RGD�����δ��ѱ��������������άϸ������Ƥϸ��𤸽Ӱ���о�

目的    探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽修饰纯钛表面对人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGF）和上皮细胞（human gingival epithelial cells，HGE）初期黏附行为的影响。方法    应用羰基二咪唑（1，1′-carbonyldiimidazole，CDI）活化法将含RGD的短肽共价连接到纯钛表面，免疫荧光法检测钛表面RGD肽。评价RGD接枝与未接枝纯钛表面对HGF和HGE初期黏附的影响。结果    RGD肽可以通过CDI活化方法接枝到纯钛表面，HGF和HGE在RGD接枝钛表面黏附和增殖的细胞数量显著高于未接枝钛表面，差异有统计学意义（P < 0.01）。结论    生物活性肽RGD接枝纯钛表面可有效促进HGF和HGE在其表面的黏附。     

在多孔钛片表面固定精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的一种新方法

目的应用层层静电自组装技术构建一种新的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)固定方法,并与物理吸附和化学偶联法进行比较。方法55片10mm×10mm×1mmTi-6Al-4V片经喷砂、双重酸和过氧化氢热处理后,30片应用层层静电自组装技术固定RGD,并与物理吸附、应用CDI的化学偶联技术固定RGD相比较。场发射扫描电镜(FSEM)观察RGD固定过程中钛片表面形貌情况,荧光显微镜大体观察固定到钛片上的RGD数量。结果FSEM显示物理吸附和新的固定方法不会破坏钛片的表面形貌,而应用CDI的化学偶联则破坏钛片原有的表面形貌,大小不等的多极孔洞被完全破坏。荧光显微镜图片显示物理吸附固定到钛片表面的RGD较少,而应用CDI的化学偶联和新的固定方法固定到钛片表面的RGD较多。结论采用层层静电自组装技术有利于将RGD固定到钛表面且不破坏种植体表面形貌,同时可保证数量和结合强度。     

钛纳米管表面RGD修饰工艺的初步研究

目的：通过在TiO2纳米管表面构建RGD（Arg—Gly—Asp）活性肽阵列,掌握钛纳米管表面制备活性肽阵列的工艺方法。方法：通过阳极氧化法在纯钛表面制备TiO2纳米管阵列,通过扫描电镜、原子力显微镜和荧光显微镜研究化学偶联法将RGD组装在钛纳米管表面的工艺。结果：采用3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）对钛纳米管预处理2h,然后用交联剂N-琥珀酰亚胺3-马来酸亚胺丙酸酯（SMP）连接钛纳米管上的氨基和RGDC中的硫醇基将RGDC组装在钛纳米管上。结论：使用化学偶联的方法,可将RGD短肽共价连接钛纳米管表面构成RGD生物活性涂层。     

RGD肽修饰的纯钛种植材料表面成骨细胞黏附增殖能力

目的:评价精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽修饰纯钛表面对细胞早期黏附增殖影响. 方法:利用分子自组装技术氨基化纯钛表面,化学接枝GYRGDS肽,计算不同时点材料表面黏附细胞数;不同浓度RGD肽液预处理接种前细胞,计算材料表面细胞黏附率;MTT法和扫描电镜分别检测材料表面细胞的增殖、生长.结果:RGD肽修饰的纯钛表面细胞早期黏附率、增殖活性和生长情况在各时点均优于未修饰组,高浓度肽液预处理对RGD肽修饰组表面细胞有较强黏附抑制作用.结论:采用分子自组装技术可将活性RGD肽稳定的化学接枝于纯钛表面,修饰后材料的细胞早期黏附增殖等生物学行为有明显改善.     

人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/壳聚糖纳米复合体制备

目的 构建人骨形态发生蛋白（BMP）2的真核表达型载体,并利用其与壳聚糖制备纳米复合体。方法 体外利用双酶切法将pMD18T-hBMP2-His质粒与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体;采用5种不同相对分子质量及脱乙酰度的壳聚糖,通过去溶剂法在不同N/P比（壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比）情况下制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体。ZetaPALS电位及粒度分析仪检测纳米复合体的粒径大小、分布及Zeta电位,琼脂糖凝胶电泳分析及荧光分光法评定壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体的包裹情况,原子力显微镜观察粒径形貌。结果 1）成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体,并经酶切、测序证实;2）成功制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体,壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有包裹作用;3）制备的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合体呈球状,粒径为111.7~3 214.2 nm,Zeta电位为4.93~16.79 mV。结论 壳聚糖可与pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合形成纳米微粒。     

