实时荧光定量PCR在细胞因子mRNA检测研究中的应用

RR-FQ-PCR技术是一种最新PCR技术,具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点.本文就RT-FQ-PCR概念、原理、方法、研究进展及其在细胞因子mRNA检测中的应用等作一综述.     

稳定表达hTERT/Luc的小鼠黑色毒瘤肺转移模型的建立

目的 建立稳定共表达荧光素酶基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并通过尾静脉注射的方式建立小鼠肿瘤肺转移模型.方法 利用DNA重组技术将hTERT基因和荧光素酶基因Luc定向插入到真核表达载体,构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT和pIRES-hyg3-Luc,利用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000共转染小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418及潮霉素B加压筛选出稳定转染的细胞株.应用Western blot法及免疫荧光法检测hTERT和Luc基因在B16细胞中的表达;将稳定共表达hTERT和Luc的B16-hTERT/Luc细胞株通过尾静脉注射的方式接种雄性C57BL/6小鼠建立肿瘤肺转移模型,并通过活体成像技术检测小鼠肺部肿瘤的生长.结果 建立了稳定共表达hTERT和Luc的小鼠黑色素瘤B16单克隆细胞株B16-hTERT/Luc,经检测hTERT基因和荧光素酶基因Luc在单克隆细胞株中的表达分别为84％和98％.通过尾静脉注射的方式成功建立了小鼠肿瘤肺转移模型,应用活体成像技术能方便地检测到B16-hTERT/Luc肿瘤在小鼠体内的生长情况.结论 成功建立了可用于活体成像技术检测的稳定表达hTERT的小鼠黑色素瘤肺转移模型.     

经尿道2μm激光内切开术治疗男性尿道狭窄的效果观察

目的 探讨经尿道2μm激光内切开术治疗尿道狭窄的疗效和安全性.方法 2011年3月至2012年3月对33例尿道狭窄患者应用2μm激光行内切开治疗,观察其临床效果.结果 本组31例手术成功.拔除尿管后均能自主排尿,术后3月最大尿流率（17.5±9.3） ml/s.结论 应用经尿道2μm激光内切开术治疗尿道狭窄具有出血少、围术期安全性高、并发症少等优点,而且操作安全简便,是较为理想的微创手术治疗方法.     

螺旋CT三维成像技术在后腹腔镜下保留肾单位手术前的应用价值

漏尿发生. 结论 螺旋CT三维成像技术能清晰重建肾脏解剖构像,为选择后腹腔镜下NSS治疗肾肿瘤提供可靠依据.     

缬沙坦治疗肾移植术后红细胞增多症

目的：探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦治疗肾移植后红细胞增多症的效果和安全性。方法：12例肾移植后红细胞增多症患者接受缬沙坦治疗6个月（80mg/d)，服用药物后观察血红细胞比容、血肌酐、血钾、白细胞及血小板计数变化情况。结果：服用缬沙坦用1个月，过高的红细胞比容明显下降，其中部分患者在服用药物2周后红细胞比容下降至正常水平，且红细胞比容至正常后，不因药物的继续应用而进一步下降，而是稳定在正常范围内。缬沙坦对患者血肌酐、血钾、白细胞及血小板计数无明显影响。结论：缬沙坦治疗肾移植后红细胞增多症安全、有效。     

肾癌生物治疗的研究进展

肾癌是泌尿外科常见的肿瘤，发病率占成人全部恶性肿瘤的2％～3％，肾癌早期无明显症状，等到出现症状时约50％的患者已属晚期，约40％的患者术后15～18个月发生转移或复发，转移性肾癌预后较差，平均存活时间小于1年，3年存活率低于5％，平均生存时间3～33个月。肾癌的治疗以外科手术切除为主，对放疗与化疗均不敏感，这给晚期肾癌的治疗带来一定的困难。生物治疗在临床上应用比较多且效果比较肯定。     

