RNA干扰技术建立稳定低表达B7-H1的胰腺癌Patu8988细胞株

B7同源性1(B7 Homolog 1,B7-H1)分子,亦称为"程序性死亡因子-1配体"(programmed death ligand-1,PD-L1)是T细胞共刺激分子B-7家族成员,肿瘤细胞高表达B7-H1可在多个方面参与肿瘤的免疫逃避过程[1],研究表明胰腺癌中B7-H1的表达水平与预后呈显著负相关[2]。因此,B7-H1有望成为胰腺癌治疗的新靶点,我们设计了靶向B7-H1基     

胰腺良性肿瘤23例临床治疗分析

目的 探讨胰腺良性肿瘤的诊断与治疗,手术方式的选择,术后并发症的防治.方法 回顾性分析我院2004年1月至2009年12月收治的23例胰腺良性肿瘤患者的临床资料.患者均接受外科手术治疗.5例行肿瘤摘除术,8例行胰体尾脾脏切除术,1例行胰腺中段切除术,5例行胰十二指肠切除术,4例行胰腺囊肿空肠R-Y吻合内引流术.18例患者手术后应用了生长抑素.结果 本组术后病理诊断:胰腺囊肿8例,胰岛细胞瘤4例,黏液性囊腺瘤6例,浆液性囊腺瘤3例,实质性假乳头状瘤2例.10例发生胰瘘的患者有7例出现继发的腹腔感染.死亡1例,死于胰十二指肠切除术后多脏器功能衰竭.结论 胰腺良性肿瘤无特异性症状和血清学实验室检查,CT及内窥镜下逆行性胰胆管造影术(ERCP)对临床诊断治疗有很大帮助.手术方式的选择取决于肿瘤生长部位及术中对肿瘤良恶性的判断,可行胰十二指肠切除术、胰腺中段切除术、保留或不保留脾脏的胰体尾切除术及肿瘤摘除术.胰瘘是手术后主要的并发症.可靠结扎主胰管、妥善处理胰腺创面、胰液外引流可以降低胰瘘发生率.     

STAT3shRNA增强胰腺癌细胞Panc-1对吉西他滨化疗敏感性

目的 观察shRNA下调胰腺癌Panc-1细胞STAT3 mRNA表达后对吉西他滨化疗敏感性的影响.方法 构建靶向STAT3 mRNA的shRAN和阴性质粒,分别转染Panc-1细胞(A组和B组);另将非转染的正常Panc-1细胞分为C组和D组.A,B,C三组细胞与吉西他滨共孵育.RT-PCR和Western blot检测Panc-1中STAT3 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测Panc-1细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 A组STAT3 mRNA水平下降了61.9%,STAT3蛋白水平下降了85.7%(P＜0.01),细胞增殖能力低于B、C组(P＜0.01).与B、C组比较,A组G1期细胞比率增加(P＜0.05),细胞存活率降低(P＜0.01).结论 靶向STAT3 mRAN的shRNA可特异性降低Panc-1细胞中STAT3 mRNA及其蛋白的表达,抑制Panc-1细胞增殖,使其阻滞于G1期,从而增强吉西他滨对G1期细胞的细胞毒效应,增加吉西他滨的化疗敏感性.     

FJX1基因在实体肿瘤中的功能研究进展

果蝇高尔基体固有跨膜激酶four jointed（Fj）基因编码一种细胞表面分泌蛋白，对果蝇的腿、翅膀的生长和分化以及眼睛的正常发育很重要。四连接同源基因（four jointed box kinase 1, FJX1）于1999年在脊椎动物体内经鉴定与Fj高度同源，其位于11号染色体（11p13），可以编码含有437个氨基酸的表面分泌蛋白。目前，FJX1基因可能作为原癌基因，通过不同途径影响多种实体瘤的发生发展。本文针对FJX1与实体肿瘤相关功能研究进展进行综述。     

2型重组腺相关病毒/增强型绿色荧光蛋白转染胰腺癌细胞PANC-1的体外研究

基因治疗的关键是目的基因的高效转染和表达。我们采用2型重组腺相关病毒（rAAV2／EGFP）对人胰腺癌细胞PANC-1进行体外基因转移，观察EGFP基因能否在PANC-1中有效表达及其细胞毒性，探讨rAAV2介导目的基因转导胰腺癌细胞的效率。[第一段]     

重组腺病毒mIκBα基因联合γ射线治疗肝细胞癌的实验观察

目的 探讨重组腺病毒mIkBα基因（AdmIkBα）联合γ射线对人高转移性肝细胞癌HCC9204细胞和裸鼠HCC9204移植瘤生长的影响。方法利用有限稀释法测定病毒滴度，以不同感染复数（MOI）的AdIxBαm（10、20、30、50）转染HCC9204细胞，Westemblotting法检测转染前后细胞1：）65表达和mIxBa表达。采用4Gyγ射线对各组细胞进行治疗。MTT法检测转染组、转染组＋放射组、对照组细胞生长抑制率。建立裸鼠HCC9204肝癌动物模型，肿瘤局部注射AdmIkBα30MOI并联合6Gyy射线治疗，在不同时间测量肿瘤体积。结果病毒滴度1．252×10^9pfu／ml。mIkBa蛋白随AdmlteBa剂量增加而进行性增加，P65蛋白随AdmIkBα剂量的增加呈进行性递减。转染组体外细胞生长随AdmIkBα剂量的增加逐渐受抑制，经7射线照射后生长抑制更加明显。AdmIkBα转染和放射联合治疗后7～28d，裸鼠肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯转染治疗组。结论AdmIkBα转染联合Y射线治疗可增强对肝痛细胞杀灭作用．联合治疗明品优于单纯放疗组和单纯基因治疗组。     

