热休克蛋白72肽结合区对肾小管上皮间质转分化的影响

目的 探讨热休克蛋白72肽结合区在肾小管上皮间质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制.方法 应用质粒转染方法分别诱导热休克蛋白72(HSP72)野生型、肽结合区缺失型(HSP72-△PBD)和肽结合区(PBD)的表达.用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)48 h,Western印迹和免疫荧光染色检测细胞E-钙黏蛋白(cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(SMA),HSP72和Smad3/磷酸化(p)-Smad3蛋白表达.结果 TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK-52E细胞48 h后上调α-SMA和下调E-cadherin蛋白表达水平.Western印迹及细胞免疫荧光显示,过表达HSP72和PBD能明显减轻TGF-β1诱导的NRK-52E细胞E-cadherin蛋白表达下调和α-SMA蛋白表达上调,而过表达HSP72-△PBD不能改变上述蛋白的表达.此外,过表达HSP72和PBD显著抑制Smad3的磷酸化.结论 HSP72抑制Smad3活化和EMT的发生可能与PBD的功能有关.     

腹膜透析相关性真菌性腹膜炎20例临床分析

目的探讨腹膜透析相关性真菌性腹膜炎(FP)的易感因素、诊治和转归。方法回顾分析2000年1月～2005年11月期间中山大学附属第一医院肾内科收治的CAPD相关性真菌性腹膜炎的临床表现、病源菌、治疗、转归,并与同期收治的革兰氏阳性(G~ )球菌、革兰氏阴性(G~-)杆菌腹膜炎进行分组对比。结果腹膜透析相关性腹膜炎205例,其中真菌性腹膜炎20例(9．76%)；真菌性腹膜炎组、G~ 球菌组、G~-杆菌组3组间的发病年龄、性别、血白细胞计数、透出液细胞计数、开始透析时间差异无统计学意义(P＞0．05),真菌性腹膜炎组腹部压痛、反跳痛的发生率显著高于其余两组(P＜0．05)；17例(85%)患者1月内有腹腔/全身系统使用抗生素史：真菌性腹膜炎组6例(30%)死亡,其余14例转血液透析,死亡率及腹膜透析退出率显著高于其余两组(P＜0．05)。结论腹腔/全身使用抗生素是腹膜透析相关真菌性腹膜炎发生的高危因素,真菌性腹膜炎临床症状较重,预后不良,确诊后早期拔管可能可以降低死亡率。     

透出液蛋白丢失与连续性非卧床腹膜透析患者营养不良-炎性反应-动脉硬化综合征的相关性

Objective To investigate the impact of peritoneal albumin leakage on malnutrition-inflammation-atherosclerosis (MIA) syndrome in continuous ambulatory peritoneal dialysis (CAPD) patients. Methods A cross-sectional study of a cohort of 130 CAPD patients without edema or active infection was performed. In order to identify peritoneal transport characteristics in CAPD patients, a standard peritoneal equilibration test (PET) was carried out. For malnutrition and inflammation, serum albumin and high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP) levels were measured. Mean-carotid artery intima media thickness (IMT) was used to determine atherosclerosis. Residual glomerular filtration rate (rGFR) was defined as the average of 24-hour urinary urea and creatinine clearances. Results Pearson and Spearman correlation analysis showed that peritoneal albumin leakage amount was positively correlated with age, body mass index, night dwell time, blood glucose, 4 h D/P creatinine levels and hs-CRP levels (r=0.204, P<0.05 ;r=0.314, P<0.01; r=0.265, P<0.01; r=0.212, P<0.05; r=0.401, P<0.01; r=0.216, P<0.05); whereas it was negatively correlated with diastolic perssure, serum albumin levels, glucose level of dialyzate and peritoneal Kt/V (r=-0.209, P<0.05; r=-0.123, P<0.05; r=-0.271, P<0.01; r=-0.212, P<0.01). Overall, there was no correlation between peritoneal albumin leakage and IMT. Patients was significantly greater (P<0.01), and there was a positive correlation between peritoneal albumin leakage amount and IMT (r=0.650, P<0.01). Conclusions Peritoneal albumin leakage is significantly associated with peritoneal transport characteristics, malnutrition and inflammatory state in CAPD patients. High peritoneal albumin leakage amount is a risk factor for atherosclerosis in patients with rGFR less than 1 ml·min-1(1.73 m2)-1.     

