B7-H1 与B7-H4 在膀胱癌大鼠及其癌旁组织中的差异表达

目的:研究膀胱原位癌组织及癌旁组织中共刺激分子 B7-H1与 B7-H4的表达情况,并分析二者的相关性。方法:采用 N-亚硝基 -N-甲基脲(MNU)溶液膀胱灌注法制备膀胱癌大鼠模型(30只),处死大鼠,获取癌组织及癌旁组织,进行病理检查;采用生理盐水溶液膀胱灌注法作为对照组( 12只),处死大鼠,获取膀胱组织,进行病理学检查;采用 RT-PCR技术分别检测对照组大鼠膀胱组织( A组)、膀胱癌模型组癌组织( B组)及模型组癌旁组织( C组)中 B7-H1与 B7-H4的 mRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性。结果: 30只膀胱癌模型组大鼠, 28只模型制备成功,造模成功率 93.3%。A组、C组 B7-H1、B7-H4 mRNA表达量均明显低于 B组(0.71±0.38、0.79±0.21 vs 1.44±0.67;0.84±0.22、     

B7-H1与移植免疫

B7-homolog1（B7-H1）是迄今发现的B7家族中较新的共刺激分子。它对T细胞具有双重效应,可以激活初始T细胞,抑制活化的效应T细胞。参与多种免疫过程的发生。在一些动物器官移植模型研究中,发现B7-H1在抑制免疫排斥,诱导免疫耐受,保护移植物中有重要的作用。以B7-H1为靶点的干预方法在未来可能成为器官移植后免疫抑制治疗的有效方法。本文就B7-H1在移植免疫中作用的研究进展做一综述。     

胸苷激酶1和B7-H4在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的 观察胸苷激酶1(TK1)和B7-H4在乳腺癌组织中的表达,探讨两者与乳腺癌临床病理特征的关系.方法 收集64例乳腺癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测以上组织石蜡切片中TK1和B7-H4的表达水平.结果 TK1在乳腺癌组织中表达率明显高于癌旁组织(84.38％比15.63％,P＜0.01),B7-H4在乳腺癌组织中表达率明显高于癌旁组织(75.00％比20.31％,P＜0.01);TK1表达水平与乳腺癌乳腺癌肿瘤大小、组织学分化程度、TNM分期和淋巴结转移明显相关(P＜0.05),B7-H4表达水平与乳腺癌组织学分化程度和TNM分期明显相关(P＜0.05).结论 乳腺癌组织中TK1和B7-H4呈高表达,提示两者在乳腺癌的发生发展中有重要意义.     

B7-H1和CA9在膀胱尿路上皮癌中表达的临床意义

目的 分析B7-H1和CA9在膀胱尿路上皮癌中的表达及二者之间的相互关系,探讨B7-H1和CA9在膀胱尿路上皮癌的发生、发展中的作用.方法 采用免疫组织化学方法检测43例膀胱尿路上皮癌及7例正常膀胱组织中B7-H1 和CA9 的表达,并评价它们与病理分级、临床分期、复发以及两者之间的关系.结果 43例膀胱尿路上皮癌组织B7-H1和 CA9阳性表达率分别为65.11%、67.44%.正常组织中不表达.两者的表达与病理分级、临床分期及复发相关(P<0.05).在膀胱尿路上皮癌组织中B7-H1的表达水平与CA9 的表达水平有关联(P<0.05).结论 B7-H1和CA9在膀胱尿路上皮癌的发生、发展过程中起着重要的作用,这为膀胱癌的早期诊断和治疗提供了新的途径.     

