RGD肽修饰壳聚糖作为种植体表面基因载体的研究

目的 探索改善钛种植体表面处理的新方法,提高种植体植入后成骨效率。方法 将RGD肽与壳聚糖（CS）通过酰化反应发生偶联形成RGD-CS,采用复凝聚法制备RGD-CS/pDNA复合体,并将RGD-CS/pDNA复合体接枝到经物理、生化处理后的纯钛表面。采用红外光谱仪和元素分析仪对 RGD-CS进行化学结构的表征检测,凝胶电泳阻滞试验结合原子力显微镜观察RGD-CS对质粒的包裹情况及RGD-CS/pDNA复合体的形态, EB染色法检测钛片表面 RGD-CS/pDNA复合体的接枝效果。结果 红外光谱检测结合元素分析表明,CS和RGD肽偶联成功;凝胶电泳阻滞试验结合原子力显微镜观察表明,在N/P≥2时,RGD-CS与pDNA完全复合,RGD-CS/pDNA复合体呈类球形;EB染色表明RGD-CS/pDNA复合体接枝钛片成功。结论 经RGD肽修饰的壳聚糖可以携带 pDNA作为钛种植体表面质粒包装的载体。     

高级糖基化终末产物的检测及其临床意义

高级糖基化终末产物(AGEs)是蛋白质、脂类、核酸等生物大分子物质发生非酶糖基化反应的产物.近期大量研究证明,AGEs在糖尿病并发症[1]、尿毒症[2]、阿尔次海默病[3]、白内障[4]、脊髓侧索硬化症[5]等疾病和衰老的发生发展过程中具有重要作用,因此检测血清和组织中AGEs的浓度对多种疾病的诊断、治疗及预后具有重要的意义.     

胰岛素样生长因子-1与骨质疏松

胰岛素样生长因子(ICF)-1是一种具有促细胞分化和增殖活性的多肽物质，它通过影响成骨细胞和破骨细胞的分化、增生、活化及偶联在骨重建中起重要作用。ICF-1体系中抑制因子活性增加，刺激因子减少可能是骨质疏松的启动因子。ICF-1体系成分的水平可作为新的骨代谢标志物预测骨质疏松及脆性骨折的发生，适当地应用ICF-1可到达治疗骨质疏松的目的。     

抑癌基因RAS启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的关系

目的观察抑癌基因RAS在乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系。方法 选择50例PTC和32例良性甲状腺肿瘤(对照组,包括20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)患者,对2组患者手术获取的标本提取RNA后,反转录为cDNA,进行多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),检测RAS基因的表达情况;运用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测上述组织中RAS基因启动子区甲基化的情况,并对2种抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序。结果 PTC组患者中,有30例(60%)RAS基因启动子发生甲基化;对照组患者中,有10例(31.3%)RAS基因启动子发生甲基化;PTC组织RAS基因启动子甲基化率均显著高于对照组,差异有统计学意义(χ2=6.46,P<0.05)。乳头状甲状腺癌mRNA的半定量的值为0.56±0.10,对照组mRNA半定量的值为0.67±0.16,乳头状甲状腺癌mRNA的表达明显低于对照组,两者差异具有统计学意义(t=2.83,P<0.05)。经DNA测序证实,RAS基因启动子发生甲基化的其CpG岛的碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的,碱基由CG变为TG。结论 PTC患者RAS基因启动子甲基化发生率显著高于良性甲状腺肿瘤患者,而RAS基因mRNA的表达则较良性甲状腺肿瘤降低;推测RAS基因启动子甲基化可能与PTC的发生、发展相关。     

碘克沙醇及Ficoll-400分离纯化大鼠胰岛细胞的效果对比

目的:分别使用碘克沙醇和Ficoll-400密度梯度液纯化大鼠胰岛细胞,比较两者分离纯化大鼠胰岛细胞的收获量、纯度、活性和功能.方法:将20只SD大鼠随机分为碘克沙醇纯化组和Ficoll-400纯化组,以胶原酶P消化分离SD大鼠胰腺,分别采用碘克沙醇及Ficoll-400密度梯度液来纯化胰岛细胞.通过DTZ染色,计数胰岛细胞的数量和纯度,用胰岛素释放试验和胰岛移植评估胰岛细胞的功能.结果:碘克沙醇-HCA液纯化组的胰岛细胞收获量及纯度与Ficoll-HCA无明显差别,碘克沙醇-HCA组纯化的胰岛细胞活率则显著高于Ficoll-HCA组(93.3%±3.5% vs 84.8%±3.8%,P<0.01),同时胰岛细胞逆转糖尿病大鼠高血糖状态的时间显著延长(11.4±2.1 vs 7.0±1.6 d,P<0.05).结论:与Ficoll-400相比,使用碘克沙醇纯化大鼠胰岛可提高胰岛细胞的活率及功能.     