Notch通路在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的活化

目的 观察Notch通路在高浓度葡萄糖透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的变化并探讨其可能机制。 方法 给予SD雄性大鼠每日腹腔注射高浓度葡萄糖腹膜透析液，于实验后2周和4周杀检。取壁层腹膜组织行光镜检查；免疫印迹检测转化生长因子β1 （TGF-β1）、 E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和I型胶原蛋白（Col I）的表达；RT-PCR检测Notch通路的下游靶基因Hes-1的表达；免疫印迹和RT-PCR检测Notch配体Jagged-1和Notch通路的负性调节因子Numb的表达。 结果 HE染色显示模型组腹膜明显增厚，间皮细胞减少；Masson染色显示壁层腹膜中可见明显的胶原沉积。与健康对照组相比，模型组的TGF-β1、α-SMA 和 Col I的表达增加而E-cadherin的表达下降（均P < 0.01）。4周模型组与对照组相比Jagged-1表达明显增加（P < 0.05），同时Hes-1的表达亦明显增加（P < 0.01），而Notch通路的负性调节因子Numb的表达下降（P < 0.01）。 结论 在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致的大鼠腹膜纤维化模型中有Notch通路的活化，而该通路的活化可能与Notch通路的负性调节因子Numb表达的下调有关。高表达Notch通路的负性调节因子，如Numb，可能是治疗腹膜透析患者腹膜纤维化的新途径。     

囊泡型H+-ATPase B1 亚基的突变对大鼠内髓集合管细胞H+-ATPase结构和泵氢功能的影响

目的 研究致遗传性远端肾小管酸中毒（dRTA）的囊泡型H+-ATPase B1 亚基（ATP6V1B1）的点突变对大鼠内髓集合管（IMCD）细胞H+-ATPase结构和泵氢功能的影响。 方法 模拟致人类遗传性dRTA的 B1亚基点突变构建野生型（WT）和7种突变型（M)质粒,转染大鼠IMCD细胞并筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）-B1 M和GFP-B1 WT的IMCD细胞系。应用免疫荧光、免疫蛋白印迹法、ATP-NADH 耦合实验和快速酸负荷后不依赖钠的细胞内pH的变化,来观察GFP-B1 M和GFP-B1 WT在细胞内的分布,及其与H+-ATPase其他（E、H和c）亚基结合能力对ATP酶活性和H+-ATPase 泵氢功能的影响。 结果 GFP-B1 WT在转染细胞中呈囊泡样分布,与H+-ATPase的分布一致;而GFP-B1 M 则为弥散分布。免疫沉淀结果显示只有GFP-B1 WT融合蛋白能和其他的H+-ATPase 亚基（E、H和c）结合形成复合物,而 GFP-B1 M融合蛋白无此作用。ATP酶活性只有在GFP-B1 WT转染细胞株的免疫沉淀产物中存在,在GFP-B1 M转染细胞株的免疫沉淀产物中不存在。在GFP-B1 M 转染的IMCD细胞快速酸负荷后H+-ATPase介导的钠不依赖pHi 的恢复受到显著抑制[pHi的恢复率（pH U/min）在L81P、R124W、M174R、P275R、G316E、P346R、G364S GFP-B1M转染的IMCD细胞分别为0.007±0.002、0.004±0.002、0.002±0.002、0.003±0.002、0.006±0.004、0.009±0.004、0.015±0.006,P < 0.05,n = 5]。而GFP-B1 WT转染的IMCD细胞pHi的恢复率与未转染IMCD细胞相似[（0.040±0.006） pH U/min],且能被1 μmol/L巴弗洛霉素（H+-ATPase特异性抑制剂）所抑制。 结论 遗传性dRTA囊泡型H+-ATPase B1 亚基点突变影响GFP-B1融合蛋白与其他亚基正常结合组装形成完整的H+-ATPase,并抑制H+-ATPase 的泌酸功能。     

半胱氨酸天冬氨酸3依赖的bcl-2的降解在ATP耗竭诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 研究ATP耗竭再恢复诱导的肾小管上皮细胞凋亡中,半胱氨酸天冬氨酸（caspase）3激活介导bcl-2降解的作用.方法 使用代谢抑制剂短暂阻断细胞内ATP的生成,诱导细胞凋亡.以Hoechst 33342染色观察凋亡细胞.应用编码人bcl-2 RNA的腺病毒感染细胞,使bcl-2在细胞内高表达.应用流式细胞仪,分析细胞凋亡和坏死的发生情况.以Western印迹检测caspase 3的活化以及bcl-2和bcl-2的降解产物.体外实验观察caspase 3和caspase 3特异性抑制剂DEVD对bcl-2降解产物的影响.结果 高表达bcl-2组与对照组比较,细胞ATP耗竭60min、90 min、120 min和再恢复60min后,可减少细胞凋亡50%,P＜0.05.肾小管上皮细胞ATP耗竭时,caspase 3被激活,bcl-2出现降解;细胞内ATP恢复时,bcl-2降解产物继续增多,并出现细胞凋亡.体外应用caspase 3可使bcl-2降解,而caspase3的特异性抑制剂DEVD能明显抑制caspase 3对bcl-2的降解.结论 肾小管上皮细胞ATP耗竭再恢复时,caspase 3激活及其介导的bcl-2降解在细胞凋亡中发挥重要作用.     

