不同亚型Smads信号蛋白在慢性支气管哮喘小鼠肺组织表达的意义

目的 观察慢性支气管哮喘小鼠肺组织内Smads不同亚型信号蛋白的表达,探索不同亚型Smads蛋白及其传导的信号通路在慢性支气管哮喘小鼠慢性气道炎症及气道重塑过程中的作用。 方法 建立急性哮喘及慢性哮喘小鼠动物模型,行肺组织病理切片,分别以免疫组织化学法和Western-blot法检测肺组织Smad 1,3,4,5,7的表达。 结果 慢性哮喘组小鼠的肺组织病理可见杯状细胞顶部空泡化明显,支气管黏膜下及肺实质血管旁多种炎症细胞浸润,支气管黏膜皱襞明显增多,上皮细胞增生紊乱。免疫组织化学法和Western-blot法检测结果显示,急性哮喘组小鼠的R-Smads(Smad 1,3,5)及Co-Smad(Smad 4)表达较正常对照组均明显升高(P<0.05),I-Smad(Smad 7)表达减少(P<0.05); 慢性哮喘组BMP/Smads信号通路Smads蛋白(Smad 1,5)表达较急性哮喘组降低(P<0.05),Smad 7较急性哮喘组明显升高(P<0.05),而TGF-β1/Smads信号通路Smads蛋白(Smad 3)及Co-Smad(Smad 4)表达则较急性哮喘组进一步升高(P<0.05)。 结论 转导不同上游信号分子的Smads蛋白所介导的信号通路在慢性支气管哮喘活化状态不同,TGF-β1/Smads信号通路在慢性支气管哮喘活化,BMP/Smads信号通路在急性哮喘中活化,但在慢性哮喘中活化降低。     

贝前列素钠片治疗慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者的临床疗效分析

目的 讨论口服贝前列素钠片治疗肺动脉高压的临床疗效.方法 选取该院2014年6月—2016年5月收治的慢性血栓栓塞性肺动脉高压患者,从中方便选出符合条件的患者42例,对肺动脉高压患者进行常规药物治疗的基础上,增加口服贝前列素钠片84 d,对患者进行治疗前后6 min步行试验距离、心功能分级、心脏彩超测定肺动脉收缩压、呼吸困难评分、血气动脉血氧分压、pro-BNP等评价分析,对患者血压、生化指标以及心率的变化进行评估分析.结果 经口服服贝前列素钠片84 d治疗后,患者进行治疗前后6 min步行距离明显增加;呼吸困难评分、患者心功能分级有着显著的提高,前后对比差异有统计学意义(P<0.05).心脏彩超测定肺动脉收缩压明显降低、血气动脉血氧分压明显增加至、pro-BNP显著下降.在口服贝前列素钠片进行治疗期间,只有2例患者出现头疼,患者心率、血压、肝肾功能在治疗前后差异无统计学意义(P>0.05).结论 口服贝前列素钠片84d后,对患者的活动耐量、临床症状有显著的改善,患者病情没有任何严重的不良反应,也没有病情恶化,临床证明贝前列素钠片对慢性血栓栓塞性肺动脉高压的治疗有显著效果.     

CD151基因治疗改善小型猪心肌梗死后心功能的研究

目的 研究重组腺相关病毒(rAAV)介导的CD151基因转染小型猪心肌梗死模型对心肌梗死后心功能的影响,以明确CD151体内促血管新生的作用.方法 实验用小型猪分为4组:(1)正常对照组4只;(2)rAAV-含绿色荧光蛋白序列(GFP)组6只;(3)rAAV-CD151组6只;rAAV-antiCD151组6只.结扎猪冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型.包装正义及反义CD151腺相关病毒,分点注射至梗死区及梗死周围心肌进行基因转染.基因转染8周行Westernblot测定心肌组织CD151蛋白表达,氮-13-氨水(13N-NH3)电子发射计算机断层显影(PET)评价心肌血流灌注,超声心动图检测心功能.结果 CD151基因转染促进心肌组织局部CD151高表达.与rAAV-GFP组比较,基因转染8周时rAAV-CD151组心肌缺损面积减小[(11.3±2.4)%与(21.1±2.6)%,t=-5.67,P<0.01],心功能各指标左心室射血分数[(65.7±4.6)%与(54.7±5.3)%,t=3.98,P<0.05]、左心室短轴缩短率[(36.0±2.9)%与(27.6±3.1)%,t=3.35,P<0.05]、左心室前侧壁的增厚率[(55.4±4.9)%与(36.8±7.8)%,t=3.34,P<0.05]和室间隔的增厚率[(35.2±6.0)%与(26.7±4.4)%,t=9.27,P<0.01]均增加,左心室前侧壁和室间隔的厚度亦增加(P<0.05).rAAV-antiCD151组各参数则低于rAAV-CD151组(均P<0.05).结论 rAAV-CD151能有效转染小型猪心肌,增加缺血心肌血流灌注,减小梗死面积,明显增加心肌收缩力并改善心功能.     