生物活性氧化锆对成骨细胞粘附、增殖及矿化的影响

目的 观察精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽复合体修饰的氧化锆材料对小鼠成骨细胞粘附、增殖及矿化的影响。 方法 采用等离子喷涂的方法在钛片表面制备氧化锆涂层,经羟基化、硅烷化后在其表面连接精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽复合体（Arg-Gly-Asp tripeptide complex,RGD）,并培养小鼠成骨细胞。使用激光共聚焦显微镜观察材料表面成骨细胞的粘着斑分布,并在培养24、48、72 h后进行细胞计数评价细胞增殖水平,用蛋白质印迹法检测成骨指标：碱性磷酸酶及骨钙素评价细胞矿化水平。 结果 带有RGD的氧化锆涂层表面成骨细胞形成更多粘着斑,增殖活性高,并且碱性磷酸酶及骨钙素表达水平升高。 结论 带有RGD的生物活性氧化锆涂层对成骨细胞的粘附、增殖及矿化具有促进作用。     

钛表面接枝 大分子季铵盐抗菌性的研究

目的:在钛表面接枝大分子季铵盐,以增强钛种植体的表面抗菌效果。方法:采用表面引发原子转移自由基聚合反应(ATRP)引发甲基丙烯酸 N,N-二甲氨基乙酯 (DMAEMA)单体在钛片表面聚合,获得含叔胺基团的高分子聚合物刷,然后与十六烷基溴发生季铵化反应,在钛表面形成通过共价键连接的季铵盐涂层。用用静态接触角仪、傅立叶红外光谱仪(FTIR)、X射线光电子能谱(XPS)对改性的钛表面进行表征;以纯钛为对照组,季铵化后的钛片作实验组,分别在其表面进行变形链球菌(S.m)和大肠杆菌(E. coli )培养,4、 24 h后用荧光显微镜和扫描电镜 检测钛片表面的细菌活性。 结果:静态接触角仪、傅立叶红外光谱仪、X射线光电子能谱仪等结果证明大分子季铵盐被接枝到钛片表面。荧光显微镜显示无论是G⁺变形链球菌还是G^-大肠杆菌,纯钛表面均有大量的活细菌;而实验组上细菌几乎全为死菌。SEM显示实验组钛片表面的细菌比空白组钛表面量明显少些,结果与荧光显微镜结果一致。结论:钛表面成功接枝大分子季铵盐物季铵盐,接枝大分子季铵盐的钛表面对变形链球菌和大肠杆菌具有显著的杀菌作用。     

纯钛微弧氧化-多巴胺-环型多肽涂层的细胞相容性研究

目的:探讨纯钛种植体表面加载环型多肽对成骨细胞生物行为的影响。方法:微弧氧化组为M组,微弧氧化加载多巴胺组为P组,微弧氧化加载多巴胺接枝环环肽组为R组。扫描电镜对3组钛片进行表面形貌分析,能谱仪分析3组试件元素成分。CCK-8检测成骨细胞不同时间点在3组的增殖黏附能力,激光共聚焦观察成骨细胞在3组涂层表面的铺展情况。结果:扫描电镜及能谱显示涂层加载成功,CCK-8显示R组的A值在各个时间点上都高于M组和P组,且各组比较具有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦观察R组细胞数目最多,伪足较多,细胞联系最为紧密。结论:纯钛表面加载环肽后能有效的促进成骨细胞早期的黏附及增殖。     

选择性激光烧结多孔钛种植体及其性能研究

目的 分析选择性激光烧结（SLS）多孔钛种植体的机械性能及生物相容性,探讨其与壳聚糖（CS）/羟磷灰石（HA）复合涂层结合后的促骨结合作用。方法 制备Ti6Al4V试件,部分试件表面进行CS/HA涂层处理;对试件进行扫描电子显微镜观察和机械性能检测;体外培养MC3T3-E1细胞,进行活/死细胞染色、甲基噻唑基四唑（MTT）及碱性磷酸酶（ALP）水平检测;将柱状螺纹种植体植入兔股骨髁部,分析其体内生物学性能。结果 试件准弹性梯度随孔隙率增大而减小,孔隙率为30%时与皮质骨接近,70%时与松质骨接近;试件具有良好的生物相容性。复合CS/HA涂层后可促进MC3T3-E1细胞增殖、分化,有利于骨组织长入孔隙,形成良好的骨结合。结论 多孔钛种植体具有良好的机械性能和生物相容性,与CS/HA涂层结合后具有骨诱导性,利于形成稳定的骨结合。     

