Cyclin D1启动子在养精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖中的作用※

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞（SSCs）增殖的分子机制。方法 将不同浓度的养精胶囊提取物加入SSCs中培养48 h，CCK-8检测细胞的增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期，荧光素酶报告基因检测Cyclin D1启动子的活性，qRT-PCR以及免疫荧光检测Cyclin D1的表达。之后进行阻断实验，在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1，同样的方法检测细胞的增殖活性、细胞周期、Cyclin D1启动子的活性以及Cyclin D1的表达情况。结果 低、中、高浓度的养精胶囊可以促进SSCs的增殖，提高S期细胞的比例，增强Cyclin D1启动子的活性，促进Cyclin D1的表达。阻断Cyclin D1后，SSCs的增殖活性降低，S期细胞比例减少，Cyclin D1启动子的活性降低，Cyclin D1的表达减少。结论 养精胶囊通过增强Cyclin D1启动子的活性提高Cyclin D1的转录和翻译水平，进而促进SSCs增殖。     

补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓ERRα和PGC-1α mRNA表达的影响

目的 探讨补肾健脾化瘀方对去势大鼠股骨骨髓组织中雌激素相关受体α（ERRα）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子-1α（PGC-1α） mRNA表达的影响。方法 40只7月龄SD雌性大鼠随机分成假手术组、模型组、中药组（补肾健脾化瘀方）、阿伦磷酸钠组。治疗12周后,小动物双能X线检测左侧股骨骨密度,HE染色观察胫骨近端骨形态,QPCR检测骨髓组织中ERRα、PGC-1α mRNA表达水平检测。结果 模型组骨密度低于假手术组（P＜0.05）;中药组与阿伦磷酸钠组骨密度高于模型组（P＜0.05）,而假手术组、中药组与阿伦磷酸钠组之间无统计学差异。与假手术组相比,模型组骨髓组织中ERRα mRNA表达水平上升（P＜0.05）,PGC-1α mRNA表达水平下降（P＜0.05）。予以药物干预后,与模型组相比,中药组骨髓组织中ERRα mRNA表达水平下降（P＜0.05）,PGC-1α mRNA表达水平上升（P＜0.05）;而阿伦磷酸钠组骨髓组织中ERRα mRNA表达水平下降（P＜0.01）,PGC-1α mRNA表达水平虽呈现增高的趋势,但无统计学差异（P＞0.05）。结论 补肾健脾化瘀方可能是通过提高骨髓组织中PGC-1α mRNA表达水平,降低ERRα mRNA表达水平,从而提高去势大鼠骨密度。     

补肾活血方通过VEGF/VEGFR2相关通路促进生精障碍模型小鼠睾丸微循环的研究

目的探索补肾活血方养精胶囊促进生精障碍模型小鼠睾丸微循环的作用及其机制。方法成年小鼠分为空白组、环磷酰胺(CP)模型组、养精胶囊(YC)治疗组(低、中、高剂量)。以石蜡切片HE染色观察小鼠睾丸组织形态;以石蜡切片免疫组化及Western-blotting检测小鼠睾丸CD34表达;RT-qPCR与Western-blotting分别检测组织VEGFR2、SRC、AKT1的mRNA与蛋白表达。结果模型组CD34染色深度与蛋白表达均明显低于空白组,虽然YC低、中、高剂量组CD34的染色深度逐步加深,但只有YC高剂量组CD34蛋白表达明显高于模型组;模型组小鼠睾丸Vegfr2的mRNA表达明显高于空白组,而模型组小鼠睾丸VEGFR2的蛋白表达较空白组明显下降,YC高剂量组小鼠睾丸VEGFR2的蛋白水平较模型组明显上升。各组小鼠睾丸在Src与Akt1的mRNA表达上无统计差异,但在蛋白表达上,模型组小鼠睾丸SRC表达较空白组明显降低,而YC高剂量组小鼠睾丸SRC蛋白水平较模型组明显提高;模型组AKT1蛋白表达较空白组明显下降,YC治疗组小鼠睾丸AKT1蛋白表达与模型组比较无统计学差异。结论补肾活血方能够通过上调小鼠睾丸VEGF/VEGFR2通路中VEGFR2与SRC的蛋白表达进而改善CP模型小鼠睾丸微循环。     

