PC-1基因功能研究：PC-1蛋白兔多克隆抗体制备的改进和应用

目的：获得高效价PC-1蛋白的兔多克隆抗体，用于PC-1功能的实验。 方法：实验于2004-02／08在解放军军事医学科学院生物工程研究所完成。以纯化后的PC-1蛋白及其N端46个氨基酸与GST的融合蛋白（GST—PC-1和GST-PC-1-46）为抗原，通过一种经腘淋巴结注射、免疫家兔的改进的免疫方法制备兔多克隆抗体。应用ProteinA亲和层柝纯化抗体。以酶联免疫吸附和Western-blot及免疫组化法鉴定所得抗体。 结果：①2个兔多克隆抗体的效价分别为1：12800和1：51200。②PC-1在高恶性前列腺癌细胞C4—2中高表达，在低恶性前列腺癌细胞LNCaP中有少量表达。③经免疫组化染色后，含有PC-1蛋白的C4—2及LNCaP细胞均呈阳性反应，细胞质中可见明显着色，而空泡状的胞核则没有着色，提示PC-1蛋白主要分布在细胞浆中。结论：用一种改进的免疫方法，获得高效价的、可应用于酶联免疫吸附和Western—blot及免疫组化实验的PC—1蛋白兔多克隆抗体。     

腹腔镜肾切除肾蒂血管处理方法的比较

目的评估腹腔镜肾切除术中肾血管不同处理方法的安全性、便捷性和经济性。方法经腹腔或后腹腔行腹腔镜根治性肾切除、肾输尿管全长切除或单纯肾切除52例，处理肾血管的方法包括：腔内直线切割器、威克外科结扎锁、丝线结扎与威克外科结扎锁联合应用及单纯丝线结扎。结果四种方法均顺利、安全。无术中或术后继发出血。腔内直线切割器便捷，安全性良好，但价格昂贵；威克外科结扎锁便捷，安全性优异。价格适中；丝线结扎与威克外科结扎锁联合应用较便捷，安全性好，价格适中。适合肾静脉管腔粗、结扎锁不能将肾静脉全部包绕在内的病例；单纯丝线结扎耗时长，安全性一般，费用低廉。结论腹腔镜处理肾血管时。应用威克外科结扎锁安全、方法快捷、价格适中。     

肾血管平滑肌脂肪瘤的影像学特点

肾血管平滑肌脂肪瘤 (RAML)是肾脏最常见的良性肿瘤 ,由于肿瘤脂肪成分少、无脂肪或脂肪组织被掩盖等原因 ,常使影像学表现不典型。笔者收集两家医院最近 5年经手术病理检查证实 ,而影像学表现不典型的RAML 9例 ,结合文献对其临床及影像学特点进行分析如下。1　临床资料1 1　一     

兔尿道上皮细胞的体外连续培养

背景:尿道损伤后的瘢痕挛缩或缺损可导致狭窄,寻找理想的修复替代材料已成为研究热点.目的:探索尿道黏膜上皮细胞体外培养的技术和方法,为进一步采用组织工程技术构建尿道黏膜组织奠定基础.设计、时间及地点:单一样本观察,于2005-04/2007-02在解放军总医院泌尿外科完成.材料:健康成年雄性新西兰雄兔6只,体质量3.0～3.5kg;实验用Dispase Ⅱ为美国Gibco公司产品.方法:取雄性新西兰兔尿道黏膜组织,分离上皮采用Dispase Ⅱ工作液,上皮细胞间的分离采用混合消化酶(1.25g/L胰蛋白酶与0.2g/L乙二胺四乙酸等体积混合)消化,以差速贴壁法排除成纤维细胞.使用DMEM与F123:1混合培养液加体积分数为0.1的胎牛血清,对上皮细胞进行原代单纯培养和传代培养;取第2～6代细胞进行上皮细胞的免疫组织化学染色,以正常尿道黏膜组织石蜡切片为阳性对照组,以成纤维细胞铺片为阴性对照组.主要观察指标:①利用倒置相差显微镜动态观察细胞形态、生长、增殖情况.②采用活细胞荧光染色法观察细胞存活状态.③以扫描电镜观察细胞超微结构.④采用免疫组织化学染色行细胞鉴定.结果:①原代培养3-5d细胞逐渐生长融合成片,如铺路石状,细胞大小均一.生长期内均为单一的上皮细胞,无成纤维细胞混杂生长,细胞可传9-10代.②第4～6代细胞在免疫荧光染色和超微结构观察中显示良好形态.③免疫组织化学证实角蛋白染色阳性.结论:应用组织工程技术,成功培养尿道上皮种子细胞.结果表明,细胞生长状态良好,增殖较快.经特异性免疫组织化学及形态学鉴定为纯化的尿道上皮细胞.     