透析前注射单剂量低分子量肝素对透析器复用效率的评价

目的：评价血液透 析前注射单剂量低 分子量肝素（ Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ）与持续 输注普通肝素（ Ｓ Ｈ）对复用透析器 效率的影响。方法：对 ３０ 例慢性透 析患者进行随机交叉对照研究,观察第一、四次透析的透析器纤维包裹容量 （ Ｆ Ｂ Ｖ）、透析前血球压积 （ Ｈ Ｃ Ｔ）及透析 ２ ｈ 尿素氮、肌酐 清除率,另外,利用生色底物法测定透析 ０ ｈ、２ ｈ、４ｈ 血浆肝素抗 Ｆｘａ 水平。结果：同 Ｓ Ｈ 组比, Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 组透析器复用次数明显增加（ Ｐ＜ ０．０５）,第四次复用透析器 Ｆ Ｂ Ｖ 及透析 ２ ｈ 尿素氮、肌酐清除 率无明显 下降（ Ｐ＜ ０．０５）, Ｓ Ｈ 组则明显 下降（ Ｐ＜ ０．０５）,透析 ２ ｈ 两组血浆肝素活性抗 Ｆｘａ 水平无明显差异（ Ｐ＜ ０．０５）,透析 ４ ｈ Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 组明显高于 Ｓ Ｈ 组（ Ｐ＜ ０．０５）。结论：透析前 单剂量注射 Ｌ Ｍ Ｗ Ｈ 能保护复用透析器清 除率,值得临床上进一步推广。     

Smac/Diablo与X-连锁凋亡抑制蛋白在ATP耗竭再恢复诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 研究线粒体蛋白Smac/Diablo和细胞X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在ATP耗竭及再恢复导致肾小管上皮细胞凋亡中的作用和机制。 方法 应用代谢抑制剂暂时性阻断人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内ATP的生成,再换用含糖的培养液使细胞内ATP再恢复,诱导肾小管上皮细胞凋亡。应用Hoechst33342检测肾小管上皮细胞凋亡的发生。用间接免疫荧光检测Smac/Diablo在细胞内的分布。分别提取胞质蛋白和细胞总蛋白,以Western印迹检测胞质中Smac/Diablo、XIAP和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体(pro-caspase-3)的蛋白水平。 结果 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Hoechst33342染色可见HK-2细胞核固缩和凋亡小体的形成;间接免疫荧光可见Smac/Diablo由线粒体释放至胞质;Western印迹可见胞质内Smac/Diablo的含量增多( P < 0.01);XIAP和pro-caspase 3的蛋白水平降低(P < 0.05)。 结论 肾小管上皮细胞内ATP耗竭及再恢复时,Smac/Diablo释放至胞质,XIAP蛋白水平降低,进而激活caspase 3,介导肾小管上皮细胞凋亡。     

血液透析患者使用鱼精蛋白致过敏性休克

鱼精蛋白是一种多肽氨基酸 ,能与肝素结合 ,抑制其激活抗凝血酶Ⅲ活性的作用 ,常用于使用肝素抗凝的血液透析患者 ,尤其是伴有出血倾向或血液透析后即进行外科手术的患者。在心脏手术体外循环后 ,注射鱼精蛋白可导致动脉压下降 ,心排出量减少 ,肺动脉压和中心静脉压增高 ,肺循环阻力增高等反应 ,严重者引起过敏性休克、甚至心跳骤停〔1～ 3〕。在血液透析患者 ,我院共收治 6例使用鱼精蛋白引起过敏性休克患者 ,现报告如下。临床资料1　一般资料　 6例患者中男 4例 ,女 2例 ;年龄 2 1岁～ 6 2岁。其中维持性血液透析 5例 ,急性肾衰竭临时血液…     

肾移植受者巨细胞病毒感染及免疫抑制剂对其的影响

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒(CMV)感染率及免疫抑制剂对其的影响.方法214例肾移植受者术后给予甲泼尼龙(MP)、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)静脉滴注作为免疫诱导治疗.基础免疫抑制剂治疗为环孢素A+泼尼松+硫唑嘌呤.急性排斥反应时给予MP冲击治疗,无效时给予ALG或OKT3治疗.采用免疫细胞化学LSAB法测定外周血白细胞CMV-PP65抗原.结果CMV感染率为61.7%(126/214),初次检出CMV-PP65抗原的时间为术后(25.4±14.7)*!d,平均抗原阳性细胞数为每50000白细胞(9.2±7.9)个.CMV感染的肾移植受者在感染前急性排斥反应率为42.3%(52/126),明显高于无CMV感染受者的20.5%(P<0.01);使用ALG或OKT3治疗例数分别为23、15例,也高于无CMV感染的受者(P<0.05).CMV感染和无CMV感染的肾移植受者ALG免疫诱导治疗疗程分别为(4.7±1.32)*!d、(4.4±0.92)*!d,使用剂量分别为(14.1±1.32)支、(13.2±0.92)支,差异无显著性(P>0.05).结论肾移植术后CMV感染率高;术后短期的ALG免疫诱导治疗可能不增加CMV感染发生率;急性排斥反应发生后免疫抑制剂尤其是ALG或OKT3的使用与术后CMV感染密切相关.