补肾壮骨冲剂对男性骨质疏松症患者骨矿含量和骨密度的影响：5年观察

目的：观察5年补肾壮骨冲剂治疗男性老年性骨质疏松症的疗效，以期了解中医药治疗男性老年性骨质疏松症远期效果。方法：选择1998—07／2004—07广州军区广州总医院门诊的部队及地方男性老年性骨质疏松症患者155例为研究对象。按患者自愿原则，将其分为治疗组86例(用补肾壮骨冲剂治疗)；空白对照组69例(只作对症处理)。采用丹麦产1100A单光子骨密度仪，测量非优势左前臂尺、桡骨。计算出前臂骨矿含量和骨密度。结果：治疗24个月后治疗组前臂骨矿含量[(1．05&;#177;0．04)g／cm]明显高于治疗前[(0．99&;#177;0．05)g／cm](t=2．77，P&;lt;0．05)；前臂骨密度[(0．42&;#177;0．01)g／cm^2]明显高于治疗前[(0．34&;#177;0．02)g／cm^2](t=2．56，P&;lt;0．05)。以后每年均能稳定骨矿含量及骨密度的水平。治疗组5年新骨折率为9％(8／86)明显低于空白对照组的骨折率23％(16／69)(x^2=5．317，P&;lt;0．05)。结论：补肾壮骨冲剂长期服用能明显提高及稳定男性老年性骨质疏松症患者骨矿含量、骨密度水平，降低新骨折率。     

补肾壮骨中药对去势雌性大鼠胫骨上端细胞立体计量学的影响

目的:观察补肾壮骨中药对绝经后骨质疏松症模型大鼠胫骨细胞水平的客观影响。方法:实验于2003-06/2005-12在解放军广州军区广州总医院实验中心完成。①选用雌性Wistar大鼠40只,9月龄。将大鼠按随机数字表法分为4组:假手术组、模型组、补肾壮骨中药治疗组、降钙素治疗组,每组10只。②麻醉大鼠后,假手术组:切开腹壁,不切除卵巢。其余各组均从背部肋下入路行完整双侧卵巢切除术。补肾壮骨中药治疗组灌胃中药补肾壮骨中药,由广东一方制药厂生产;主要成分:淫羊藿、鹿角胶、龟板胶、骨碎补、巴戟天、淮山药、山茱萸、生地黄、肉桂等;批号:020310,100g/袋;冲剂以温开水溶至浓度为600g/L,用量1mL/(g·d),1次/d。降钙素治疗组:隔次于大鼠双侧前肢外侧皮下注入鲑鱼降钙素注射液(诺华制药厂生产,50IU/支,批号:010208),每次1.04U/kg,每周2次。假手术组、模型组均灌胃等量饮水。③各组均干预3个月,然后取出胫骨上端骨骺部分,做5μm不脱钙切片。用MORPHUMETPYⅡ程序处理数据,计算骨小梁体密度、面密度以及成骨细胞、破骨细胞体密度、数密度。④组间计量结果差异比较采用t检验。结果:实验期间有5只动物因实验操作不当死亡,最终进入结果分析假手术组9只,模型组10只,补肾壮骨中药治疗组8只,降钙素治疗组8只。①骨小梁体密度和面密度:模型组均明显低于假手术组(t=2.215,2.232,P<0.05);补肾壮骨中药治疗组均明显高于模型组(t=2.267～2.308,P<0.05),而与假手术组和降钙素治疗组比较,差异不明显(P>0.05)。②成骨细胞体密度和数密度:模型组均明显低于假手术组(t=2.213,2.215,P<0.05);补肾壮骨中药治疗组均明显高于模型组(t=2.143～2.218,P<0.05),而与假手术组和降钙素治疗组比较,差异不明显(P>0.05)。③破骨细胞体密度和数密度:模型组均明显高于假手术组(t=2.235,2.241,P<0.05);补肾壮骨中药治疗组均明显低于模型组(t=2.225～2.237,P<0.05),而与假手术组和降钙素治疗组比较,差异不明显(P>0.05)。结论:补肾壮骨中药可能通过抑制骨吸收,促进骨组织形成的作用预防和治疗骨质疏松症。     

