耐甲氧西林金黄色葡萄球菌儿童分离株外排泵基因与耐药关系

目的对广州市妇女儿童医疗中心患儿分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药表型,及3个外排泵基因NorA、MepA、SepA的携带情况进行调查,探讨外排泵与儿童MRSA分离株多重耐药的相关性。方法收集2013-2016年分离自就诊患儿的MRSA菌株,分析标本的基本信息和患儿的临床资料,并统计分析菌株抗生素的耐药情况。提取细菌基因组,运用PCR技术扩增3个外排泵基因并测序鉴定,采用卡方检验分析多重耐药外排泵基因携带模式与抗生素耐药率的相关性。结果收集了72株MRSA菌株,患儿以婴幼儿和新生儿为主,分别占62.50%、15.28%。分离自深部感染标本35例,其中血液标本28例,脑脊液标本6例,骨髓标本1例。所有MRSA菌株对万古霉素、替加环素、利奈唑烷、呋喃妥因、喹奴普汀/达福普汀敏感,对克林霉素的耐药率为79.17%、四环素耐药率为44.44%、庆大霉素的耐药率为11.11%,环丙沙星、利福平的耐药率为9.72%。所分离MRSA菌株中,SepA、NorA、MepA基因携带率分别为27.78%(20株)、47.22%(34株)、52.78%(38株)。携带外排泵基因的菌株对克林霉素的耐药率显著高于不携带外排泵基因的菌株,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MRSA为儿童深部感染主要致病菌之一,儿童分离MRSA耐药情况严峻,所分离的MRSA大部分携带外排泵基因,克林霉素的耐药性与携带外排泵基因正相关。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达

目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。     

2014 ～ 2019 年广州地区血液肿瘤儿童血培养病原菌分布及耐药性特点分析

目的　探讨本中心儿童血液肿瘤患者血培养病原菌的分布及耐药特点，为临床合理诊疗提供参考。方法　对 该中心2014 年~2019 年儿童血液肿瘤科室送检血培养样本所分离的病原菌以及药敏结果进行回顾性分析。结果　9 396 例患儿血培养标本共分离出病原菌538 株, 其中革兰阴性菌253 株（47.03%）、革兰阳性菌242 株（44.98%）、真菌 43 株（7.99%）。革兰阴性菌中以肺炎克雷伯菌（11.90%）、大肠埃希菌（10.04%）和铜绿假单胞菌（5.39%）为主， 三者对氨苄西林及一代头孢均表现出极高的耐药率，而厄他培南、美罗培南等碳青霉烯类抗生素对三种革兰阴性菌保持 了较好的抗菌活性。2014~2019 年肺炎克雷伯菌对氨苄西林/ 舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南的耐药率差异有 统计学意义（χ2=11.328~15.203，P ＜ 0.05）。革兰氏阳性菌以凝固酶阴性葡萄球菌（17.47%）、缓症链球菌（10.60%） 和金黄色葡萄球菌（4.28%）为主；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离率为30.80%，对青霉素G 的耐药率高达100%，但 对万古霉素、利奈唑胺及喹奴普汀均表现为敏感。真菌中热带假丝酵母菌（6.69%）占主要比例。结论　儿童血液肿瘤 患者感染的病原菌种类较多，多重耐药感染情况比较常见。明确病原菌种类及药敏结果，合理应用抗生素，对有效控制 血液感染有重要意义。     

广州地区儿童分离株青霉素耐药肺炎链球菌青霉素结合蛋白基因分型

目的了解广州地区儿童分离株青霉素耐药肺炎链球菌(PNSP)的分子流行病学,为肺炎链球菌感染性疾病防控提供实验依据。方法设计特异性引物,PCR扩增PNSP青霉素结合蛋白基因PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X、PBP3,进行测序分析。并使用Hinf I对PCR产物进行酶切,分析其限制性片段性长度多态性(RFLP)。结果成功提取PNSP的DNA、PCR结果显示:50株耐青霉素肺炎链球菌中:含PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP2B、PBP2X及PBP3的菌株阳性率分别为48.9%、64.4%、71.1%、31.1%、40.0%、31.1%。测序显示,它们与GenBank已知序列的同源性分别为99%、98%、100%、97%、95%、100%。使用Hinf I的RFLP分析显示:PBP1A、PBP1B、PBP2A、PBP3仅有一种基因型;PBP2B、PBP2X有两种基因型的,阳性率分别为71.4%、28.6%、66.7%、33.3%。结论广州肺炎链球菌儿童分离株耐青霉素基因的分布以PBP2A、PBP1B、PBP1A为主。使用Hinf I酶切,PBP2B、PBP2X具有两种基因型,其中优势型均大于65%。     

儿童尿液分析复检规则的探讨

目的通过LabUMat尿液干化学分析仪(简称干化学)和Urised有形成分分析仪的检测结果与显微镜镜检结果的符合率,探讨尿液镜检的复检规则。方法收集1 040例门诊及住院儿童患者的尿液标本,先用朗迈全自动尿液分析仪进行尿液干化学和尿液有形成分的检测,然后进行显微镜检测,探讨自动化尿液分析仪尿常规分析的复检规则;通过漏检率对规则进行评价,且能避免肾功能异常的患者漏诊的复检规则。用200例标本对该复检规则进行临床验证。结果用于研究复检规则的标本中,镜检结果阳性标本占58.65%,阴性标本占41.35%。在阳性检测标本中,以RBC阳性居多,RBC阳性标本占50%,WBC阳性标本占23.08%,CAST阳性标本占7.69%。设置规则的符合率87.5%,漏检率分别是2.9%。用200例尿液标本对复检规则进行验证,符合率89.52%,漏检率2.4%。结论干化学潜血(BLD),白细胞(LEU),蛋白(PRO)和Urised有形成分分析仪RBC,WBC,管型(CAST)的检测结果不相符,或相差2个级差均要进行复检。     

广州地区腹泻患儿肠致病性大肠杆菌的血清型及耐药性

目的调查广州地区腹泻患儿肠致病性大肠杆菌(EPEC)感染的情况,分析EPEC菌株的血清型及耐药性,为更有效地防治EPEC感染提供重要基础数据。方法回顾性分析2014年7月-2016年12月广州市妇女儿童医疗中心3 013名提供大便培养的腹泻患儿的临床资料,统计EPEC感染的流行特征,并分析EPEC阳性菌株的血清型分布及耐药情况。结果在3 013份急性腹泻患儿提供的大便培养标本中分离到96株无重复的EPEC,分离率为3.19%。以1~2岁和大于5岁年龄组检出率相对较高,年龄组间检出率的差异有统计学意义(P0.05)。以冬、夏季检出率较高,季节间检出率差异亦有统计学意义(P0.05)。共分为12个血清型,其中血清型O86K61、O125K70、O44K74、O126K71为优势血清型。EPEC对抗生素耐药率最高为氨苄西林(86.46%),其次为复方新诺明(76.04%)和头孢噻肟(57.29%)。未发现对亚胺培南耐药菌株,其他抗生素均有一定程度的耐药。多重耐药率为61.46%。结论 EPEC是婴幼儿腹泻的重要病原菌,O86K61为最常见血清型,该菌多重耐药严重,应加强监测并根据药物敏感试验合理选择抗生素进行治疗。