胰腺癌组织中EPAS1、血管内皮生长因子的表达及其相关性

目的 研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子2α(EPAS1/HIF-2α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化SP法检测60例胰腺癌及其相应正常胰腺组织中EPAS1、VEGF mRNA和蛋白的表达及分布,分析其间的相关性以及与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 EPAS1 mRNA在胰腺癌组织中表达与正常胰腺组织中表达差异无统计学意义(P》0.05),EPAS1蛋白、VEGFmRNA和VEGF蛋白在胰腺癌组织中表达均明显高于正常胰腺组织(P均《0.01).EPAS1与VEGF的表达呈显著正相关(P《0.01).EPAS1、VEGF的表达与胰腺癌临床分期、瘤体大小有关.结论 胰腺癌组织中EPAS1和VEGF呈过量表达,EPAS1与VEGF显著相关,EPAS1通过上调VEGF表达促进胰腺癌新生血管形成,促进胰腺癌的发生、发展.     

NF-κBp65、Bcl-2、Bcl-xL蛋白在胰腺癌中的表达及其与P53和凋亡指数的关系

背景与目的:核因子κB通过调控下游bcl-2家族基因表达参入细胞凋亡调节过程,而p53除了参入细胞周期调节外也参入依赖bcl-2基因的细胞凋亡调控。在胰腺癌中NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达与p53和凋亡的关系还不清楚。本研究系统地分析了核因子κBp65及其下游的bcl-2和bcl-xL抑凋亡基因在胰腺癌(PC)中的表达以及与P53蛋白表达和凋亡指数(AI)的关系。方法:免疫组化法检测25例胰腺导管腺癌(PC)和9例正常胰腺组织(NP)中P53蛋白表达;Western印迹法分析NF-κBp65蛋白表达;RT-PCR分析Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达,TdT酶介导的原位缺口标记(TUNNEL)法了解胰腺癌细胞凋亡情况(AI)。结果:P53在PC组织阳性率(56%,14/25),高于NP组织阳性率(P<0.00);NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL在PC组织表达相对值分别为:1.06±0.16、0.79±0.13、0.76±0.24,分别高于NP组织:0.23±0.016、0.23±0.074、0.18±0.026(分别P<0.05);14例p53阳性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-Xl表达相对值分别为:1.32±0.23、0.92±0.33、0.82±0.21;11例p53阴性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL表达相对值分别为:0.78±0.15、0.54±0.19、0.71±0.28(分别P<0.05,P<0.05,P>0.05);NF-κBp65和Bcl-2分别与P53表达有明显的正相关性(分别P<0.01,P<0.05),Bcl-xL与P53无相关性(P>0.05),NF-κBp65与Bcl-XL表达正相关(P<0.01),而NF-κBp65与Bcl-2表达无相关性(P>0.05);胰腺癌平均AI为(15.4±6.48)%,NF-κBp65表达与AI负相关(r=-0.297,P<0.05),而Bcl-2、Bcl-xL与AI无相关性(r=-0.203,P>0.05;r=-0.156,P>0.05)。结论:胰腺癌中抗凋亡因子表达上调,凋亡指数主要决定于NF-κBp65蛋白水平;NF-κBp65通过对下游bcl-xL基因表达的调控参与胰腺癌凋亡过程;p53在凋亡调节过程中起重要作用。     

缺氧诱导因子2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子2(HIF-2α)的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)的关系,分析胰腺癌中HIF-2α表达促进肿瘤血管生成的作用及与临床病理特征之间的关系.方法 应用免疫组化SP法检测60例胰腺癌及相应正常胰腺组织中HIF-2α、VEGF蛋白的表达和分布,计数MVD,分析其间的相关性及其与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果 HIF-2α和VEGF在胰腺癌组织中的表达均明显高于正常胰腺组织,胰腺癌组织中MVD值明显高于正常胰腺组织,差异均有统计学意义(P<0.05).HIF-2α的表达与VEGF的表达及MVD值成正相关(P<0.05),HIF-2α与VEGF的表达与胰腺癌TNM分期、肿瘤大小有关.结论 胰腺癌组织中HIF-2α呈过量表达,并与VEGF及MVD显著相关;它可能通过上调VEGF表达促进胰腺癌血管生成,进而影响胰腺癌的发生、发展.     

靶向B7-H3基因RNA干扰慢病毒的构建及人胰腺癌PaTu8988稳定感染细胞株的建立

目的 构建靶向人B7同源性3(B7-H3)基因的小发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,并建立稳定感染的胰腺癌PaTu8988细胞株.方法 根据GenBank提供的B7-H3 cDNA序列,设计4条靶向B7-H3的siRNA序列,构建重组干扰质粒pGCSIL-GFP-B7-H3-shRNA.将重组干扰质粒和过表达B7-H3质粒共同转染293T细胞,经蛋白质印迹法筛选出干扰效果最佳的重组干扰质粒.该质粒经慢病毒包装,并感染胰腺癌PaTu8988细胞株,建立稳定低表达B7-H3细胞株.应用实时定量PCR及蛋白质印迹法检测细胞B7-H3基因的表达抑制率.结果 携带干扰效果最好的shRNA的慢病毒感染PaTu8988细胞,建立了稳定低表达B7-H3基因的PaTu8988细胞株,其B7-H3 mRNA表达的抑制率达96.8％,B7-H3蛋白表达的抑制率达88.1％.结论 成功构建了人B7-H3-RNAi的慢病毒载体,并建立了稳定感染的低表达B7-H3基因的PaTu8988细胞株.