大鼠骨髓间充质干细胞及不同组织中17β－雌二醇的表达情况

目的:通过检测17β-雌二醇在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)和不同组织中的表达情况,初步探索非性腺源性雌激素的分泌情况,为进一步研究BMSCs的生理功能以及绝经后骨质疏松的发病机制提供依据。方法:Elisa法检测0、24、48 h时BMSCS培养上清及细胞裂解物中的17β-雌二醇水平。选取SD大鼠不同组织,称重后物理破碎,Elisa法检测不同组织中的17β-雌二醇含量。结果:48 h培养上清中17β-雌二醇浓度较24 h培养上清中明显升高(P<0.05)。卵巢及软骨组织中17β-雌二醇的浓度高于其他组织,但不具有明显统计学差异(P>0.05)。结论:大鼠BMSCs可自身合成及分泌17β-雌二醇,其浓度在一定范围内与时间成正比,但对其自身或周围组织是否具有自分泌或旁分泌作用,还有待进一步研究。大鼠不同组织中17β-雌二醇浓度无明显差异,说明其旁分泌现象可能普遍存在且无性腺依赖性,但是否由该被测位点分泌尚需要进一步研究。这种非性腺源性的雌激素可能会成为绝经后参与骨代谢并维持女性骨骼健康的主要雌激素来源。     

补肾健脾化瘀法治疗男性骨质疏松症疼痛的效果

目的:观察补肾健脾基础上加强化瘀药物制成补肾壮骨中药对男性骨质疏松患者疼痛程度的影响。方法:①选择1998-07/2004-07解放军广州军区广州总医院住院及门诊就诊的男性老年性骨质疏松症患者198例,年龄65～83岁。符合骨质疏松症综合诊断评分标准,且均对治疗方案知情同意。②按随机数字表法将患者分为2组;补肾壮骨中药组101例,降钙素组97例。补肾壮骨中药组:均囗服补肾壮骨中药(由生地、山药、山萸肉、泽泻等药物组成,广东一方制药厂生产,批号:980705,100g/包),1包/次,2次/d。降钙素组:均肌肉注射降钙素(诺华公司产品,生产批号980823,990523,011121,50IU/支),其中第1周100IU,1次/d,第2,3,4周100IU,每周2次。两组均治疗4周。③分别于治疗前,治疗1,2,3,4周后及停药后2周记录疼痛强度(共计0～10,0为无痛,10为剧烈疼痛)、疼痛缓解度(共计0～4度,0度为无缓解,4度为完全缓解),计算镇痛有效率:显效(明显缓解 完全缓解),有效(中度缓解),总有效率(显效 有效)。④计量和计数结果差异比较分别采用t检验和χ2检验。结果:男性老年性骨质疏松症患者198例均进入结果分析。①骨质疏松症疼痛强度:补肾壮骨中药组治疗后2,3,4周和停药后2周和降钙素组治疗后1,2,3,4周和停药后2周疼痛强度明显低于治疗前(t=2.35～2.93,P<0.05),补肾壮骨中药组治疗1和2周后疼痛强度明显高于降钙素组(5.32±1.21,3.26±1.32;3.49±1.39,2.21±1.28,t=2.98,2.36,P<0.05)。②骨质疏松症疼痛缓解情况:治疗2周后,补肾壮骨中药组完全缓解率明显低于降钙素组(5.9%,18.6%,χ2=6.25,P<0.05)。补肾壮骨中药组及降钙素组治疗1,3,4周后和停药后2周疼痛完全缓解率、明显缓解率、中度缓解率差异不明显(P>0.05)。③镇痛有效率:治疗2周后,补肾壮骨组镇痛显效率明显低于降钙素组(44.6%,58.8%,χ2=5.721,P<0.05),有效率和总有效率与降钙素组相近(P>0.05)。补肾壮骨中药组和降钙素组治疗4周后和停药后2周镇痛总有效率、显效率、有效率比较,差异不明显(P>0.05)。结论:补肾壮骨中药可明显缓解男性患者骨质疏松症疼痛,作用效果基本与降钙素相当。     