协同刺激分子B7-H3与B7-H4联合效应对胃癌患者预后的影响

目的 探讨胃癌组织中协同刺激分子B7-H3和B7-H4的表达水平对胃癌患者预后的影响及其与临床病理特征的关系.方法 采用回顾性研究随访调查157例胃癌患者的相关临床资料;应用免疫组织化学染色法检测相关病理指标及胃癌患者手术标本中B7-H3、B7-H4的表达;胃癌患者不同临床特征与B7-H3、B7-H4表达水平的相关性采用x2检验,不同临床特征患者的无进展生存期(PFS)及总生存期(OS)的比较采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验,拟合多因素Cox模型,用风险比(HR)及95％可信区间(CI)估计不同临床指标与复发和死亡结局的联系强度.结果 B7-H3、B7-H4表达水平与不同临床特征之间无明显相关;单因素生存分析显示年龄较大(＞60岁)、分期较晚、肿瘤较大(＞5 cm)、浸润较深(侵及深肌层)、远处转移及协同刺激分子B7-H4高表达等显著减少PFS及OS(P ＜0.05);多因素Cox模型分析提示,与Ⅰ期[5.58(95％ CI:1.27 ～24.58)]比较,Ⅳ期胃癌患者复发和死亡的HR分别为6.20(95％ CI:1.31 ～29.34);与肿瘤直径≤5 cm的患者[1.95(95％ CI:1.20 ～3.18)]比较,肿瘤直径＞5 cm的患者其为1.97(95％CI:1.19 ～3.25);相对于其他表达组,B7-H3低表达且B7-H4高表达的胃癌患者复发和死亡的HR分别为1.92(95％ CI:1.20 ～ 3.10),1.93(95％CI:1.19 ～3.10).结论 B7-H3、B7-H4不同表达水平对胃癌患者PFS和OS有显著影响.     

共刺激分子B7-H1在直肠癌与癌旁组织中的表达及临床意义

目的探讨共刺激分子B7-H1在直肠癌与癌旁组织中的表达及临床意义。方法运用免疫组织化学检测共刺激分子B7-H1在50例直肠癌与相应的癌旁组织中的表达,对两者之间的表达水平作相关性分析,并探讨癌组织及癌旁组织的表达与临床病理参数之间的关系。结果B7-H1在直肠癌和癌旁组织中表达的阳性率分别为66．0％（33／50）,20．0％（10／50）,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）,但两者之间的表达评分呈正相关（r=0．435,P=0．002）。在直肠癌组织中B7一H1的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小及分化程度之间差异无统计学意义（P〉0．05）,而与TNM分期、淋巴结是否转移以及术后生存时间有关（P〈0．05）;在癌旁组织中B7-H1的表达仅与术后生存时间有关（P〈0．05）,而与其他参数之间的相关性不明显（P〉0．05）。结论B7-H1在直肠癌和癌旁组织中的表达,可能与肿瘤的进展和侵袭相关,可以作为直肠癌患者预后的诊断标志。     

肾透明细胞癌组织中B7-H1的表达及其与预后的关系

目的探讨B7-H1在肾透明细胞癌组织中的表达及其与预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测132例肾透明细胞癌患者术后肿瘤标本中B7-H1的表达,单因素及多因素分析B7-H1的表达与预后的关系。结果 132例患者中,B7-H1阳性46例（34.85%）,其中无瘤生存26例,复发6例,死亡14例,至最后随访期限,疾病无进展生存期（PFS）为（32.29&#177;12.56）个月,总生存期（OS）为（27.08&#177;15.43）个月;阴性86例（65.15%）,其中无瘤生存79例,复发3例,死亡4例,PFS为（38.77&#177;20.00）个月,OS为（37.02&#177;20.00）个月,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。单因素分析表明,B7-H1阳性表达与肿瘤大小、原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移、临床分期、组织学分级呈显著正相关（均P〈0.05）,而与患者年龄、性别无相关性。多因素分析表明,在控制肿瘤大小、TNM分期、临床分期、组织学分级的影响后,B7-H1阳性表达具有更高的肿瘤特异性死亡率[危险因素（RR）3.918,95%可信区间（95%CI）1.305～11.765,P〈0.05]和复发率[RR4.486,95%CI1.404～14.333,P〈0.05]。结论 B7-H1阳性表达与肾透明细胞癌患者术后死亡率及复发率呈正相关,B7-H1是肾透明细胞癌的一个独立预后因素。     