2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者胰岛素抵抗的回顾性分析

目的: 回顾性分析2型糖尿病(T2DM) 合并非酒精性脂肪性肝病 ( non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD) 患者胰岛素抵抗的特点。方法: 2007-2009年住院的患者中,有T2DM无NAFLD者791人,有NAFLD无T2DM者267人,同时有T2DM和NAFLD者173人,选取无T2DM及无NAFLD的患者207人作为对照组。计算反映胰岛素抵抗的胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR)及其他生化指标,比较各组不同指标的差异。结果: T2DM合并NAFLD组的 HOMA-IR均高于对照组( P <0.05),也高于单纯T2DM组及单纯NAFLD组( P <0.05)。单纯NAFLD组与对照组的HOMA-IR无显著性差异。结论: T2DM合并NAFLD患者的胰岛素抵抗参数高于单纯T2DM患者及单纯NAFLD患者,T2DM的存在加重了NAFLD患者的胰岛素抵抗程度。     

雷奈酸锶对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠骨超微结构和骨生物力学特性的影响

目的 观察雷奈酸锶对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠胫骨近端松质骨超微结构和骨生物力学特性的影响.方法 24只3.5月龄SPF级雄性SD大鼠适应性喂养1周后,随机等分为3组:Nrm组:正常对照组;Met组:皮下注射甲强龙(Met)5 mg/(kg*d),每周5次;SrR组:在Met组基础上给予雷奈酸锶900 mg/(kg*d...     

胰升血糖素样肽-1改善波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能机制的研究

目的 研究胰升血糖素样肽-1 （GLP-1）对波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能的影响及机制. 方法 将获取的原代胰岛细胞分为5组,即正常葡萄糖（5.5 mmol/L）组、恒定高糖（30.0 mmol/L）组、波动高糖（每24 h轮换培养于5.5、30.0 mmol/L）组、恒定高糖＋GLP-1 （100 nmol/L）组和波动高糖＋GLP-1组.干预7d后检测细胞增殖活性、活性氧簇（ROS）、细胞周期及周期蛋白cyclinD1、p21、p27、Skp2的表达. 结果 GLP-1干预可降低波动性高糖诱导的细胞内ROS水平[（194.40±19.20）vs（406.78±18.40）,P＜0.05],上调促细胞周期cyclinD1、Skp2表达,下调周期抑制蛋白p21、p27表达,使停滞在G0/G1期的细胞比例减少,改善细胞增殖活性[（1.38±0.09）vs（0.44±0.10）,P＜0.05]. 结论 GLP-1可通过降低氧化应激水平及对不同细胞周期蛋白表达的调节改善波动性高糖抑制的胰岛细胞增殖活性.     

实时定量PCR法分析2型糖尿病患者肠道乳酸杆菌菌种数量的改变

目的:明确2型糖尿病患者与正常对照人群比较是否存在总乳酸杆菌及其具体菌种嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌数目的差异,以及探索乳酸杆菌与血糖、血脂等代谢指标是否相关.方法:选取2型糖尿病患者50人、正常对照者30人作为研究对象,两组性别、年龄、BMI相匹配.检测糖尿病患者空腹血糖、餐后2h血糖、血脂、C反应蛋白等指标,并收集糖尿病患者及对照者粪便提取细菌总DNA,通过实时荧光定量PCR方法测定目标细菌的拷贝数.结果:2型糖尿病组肠道乳酸杆菌(P<0.001)及嗜酸乳杆菌(P<0.001)、保加利亚乳杆菌(P<0.001)、干酪乳杆菌(P=0.008)、鼠李糖乳杆菌(P<0.001)显著高于对照组,且乳酸杆菌与低密度脂蛋白胆固醇显著负相关(P=0.04).结论:2型糖尿病患者肠道总乳酸杆菌及其某些具体菌种数量增多,乳酸杆菌数量的改变对血脂也存在影响.通过饮食调节肠道乳酸杆菌含量可能有助于改善糖尿病、高脂血症等代谢性疾病.     

Ewing试验及心率变异性对初诊2型糖尿病患者心血管自主神经病变诊断的比较

目的了解初诊2型糖尿病患者的心血管自主神经病变（CAN）患病情况及其特点,比较Ewing试验及心率变异性（HRV）两种常用评价方法对诊断CAN的差异。方法以2009年5月至2010年12月广东省4家医院（中山大学附属第三医院、汕头大学医学院第一附属医院、广东省人民医院、南方医科大学珠江医院）内分泌科收治的90例初诊2型糖尿病患者为糖尿病组,其中男58例,女32例,平均年龄（47±1）岁。以同期40名健康体检者为对照组,其中男21名,女19名,平均年龄为（45±2）岁。所有受试者均接受Ewing试验和24h动态心电图检查并分析HRV指标以诊断CAN,对比两种方法的结果差异。计量资料间比较采用t检验或单因素方差分析,等级资料采用秩和检验。结果（1）Ewing试验显示糖尿病组CAN阳性率[22．2％（20／90）]高于对照组[7．5％（3／40）,X2=4．12,P〈0．05];糖尿病组Ewing试验总评分（92．5分）高于对照组（7．0分,Z=-3．72,P〈0．01）,Ewing试验各指标（Valsalva指数、深呼吸心率差、立卧位心率变化及血压差）评分均较对照组升高,差异均有统计学意义（z值分别为-2．99、-2．23、-1．99、-2．36,均P〈0．05）。（2）HRV分析显示糖尿病组CAN阳性率[34．4％（31／90）]高于对照组[12．5％（5／40）,X2=6．66,P〈0．05];糖尿病组HRV中反映副交感神经功能的指标[全部正常窦性心搏问期（N—N）的标准差、连续5min正常R—R间期均值的标准差及低频功率]均降低,与对照组相比差异均有统计学意义（t值分别为2．06、2．24、6．48,均P〈0．05）,而代表交感神经功能的指标（全程相邻N．N间期之差的均方根值、相邻R—R间期差异≥50ms的百分数、高频功率）差异均无统计学意义（t值分别为0．27、0．15、1．40,均P〉0．05）。结论Ewing试验和HRV检测均显示初诊2型糖尿病患者中CAN阳性率较高,且以副交感神经损害为主;HRV检测较Ewing试验的CAN阳性率高。