌情况及耐药性.方法 用鼻咽拭子法采集1 052名3～5岁广州市幼儿园健康儿童鼻咽分泌物进行金黄色葡萄球菌分离培养,采用K-B法检测178株金黄色葡萄菌对替考拉宁、头孢西丁、阿米卡星、环丙沙星、头孢唑啉、氨苄/舒巴坦、青霉素、红霉素、克林霉素、庆大霉素、头孢他啶、四环素、复方新诺明等13种抗菌药物的耐药性;用E-Test法检测178株金黄色葡萄菌对万古酶素的耐药性.结果 健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌率为16.9%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为0%,对万古霉素、替考拉宁、头孢西丁、氨苄/舒巴坦、阿米卡星、头孢唑啉和复方新诺明的耐药率均为0%,对青霉素、红霉素、克林霉素、头孢他啶、四环素、庆大霉素的耐药率分别为91.1%,74.3%,25.7%,25.7%,4.3%和2.9%.结论 健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌率不高,其中MRSA比例及对14种药物的耐药性明显低于上呼吸道感染患儿所带金黄色葡萄球菌.     

幽门螺杆菌儿童分离株中性粒细胞激活蛋白克隆及表达序列

目的：从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1基因组扩增中性粒细胞激活蛋白（NAP）基因,克隆入T载体,并亚克隆入表达载体pGEX-4T-1,进行测序及基因比对分析,为幽门螺杆菌疫苗研制奠定基础.方法：根据GenBank中幽门螺杆菌NAP序列,设计一对特异性引物扩增幽门螺杆菌临床儿童分离株NAP全长基因,与T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切、测序鉴定,经EcoR Ⅰ、Not Ⅰ双酶切后与做相应酶切的pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定,IPTG诱导重组蛋白表达,并对基因进行测序及比对分析.结果：以幽门螺杆菌儿童分离株GZCH1为模板,成功扩增了NAP基因,基因大小为435 bp,重组pGEX-4T-1-NAP双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示NAP在正确读框中,序列比对分析显示其与幽门螺杆菌J99株氨基酸一致性达99.2％,IPTG诱导后,pGEX4T-1-NAP/BL21在相应分子量（42.8 kD）可见融合蛋白的表达.幽门螺杆菌儿童分离株GZCH1 NAP序列已登录GenBank（登录号：GU301881）.结论：从幽门螺杆菌临床儿童分离株GZCH1中成功克隆了NAP基因,并获得重组蛋白的表达,为NAP幽门螺杆菌疫苗研制奠定了良好的基础.     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达

目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。     

儿童外阴炎、阴道炎病原菌探讨及耐药性分析

目的：了解儿童外阴炎、阴道炎的病原菌分布及耐药性。方法：取我院2001～2002年门诊及住院外阴炎、阴道炎患儿外阴分泌物标本424份进行细菌培养。K-B法做药敏试验，对各种细菌的分布特征及耐药性进行分析。结果：检出阳性标本252份(59．4％)，共16种细菌，其中金黄色葡萄球菌18株(7．1％)，表皮葡萄球菌60株(23．8％)，大肠杆菌44株(17．4％)，流感嗜血杆菌38株(15．2％)，奇异变形杆菌21株(8．3％)，粪肠球菌19株(7．5％)，肺炎克雷伯氏菌13株(5．2％)，无乳链球菌5株(2．0％)，B群链球菌3株(1．2％)，产气肠杆菌3株(1．2％)，洋葱伯克霍氏菌5株(2．0％)，弗劳地枸橼酸杆菌3株(1．2％)，肺炎链球菌4株(1．6％)，真菌12株(4．8％)。除葡萄球菌对红霉素、青霉素、氨苄青霉素耐药率较高外，其他检出菌的耐药率都不高，耐甲氧西林葡萄球菌占38．5％，大肠杆菌产ESBL株仅占11．4％，肺炎克雷伯氏菌有1株产ESBL，无耐万古霉素肠球菌。结论：检出的细菌大多数为儿童阴道内具有的正常茵群，为条件致病菌，其耐药性均较低，治疗并不困难，应以预防为主，注意孩子的卫生习惯，尽量减少交叉感染的机会。