金保方运用养精汤治疗精子异常不育症经验

男性不育症严重影响人类的繁衍生息。由于现代医学尚未阐明导致精子异常的原因,故临床上以经验治疗为主,但效果不确切。金保方教授从"肾主生殖""久病多瘀"入手,运用补肾活血通络法,以养精汤加减治疗精子异常不育症取得较好疗效。     

养精胶囊通过LncRNA H19调控StAR促进睾酮合成的实验研究※

目的 研究养精胶囊对LncRNA H19调控StAR作用及促进睾酮合成机制。方法 以体外MLTC-1细胞培养为模型，分别加入2 mL的培养基以及终浓度为0.01 mg/mL、0.1 mg/mL、1 mg/mL的养精胶囊水提物，并将其分别作为对照组和养精胶囊低、中、高剂量组，作用24 h。通过ELISA测定细胞T和FT浓度，通过qRT-PCR、Western Blot分别检测养精胶囊对MLTC-1中LncRNA H19 mRNA、StAR mRNA以及StAR蛋白表达的影响。结果 养精胶囊水提物可以显著提高MLTC-1细胞上清T和FT浓度浓度，同时还可以明显促进LncRNA H19 mRNA以及StAR mRNA和蛋白的表达水平，与对照组比较有统计学差异（P<0.05）。结论 养精胶囊可以通过LncRNA H19调控StAR，进而增加睾酮合成。     

补肾壮骨颗粒与联合激素替代疗法对骨代谢生化指标的影响

背景：女性进入绝经期后，机体内分泌发生变化，雌激素水平开始下降，引起一系列综合征候群，表明绝经后妇女性激素与钙、磷等骨代谢生化指标有着密切的关系。目的：观察补肾壮骨颗粒对绝经早期妇女性激素及钙、磷骨代谢生化指标的影响。设计：完全随机、双肓法分组研究。地点和对象：实验由解放军广州军区广州总医院普通内科和广州越秀区妇幼保健院门诊共同完成，对象为两家医院门诊绝经早期就诊妇女132例。方法：将132例患者按随机数字表法分成补肾壮骨组63例及替代疗法组69例，分别给予补肾壮骨颗粒和尼尔雌醇和安宫黄体酮口服。治疗前后行性激素及钙、磷代谢等骨代谢生化指标的检测。主要观察指标：性激素水平，钙、磷代谢生化指标变化。结果：治疗半年后，补肾壮骨组和替代疗法组雌二醇(E2)(pmol／L)分别为158．71&;#177;39．72，189．15&;#177;36．71，碱性磷酸酶(μkat／L)分别为1070&;#177;136，1119&;#177;136，均显著上升(t=2．002～2．712，P&;lt;0．05)；尿钙／肌酐比值分别为(Ca／Cr)0．14&;#177;0．21，0．15&;#177;0．23，呈显著下降(t=2．135～2．164，P&;lt;0．05)，各指标两组比较差异无显著性意义(t=0．121，P&;lt;0．05)．结论：补肾壮骨颗粒有类激素作用，使雌激素及碱性磷酸酶升高，是防治绝经后性激素紊乱、骨代谢改变的高效、安全的中药制剂。