肾癌局部复发的手术治疗

目的 提高肾癌局部复发的治疗水平.方法肾癌术后局部肿瘤复发患者7例.根治性肾切除术5例,原发肿瘤直径5.6～9.6 cm,平均6.5 cm;保留肾单位手术2例,原发肿瘤直径均<3.0 am.年龄19～64岁,平均42岁.肿瘤局部复发时间为术后12～54个月,平均23个月.复发肿瘤直径2.5～10.5 cm,平均5.2 cm.结果 行复发肿瘤切除术5例,复发肿瘤及肾切除术2例.7例手术均成功.术中出血150～3000 ml.患者术后恢复顺利.1例复发肿瘤压迫髂腹下神经,分离过程中因过度牵拉神经束,术后出现短暂的术侧下肢皮肤疼痛.1例术中分离损伤小肠,破孔1 cm,给予修补,术后恢复良好.余5例无明显术中和术后并发症.6例随访8～27个月,平均13个月.局部再次复发2例;出现远处转移2例,其中行免疫治疗1例,复发肿瘤切除术后22个月死亡1例.结论肾癌局部复发后再手术难度较大、出血较多,但大部分复发可以手术切除,延长患者的生存期.     

分子靶向治疗后肾透明细胞癌肺转移灶囊样薄壁空洞形成(附2例报告及文献复习)

目的 探讨肾透明细胞癌肺转移灶经分子靶向治疗后发生薄壁空洞改变的CT表现和临床意义.方法 回顾性分析2例肾透明细胞癌经分子靶向药物Pazopanib治疗后肺转移灶出现薄壁空洞改变的相关病例临床及影像学资料.结果 2例肾透明细胞癌原发灶切除术后,双肺多发实性转移灶,增强扫描多数病灶呈环形强化;经Pazopanib治疗3个月后大多数转移灶呈薄壁空洞样改变.病例1病情进展缓慢;病例2出现自发性气胸,2个月后死亡.结论 分子靶向药物治疗促进了肾透明细胞癌肺转移灶坏死,有助于囊样薄壁空洞形成,但这种变化对预后的影响具有不确定性.     

枸橼酸西地那非片治疗男性勃起功能障碍有效性及安全性评价

目的：评价枸椽酸西地那非片治疗男性勃起功能障碍的有效性及安全性。方法：采用多中心、随机双盲、安慰剂平行对照、剂量视情增减的设计方案，240名受试在4周筛选期后进入8周的治疗期，在筛选期及研究结束时填写国际勃起功能问卷（International Index of Erectile Function，IIEF）。研究根据受试记事表、IIEF和总评题对受试进行疗效评价。结果：主要疗效指标临床总有效率西地那非组为83.33%，安慰剂组25.00%，西地那非对心理性、器质性和混合性勃起功能障碍的有效率分别为70.83%、80.00%、89.39%。总评题：西地那非组有88.03%的受试认为研究药物改善了其勃起功能，安慰剂组24.58%。受试记事表显示：西地那非组受试的性生活成功率为77.77%，安慰剂组24.17%，不良反应发生率西地那非组30.83%，安慰剂组8.33%，表现为轻度和短暂的面部潮红、头晕、头痛、鼻塞、口干及消化道不适。仅一名受试因不良反应而终止研究。结论：枸椽酸西地那非片为一种安全、有效的治疗男性勃起功能障碍的药物。     