共刺激分子B7-H3 mRNA和B7-H3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究B7家族的新成员B7-H3mRNA和B7-H3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用荧光实时定量逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测38例胃癌患者癌组织及其邻近正常组织B7-H3mRNA的表达；免疫组织化学Elivision法检测B7．H3蛋白在胃癌组织中的表达。结果B7-H3mRNA在胃癌组织及其邻近正常组织中均有表达，其在胃癌组织中的表达明显低于邻近正常组织。B7-H3mRNA的表达与胃癌患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级和浸润深度无关（P〉0.05）。B7-H3蛋白在胃癌组织中表达的阳性率为39、5％，其与患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移和浸润深度也无关（P〉0.05）。B7-H3蛋白表达随肿瘤临床分期的递增而降低，各组间差异有统计学意义（P=0.022）；病理分级各组间差异也有统计学意义（P=0.039）。Kaplan—Meier生存分析显示，B7-H3阳性表达组无病生存期明显优于B7-H3阴性表达组（P=0.009），B7-H3阳性表达组总生存期亦明显优于B7-H3阴性表达组（P=0.010）。结论B7-H3表达与胃癌预后有关，可以作为反映患者免疫状态和预后的一个新的指标．为制定临床治疗方案提供依据。     

B7-H4在膀胱尿路上皮癌组织和血清中的表达及临床意义

目的了解膀胱尿路上皮癌组织及患者血清中B7-H4的表达情况及其临床意义。方法应用免疫组化方法检测49例膀胱尿路上皮癌患者组织中B7-H4的表达,ELISA检测45例患者外周血可溶性B7-H4(sB7-H4)的含量,分析癌组织和血清中B7-H4的表达水平及与患者临床病理指标的相关性。结果膀胱尿路上皮癌组织中B7-H4阳性表达率为49.0%(24/49),而正常膀胱组织中无B7-H4表达(P<0.05),其表达水平与患者的肿瘤TNM分期和组织学分级密切相关(P<0.05);膀胱尿路上皮癌患者血清中sB7-H4的浓度较正常人显著增高(P<0.05),高级别患者表达量显著高于低级别患者(P<0.05)。结论 B7-H4在膀胱尿路上皮癌中表达上调,在膀胱尿路上皮癌的发生、发展及免疫逃逸中发挥着重要作用,封闭肿瘤组织中的B7-H4有可能干预膀胱尿路上皮癌的复发与进展。     

肾透明细胞癌组织中B7-H3的表达及意义

目的 评价B7-H3在肾透明细胞癌组织中的表达及其与预后的关系.方法 采用免疫组化方法 检测154例肾透明细胞癌患者肿瘤标本中B7-H3的表达,分析其与患者临床病理因素以及术后生存时间之间的关系.结果 154例患者中,B7-H3阳性28例(18.18%),其中无瘤生存6例,复发7例,死亡15例,至最后随访日期,总生存期(OS)为(19.71±20.32)个月;B7-H3阴性126例(81.82%),其中无瘤生存119例,复发3例,死亡4例,OS为(33.47±18.32)个月,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).单因素分析表明,B7-H3阳性表达患者在肿瘤大小、原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移、临床分期等方面较阴性表达患者有明显差异,B7-H3阳性表达患者术后生存时间较阴性表达患者明显缩短.结论 B7-H3的表达可能与肾透明细胞癌的转移和进展有关,可以作为肾透明细胞癌的一个独立预后因素.     

阻断B7-H1通路增强膀胱癌患者外周血树突状细胞免疫功能的实验研究

目的:探讨膀胱癌患者外周血与正常人外周血树突状细胞(DCs)免疫功能的差异以及B7-H1阻断对膀胱癌患者外周血DCs免疫功能的影响。方法:采集膀胱癌患者及正常人的外周血,用rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α自外周血单个核细胞(PBMC)诱导分离DCs,混合淋巴细胞反应检测DCs刺激淋巴细胞增殖的能力。然后于膀胱癌DCs组加入B7-H1的阻断型抗体,混合淋巴细胞反应检测B7-H1阻断后DCs刺激淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测阻断后DCs分泌IL-10和IL-12的水平。结果:膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴细胞增殖的能力低于正常人外周血DCs,而加入B7-H1阻断型抗体阻断B7-H1后,膀胱癌患者外周血DCs刺激淋巴细胞增殖的能力得到明显提高,同时其分泌IL-10水平明显降低,而分泌IL-12水平明显增加。结论:膀胱癌患者外周血DCs存在免疫功能缺陷,其机制可能与DCs表面B7-H1的诱导高表达有关,而B7-H1阻断能够增强膀胱癌患者外周血DCs的免疫功能。     