层层静电自组装构建载药种植体的研究

目的 构建一种长效、靶向的携带促骨形成药物HU-308的药物缓释种植体,观察其体外缓释特性。方法 采用层层静电自组装技术制备不同层数的肝素/壳聚糖涂层,以物理吸附的方式装载促骨形成药物HU-308,构建载药种植并进行体外释放实验。通过紫外可见光分光光度计测定药物浓度,分析不同涂层数载药种植体的加载效率及释放规律。用扫描电镜、原子力显微镜观察涂层表面形貌和结构的变化。结果 成功地制备了载HU-308涂层种植体。体外释放实验表明,随着涂层层数的增加,载药量逐渐增加,但T20组略有下降。随着层数的增加,HU-308的释放速度随之减缓,缓释能力增强。扫描电镜、原子力显微镜结果表明种植体表面肝素/壳聚糖涂层逐渐形成。结论 层层静电自组装技术成功构建载有HU-308的涂层种植体,可长期有效释放达30 d以上,这有望为临床上提高骨质疏松症患者种植体骨整合率提供一种新的可能。     

钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖、分化的影响

目的:研究钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖和分化的影响。方法:1)两步法在钛表面制备仿生磷酸钙涂层,扫描电子显微镜(SEM)观察形态,X射线衍射(XRD)、傅立叶转换红外光谱(FTIR)检测表征;2)RGD固定至仿生磷酸钙涂层;3)实验分3组:纯钛组,钛/仿生磷酸钙涂层组,钛/RGD/仿生磷酸钙复合涂层组,细胞分别接种至3组材料表面。4)SEM观察细胞接种4 h和24 h的形态;5)结晶紫染色检测细胞接种4 h和8 h的黏附情况。6)MTT法检测细胞1、3、7 d的增殖活性;7)检测细胞3、7、14 d的ALP活性。结果:SEM细胞形态观察及结晶紫染色结果显示,RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞黏附效果优于对照组。MTT结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞增殖活性强于对照组。ALP检测结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的成骨分化活性高于对照组。结论:钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞的黏附、增殖、分化均有促进作用。     

RGD�������ε�SLA��Ƭ������С����ǽ��Ӱ���о�

??Objective    To observe whether the modified sandblasted??large-grit and acid-etched??SLA??surface titanium discs by the immobilized Arg-Gly-Asp??RGD??peptide via chemical grafting methods would promote the osseointegration in diabetic Guangxi BA-MA mini-pig models. Methods    The experiment was carried out in the Comparative Laboratory of General Hospital of Nanjing Military Region from June 2014 to October 2015. Five Guangxi BA-MA mini-pigs were used for this research. Three of them were randomly induced into diabetes models by using streptozotocin??STZ??as diabetes model??DM??group??and the other two pigs were set as non-diabetes model??NDM??group. RGD peptite was grafted on the SLA surface of titanium implant discs with chemical coupling method. Each mini-pig was implanted separately three SLA titanium discs and three RGD-SLA titanium discs??discs diameter = 5 mm??in maxilla. All animals were sacrificed at one month. Samples were fixed by 4% formaldehyde and analyzed by MicroCT and undecalcified histology methods. Results    During the observation period??there were no significant differences in the parameters of bone mineral density??BMD????bone trabecular thickness??Th.Th????trabecular number??Th.N??and trabecular spacing??Th.Sp??between the groups. Resin embedded tissue histological analysis showed that the bone contact ratio of NDM-RGD-SLA group??64.8%±18.4%??are significant higher than DM-RGD-SLA group??33.9%±11.7%????NDM-SLA group??39.5%±20.9%?? and DM-SLA group??36.4%±15.9%??. No significant differences were found when compared within other groups. Conclusion    RGD peptide modified SLA titanium discs obviously promoted bone to implant contact. Whether animals have diabetes or not??there is no significant effect on the osseointegration between titanium discs and the jaw bones. However??when modified by RGD peptide?? the SLA discs can obviously improve bone formation around implants in NDM animals??not in DM animals. It implies that diabetes may inhibit the osseointegration effects of RGD peptide.     