负向免疫调节树突细胞对心脏移植大鼠Th1/Th2类细胞因子的影响

目的 探讨受体树突细胞(DC)与体外光化学法(PUVA)处理的供体脾淋巴细胞共培养后,对心脏移植受体Th1/ThZ类细胞因子及移植物存活的影响.方法 以DA大鼠为供体,LEW大鼠为受体,建立大鼠腹部异位心脏移植模型.分离正常的供体脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的供体脾淋巴细胞(PWA-SP).在体外将PWA-SP或SP与受体骨髓来源的未成熟DC共同培养,检测上述处理对受体DC分泌白介素-10(IL-10)及干扰素-γ-(IFN-γ)的影响.按受体术前1周静脉输注的细胞成分将受体大鼠随机分为3组:对照组(n=7),单纯输注PBS;SP DC组(n=8).输注负载供体SP的受体大鼠DC;PWA-SP DC组(n=8),输注负载PUVA处理的供体SP的受体大鼠DC.观察移植物的存活时间,移植术后6d检测受体血清中Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)及Th2细胞因子(IL-10),并取移植心脏标本作切片检查,确定排斥反应的病理分级.结果 受体DC与供体PUVA-SP共培养后,其分泌的细胞因子IL-10、IFN-γ的水平分别为75.3±3.7、24.3±1.2ng/ml,明显高于同供体SP共培养后的受体DC(分别为39.0±3.1ng/ml、12.1±0.5ng/ml,P<0.01).心脏移植术后,PUVA-SP Dc组受体大鼠血清中Th1细胞因子IL-2和INF-γ的浓度分别为199.3±8.4、9.0±1.2ng/ml,明显低于对照组(分别为295.0±3.2、61.0±3.2ng/ml,P<0.01)及SP DC组(分别为559.3±35.3、69.0±2.3ng/ml,P<0.01),而其Th2细胞因子IL-10水平(58.2±0.9ng/ml)明显高于对照组(19.0±0.6ng/ml,P<0.01)及SPDC组(20.1±1.6ng/ml,P<0.01).PUVA-SP DC组移植物排斥反应病理分级明显低于对照组,而对照组移植物排斥反应病理分级则低于SP DC组.与对照组(6.7±0.3d)比较,PUVA-SP DC组移植物存活时间(27.3±1.3d)显著延长(P<0.01),而SP DC组移植物存活时间短于对照组(5.5±0.3d,P<0.05).结论 PUVA-SP DC具有负向免疫调节特性,能够在移植物受体体内诱导Th2免疫偏移,下调移植物排斥反应.     

多发性尿路上皮肿瘤的单克隆起源

目的　验证泌尿系上皮移行细胞癌单克隆起源学说。　方法　应用免疫组化染色方法 ,检测 10例 2 2块多发性尿路上皮移行细胞癌组织标本p5 3蛋白的表达 ,以此判断多发肿瘤灶基因的突变 ,比较多发肿瘤灶的基因型。　结果　同一患者不同部位肿瘤标本 p5 3染色阳性细胞的比例和染色强度完全一致 ,因此 ,肿瘤多克隆起源的可能性为 0 .5 1× 0 .5 1× 0 .5 2 × 0 .5 1× 0 .5 2 × 0 .5 1×0 .5 1× 0 .5 1× 0 .5 1× 0 .5 1=0 .5 12 =0 .0 0 0 12 2 (<10 -3 ) ,即同一患者多个肿瘤灶的基因型相同。　结论　多发性尿路上皮肿瘤为单克隆起源