B7-H3在肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的 本研究旨在探讨B7-H3在肾透明细胞癌发生发展中的作用,为临床诊断、治疗肾癌提供新的靶标.方法 应用免疫组织化学染色检测69例肾透明细胞癌患者手术标本中肾癌组织、瘤旁组织及远离肿瘤组织中B7-H3的表达并对其表达情况与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分期、淋巴结转移等进行相关分析.结果 B7-H3在肾透明细胞癌组织中弥漫性表达,定位在癌细胞胞膜以及血管内皮细胞胞浆中.①B7-H3在肾透明细胞癌组织血管内皮细胞、肾癌细胞、瘤旁肾组织以及远离肿瘤正常组织中阳性表达率分别为79.7%、75.4%、13.0%及0%;②B7-H3癌组织中的表达强度与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移无关;但表达强度高者病理分期较高(P<0.01).结论 B7-H3在肾透明细胞癌癌组织中确有高表达,而在瘤旁肾组织表达较低,远离肿瘤的正常肾组织无表达,并且其表达率与表达强度与肿瘤的病理分期密切相关,这表明B7-H3与肾透明细胞癌的发生发展有着重要的关系,有望成为进行肾癌免疫治疗和抗血管治疗的"共靶点".     

共刺激分子B7-H1和FasL在膀胱移行细胞癌免疫逃逸中的机制研究及临床意义

目的：探讨共刺激分子B7-H1和FasL在膀胱移行细胞癌免疫逃逸机制中的作用及其临床意义。方法：应用免疫组织化学方法检测50例膀胱移行细胞癌及10例正常膀胱组织中B7-H1和FasL的表达．并用计算机图象分析系统对其表达水平进行定量分析。结果：正常膀胱组织中B7-H1和FasL。均不表达;50例膀胱移行细胞癌中．B7-H1和FasL的阳性表达率分别为72％和70％。B7-H1的表达水平与膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期及复发密切相关（P〈0．05）：FasL的表达水平与膀胱移行细胞癌的病理分级、I晦床分期密切相关（P〈0．05）．但与复发无关。B7H1的表达水平与FasL的表达水平呈正相关（r=0．798,P=0．000）。结论：B7-H1和FasL与膀胱移行细胞癌的发生发展密切相关．在膀胱移行细胞癌免疫逃逸中发挥了重要作用。联合检测B7-H1和FasL可以作为了解膀胱移行细胞癌乍物学行为的参考指标,干预B7-H1及FasL信号将有望成为膀胱移行细胞癌免疫治疗的新策略。     

质粒介导LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株PANC-1的构建及鉴定

目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0-AE过表达LAPTM4B基因,应用RT-PCR,Western-blot进行鉴定。结果成功扩增提取pcDNA3.0-AE质粒,转染并筛选稳定细胞株。RT-PCR及Western-Blot显示相对空白对照,稳定株的过表达LAPTM4B-35明显。结论成功构建筛选低表达细胞株,并建立稳定过表达LAPTM4B的胰腺癌细胞株。     

慢病毒介导的Survivin基因稳定干扰PC-3细胞系的建立

目的：构建生存素（Survivin）基因稳定干扰的PC-3细胞系。方法：设计针对Survivin基因的shR—NA序列，构建Survivin shRNA慢病毒载体并感染PC-3细胞，采用RT-PCR和流式细胞技术分别检测Survivin mRNA和蛋白表达水平，并与阴性对照组和空白对照PC-3细胞进行比较。结果：Survivin shRNA慢病毒载体感染PC-3细胞后，Survivin mRNA和蛋白水平分别为（5．89±0．12）％和（11．82±0．32）％，明显低于阴性对照组（55．17±0．87）％、（95．70±1．56）％和空白对照PC-3细胞（58．21±0．68）％、（95．90±1．78）％。结论：采用shR—NA慢病毒载体成功构建了Survivin基因稳定干扰的PC-3细胞系。     

CD1D基因与B7-1基因共转染胰腺癌细胞及其抗癌作用的实验研究

目的:观察共转染小鼠B7-1和CD1D 基因对小鼠胰腺癌细胞的免疫应答。方法:将表达B7-1和CD1D 基因的逆转录病毒载体导入包装细胞系,然后转染入胰腺癌细胞。用PCR和Western方法鉴定细胞表达;用B7-1和CD1D 阳性的细胞在体内诱导抗肿瘤免疫反应。结果:B7-1和CD1D 阳性的细胞在同基因小鼠体内能诱导抗肿瘤免疫反应并抑制肿瘤生长。结论:B7-1基因和CD1D 基因共转染肿瘤细胞,能抑制肿瘤生长,可能为肿瘤的基因治疗开辟一条新途径。     