RGD多肽修饰的SLA钛片对糖尿病小型猪骨结合影响研究

目的    探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp,RGD）多肽修饰的喷砂大颗粒酸蚀（sandblasted,large-grit and acid-etched,SLA）钛片对糖尿病小型猪骨结合的影响。方法    本研究于2014年6月至2015年10月在南京军区总医院比较实验室进行。选取健康的广西巴马小型猪5只,用链脲佐菌素（STZ）随机诱导3只小型猪建立糖尿病模型,作为糖尿病组（diabetes model group,DM组）;另2只正常饲养,作为非糖尿病组（non-diabetes model group,NDM组）。利用化学偶联法将RGD多肽接枝到SLA钛片上。每只小型猪上颌骨按预定方案植入6枚直径为5 mm的钛片,其中包含3枚SLA钛片（分别为DM-SLA组和NDM-SLA组）、3枚RGD多肽修饰的SLA钛片（分别为DM-RGD-SLA组和NDM-RGD-SLA组）。在植入钛片后1个月处死动物,取上颌骨,4%多聚甲醛固定。用MicroCT、硬组织切片以及SPSS21.0软件对实验结果进行分析。结果    MicroCT检测结果显示,在观察期内各组骨密度（BMD）、骨小梁厚度（Th.Th）、骨小梁数量（Th.N）和骨小梁间隙（Th.Sp）的差异均无统计学意义（均P > 0.05）。硬组织切片分析显示,NDM-RGD-SLA组的钛片周围骨结合率（64.8% ± 18.4%）与DM-RGD-SLA组（33.9% ± 11.7%）、NDM-SLA组（39.5% ± 20.9%）和DM-SLA组（36.4% ± 15.9%）比较,差异均有统计学意义（均P < 0.05）;而其他各组两两比较,差异均无统计学意义（均P > 0.05）。结论    （1）RGD多肽对SLA钛片周围骨结合有明显促进作用。（2）在实验的观察期内,动物是否患有糖尿病,对钛片与颌骨的骨结合无明显影响;当SLA钛片复合RGD多肽后,能明显促进非糖尿病动物的骨结合,但对糖尿病动物的骨结合作用不明显,提示糖尿病可能抑制了RGD多肽的促成骨作用。     

氯己定接枝改善多孔钛抗菌性能初探

目的探讨氯己定修饰多孔钛的抗菌性能及其对成骨细胞黏附及增殖的影响,为构建具有抗菌性能的种植体提供依据。方法选取直径10.0 mm、厚度1.5 mm的光滑纯钛试件,以碱热处理后钛试件为对照组、碱热处理+共价结合氨基硅烷的钛试件为硅烷化组、碱热处理+共价结合氨基硅烷+戊二醛接枝氯己定的钛试件为接枝组。用扫描电镜观察各组试件表面形貌、X射线光电子能谱分析元素组成、接触角测量仪分析亲水性(每组6个)、酸性橙Ⅱ法分析氨基或亚胺基团含量(每组5个);用光密度法测定氯己定组5个钛试件的氯己定接枝密度;用死活菌染色及扫描电镜观察、涂板计数法、抑菌环法评价各组钛试件抗菌能力,甲基噻唑基四唑法评价各组与成骨细胞共培养1、3、5 d后的细胞活性,细菌-细胞共培养评价有菌环境中各组钛试件的细胞黏附能力。结果氯己定接枝后多孔钛表面的孔隙减小,C、N、Cl原子百分含量增加,接触角下降至37.5°±4.0°,氯己定接枝密度为(5.07±0.39)μg/cm^2;死活菌染色及扫描电镜显示氯己定组仅有少量细菌黏附且细菌壁破裂;氯己定组菌液涂板仅见零星菌落,抑菌环透亮;细胞培养1、3 d氯己定组细胞活性与对照组差异无统计学意义(P>0.05),培养5 d氯己定组细胞活性(0.547±0.087)显著小于对照组(0.751±0.056)(P<0.05);细菌-细胞共培养显示对照组钛表面黏附大量细菌,氯己定组钛表面黏附大量细胞,且细胞形态良好。结论氯己定接枝修饰的多孔钛具有良好的抗菌能力,在有菌环境中可保障细胞黏附。     

Using resorbable screws for fixation of cortical onlay bone grafts: an in vivo study in rabbits.

PURPOSE: The purpose of this study is to test bioresorbable screws as an alternative to titanium screw graft fixation. When cortical onlay grafts are used, it is necessary to rigidly immobilize them with titanium screws into the recipient site. The screws must be removed before placing implants into this site. Bioresorbable screws may be an alternative to titanium fixation, eliminating the additional morbidity associated with this. MATERIALS AND METHODS: Fifteen New Zealand White rabbits were divided into 3 groups. Bilateral tibial onlay bone grafts were placed in the mandible and secured using titanium fixation, bioresorbable fixation, or no fixation. After 6 weeks, all grafted sites were harvested. Hematoxylin-eosin and Giemsa staining were performed to evaluate inflammation, graft integration, and thickness. RESULTS: The treatment groups showed evidence of consolidation under light microscopy. Smooth integration of the graft borders with the recipient bone was identified. No integration was seen in the control group. The average thickness of the grafted sites was: 1) bioresorbable, 2.28 mm; 2) titanium, 1.87 mm; and 3) control, 1.06 mm. The differences were statistically significant (P = .0004) between the titanium group and the control group, as well as between the bioresorbable and the control group (P = .01). There was no statistically significant difference between the 2 treatment groups (P = .19). CONCLUSION: The overall thickness of the treatment specimens was greater than that of the control group. The bioresorbable group showed graft integration equal to that of the titanium group, making it an adequate alternative for graft fixation.