兔尿道上皮细胞的体外连续培养

背景:尿道损伤后的瘢痕挛缩或缺损可导致狭窄,寻找理想的修复替代材料已成为研究热点.目的:探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-04/2007-02在解放军总医院泌尿外科完成.材料:健康成年雄性新西兰雄兔6只,体质量3.0～3.5kg;实验用Dispase Ⅱ为美国Gibco公司产品.方法:取雄性新西兰兔尿道黏膜组织,分离上皮采用Dispase Ⅱ工作液,上皮细胞间的分离采用混合消化酶(1.25g/L胰蛋白酶与0.2g/L乙二胺四乙酸等体积混合)消化,以差速贴壁法排除成纤维细胞.使用DMEM与F123:1混合培养液加体积分数为0.1的胎牛血清,对上皮细胞进行原代单纯培养和传代培养;取第2～6代细胞进行上皮细胞的免疫组织化学染色,以正常尿道黏膜组织石蜡切片为阳性对照组,以成纤维细胞铺片为阴性对照组.主要观察指标:①利用倒置相差显微镜动态观察细胞形态、生长、增殖情况.②采用活细胞荧光染色法观察细胞存活状态.③以扫描电镜观察细胞超微结构.④采用免疫组织化学染色行细胞鉴定.结果:①原代培养3-5d细胞逐渐生长融合成片,如铺路石状,细胞大小均一.生长期内均为单一的上皮细胞,无成纤维细胞混杂生长,细胞可传9-10代.②第4～6代细胞在免疫荧光染色和超微结构观察中显示良好形态.③免疫组织化学证实角蛋白染色阳性.结论:应用组织工程技术,成功培养尿道上皮种子细胞.结果表明,细胞生长状态良好,增殖较快.经特异性免疫组织化学及形态学鉴定为纯化的尿道上皮细胞.     

腹膜后纤维化引起的尿路梗阻

腹膜后纤维化 (ｒｅｔｒｏｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｆｉｂｒｏ ｓｉｓ ,ＲＰＦ)系腹膜后结缔组织广泛纤维化 ,压迫血管、神经、胃肠道和输尿管出现临床症状 ,其中输尿管周围发生纤维化粘连 ,压迫上尿路引起肾积水和肾功能衰竭最为常见。我院 1986年以来共收治腹膜后纤维化 14例 ,现报告如下。1.临床资料 :本组 14例 ,男 11例 ,女 3例。年龄 2 4～ 6 7岁 ,平均 34岁。 3例直肠癌、1例胃癌、1例腰大肌纤维肉瘤、1例卵巢癌盆腔淋巴结清扫术后、2例结核、6例无明确病因。临床症状 :腰腹痛 6例 ,少尿 5例 ,无尿 3例。Ｂ超检查 :单侧肾积水 3例、一侧…     

多焦点LASIK手术老视患者围术期护理

对26例（52眼）老视屈光不正患者应用PAC软件分析处理并行多焦点LASIK手术治疗（老视调节附加＋2．5～＋3．5D），同时予以术前心理护理、完善各项检查和准备；术中密切观察、主动配合；术后加强滴药及健康指导等护理措施。结果随访6～42个月，患者均获得较为满意的远视力，无1例发生感染、上皮植入、角膜瓣异常等并发症。提示该手术方式快捷、安全，科学正确的围术期护理可提高其手术效果。     

酮咯酸氨丁三醇对兔眼准分子激光角膜切削术后角膜雾状 …

目的：探讨非甾体类抗炎药物酮咯酸氮丁三醇（Ｋｅｔｏｒｏｌａｃ Ｔｒｏｍｅｒｈａｍｉｎｅ）对兔眼准分子激光角膜切削术（ＰＲＫ）后角膜雾状混浊（ｈａｚａ）的作用效果。方法：将已行ＰＲＫ术的２４只兔眼随机分配到Ａ、Ｂ、Ｃ３组，每组８只眼。术后Ａ组点０．１％地塞米松液，Ｂ组点０．５％酮咯酸氨丁三醇眼液，Ｃ组作为空白对照。剂量为：第１月４次／ｄ，第２月３次／ｄ。术后１周、１月、２月时检查ｈａｚａ情况。结果：