人膀胱癌bcl-2-siRNA慢病毒载体的构建及稳定转染细胞株的建立

目的 构建表达人膀胱癌bcl-2基因的小分子RNA(siRNA)的慢病毒载体并建立稳定转染细胞株.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计3条针对bcl-2 siRNA序列,分别构建pSIH1-H1-copGFP重组质粒.筛选出最有效沉默靶基因的siRNA后,将携带目的 序列的慢病毒载体转染到293T细胞中,感染膀胱癌细胞株T24,建立稳定转染细胞株.结果 设计的针对bcl-2的序列中第3条的抑制效果最好,下调59.0%.以此目的 序列构建稳定转染细胞株,对bcl-2 mRNA抑制率达65.6%,对bcl-2蛋白的抑制率高达74.5%.结论 成功构建表达人膀胱癌bcl-2-siRNA的慢病毒载体,它能有效沉默bcl-2基因在膀胱癌细胞株T24中的表达并建立了稳定转染细胞株.

Abstract：

Objective To obtain small interfering RNA (siRNA) sequences that can stably block the expression of bcl-2 in the bladder cancer cells, construct the bcl-2-siRNA lentiviral vector and establish a stably transfected cell line. Methods According to genetic information, 3 siRNA targeting bcl-2 were designed. The corresponding pSIH1-H1-copGFP recombinant plasmids were constructed. After the most effective siRNA was achieved, the shuttle plasmid pSIH-bcl-2-siRNA with lentiviral packaging plasmid was mixed, and 293T cells were transfected. Virus solution was collected to infect T24 cells and a stably transfected cell line was established. Results The third siRNA sequence, located in bcl-2 1210-1228, showed the best gene silencing effect as 59. 0%. The lentiviral vector was constructed successfully and the inhibition ratio was 65. 6% for bcl-2 mRNA and 74. 5% for bcl-2 protein. Conclusion It is successful to obtain bcl-2-siRNA lentiviral vector that can stably block the expression of bcl-2 in the bladder cancer cell line T24 and establish a stably transfected cell line which provides foundation for further experimental studies on the function of bcl-2.     

PD-1/B7-H1介导小鼠同种异体移植后免疫耐受

<正>程序性死亡1(programme death 1,PD-1)受体和其配体B7-H1的生物学通路对免疫反应有重要的调节作用。PD-1受体主要表达于活化后的外周T细胞、B细胞及髓样细胞,分子结构类似于其他CD28/CTLA-4家族成员,目前认为其具有抑制T细胞反应等负性免疫调节作用;而B7-H1广泛表达于静息和活化状态的T     

RNA干扰下调NF-κB p65基因表达诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡

目的运用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术下调胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB p65基因表达,并评价其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法利用阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000将化学合成的人NF-κB p65的小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）转染入胰腺癌细胞株PANC-1中。采用RT-PCR法测定细胞内NF-κB p65mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变,运用Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测p65基因表达下调对PANC-1细胞凋亡的影响。结果化学合成的人NF-κB p65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB p65mRNA的表达（P〈0．01）,同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组（P〈0．05）。Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测发现下调p65基因表达能够诱导PANC-1细胞的凋亡。结论体外实验初步证明了NF-κB p65基因在胰腺癌细胞凋亡调控方面扮演重要角色．通过沉默其表达可诱导胰腺癌细胞的凋亡．     

微小RNA let-7c慢病毒载体的构建及过表达研究

目的 构建微小RNA let-7c重组慢病毒载体,验证转染该载体系统后对肝癌细胞增殖的影响 方法 构建表达含494bp let-7c基因的重组慢病毒载体,检测let-7c及对照组病毒滴度分别为5.01×10E8 TU/m1、5.15×10E8TU/ml;转染HepG2细胞,以荧光定量聚合酶链反应(PCR)对let-7e表达水平进行检测;细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价let-7c过表达后对HepG2细胞增殖的影响.结果 构建的let-7c慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;转染HepG2细胞72 h后,let-7c表达上调312倍;CCK-8法检测显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论 成功构建Iet-7c重组慢病毒载体并感染HepG2细胞后高效表达成熟let-7c,抑制了HepG2肝癌细胞的增殖.