CD151激活PI3K/Akt/eNOS通路并促进小型猪缺血心肌血管生成

目的:磷脂酰肌醇-3(羟基)激酶(PI3K)信号转导途径在生长因子促血管生成过程中起重要作用.四跨膜蛋白分子CD151如何参与PI3K信号转导途径尚不清楚.文中探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导CD151转染心肌梗死小型猪模型对心肌血管生成的影响及机制. 方法:结扎左冠状动脉左前降支建立小型猪心肌梗死模型,构建并包装绿色荧光蛋白、CD151、antiCD151重组腺相关病毒,分别注射至缺血心肌组织;同时设置正常对照组.8周后用vWF相关抗原免疫组化染色并计数注射部位心肌微血管数目,Western blot检测CD151及相关信号通路分子蛋白表达. 结果:术后8周rAAV-CD151组心肌组织CD151蛋白表达明显高于正常对照组、rAAV-GFP组和rAAV-反义CD151组(P<0.05).rAAV-CD151组微血管密度[(30.20±2.35)个/视野]与正常对照组[(7.60±1.14)个/视野]、rAAV-GFP组[(14.40±1.34)个/视野]相比显著增加,rAAV-反义CD151组微血管密度[(7.20±1.30)个/视野]则明显低于其他手术组(P<0.05).CD151表达增高促进了PI3K、p-Akt、p-eNOS的激活,促进NO的生成. 结论:重组腺相关病毒携带CD151基因能有效转染心肌组织,明显增加微血管密度并激活PI3K /Akt/eNOS通路.     

小型猪急性心肌梗死模型的建立及其评价

目的 探索结扎小型猪冠状动脉左前降支(LAD)建立急性心肌梗死模型及进行血流评价的方法.方法 小型猪20头全麻下开胸暴露心脏,预阻断LAD(第二对角支) 15 min,后予结扎,术中心电图动态监测,术后进行冠状动脉造影,心肌酶学监测以确定模型建立情况,冠状动脉造影以及13N-NH3 PET心肌血流测定评价手术后血流改变.结果 20头小型猪中有16头存活4周,成活率80%,开胸手术中1头因麻醉意外死亡,3头死于术后呼吸不畅.结扎后心电图呈动态变化,24 h后血清心肌酶谱(CK,CK-MB,cTnI) 较术前明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),冠状动脉造影显示LAD血流中断,TIMI分级为0级,13N-NH3 PET检查显示手术后缺损面积百分比(27.0 ± 5.0)较手术前(4.0 ± 3.2)有显著性差异,证实心梗模型建立成功.结论 本实验中开胸手术成功率高,术后血流评价方法可用于手术前后冠脉血流和心肌血流的比较以及对心肌梗死后治疗效果进行评价.     

^13N—NH3 PET及冠状动脉造影评价CD151基因转染对小型猪心肌梗死后血流灌注的影响

目的用^13N—NH,PET及冠状动脉造影共同评价CD151基因转染促小型猪心肌梗死后血运重建。方法结扎20头小型猪冠状动脉左前降支（LAD）,建立心肌梗死模型。对梗死区及梗死周围心肌直接注射CD151及绿色荧光蛋白（GFP）重组腺相关病毒（rAAV）进行基因转染。8周后用免疫组织化学方法分析心肌组织CD151蛋白的表达和心肌组织微血管密度,用^13N—NH,PET显像评价心肌血流灌注,用LAD造影评价侧枝循环的建立。采用SPSS11．0软件行配对t检验或方差分析（ANOVA）。结果CD151基因转染促进局部心肌组织CD151高表达并增加缺血区心肌组织微血管密度。rAAV—CD151组心肌血流灌注明显增加,心肌缺血总分值为10．82±2．36,明显小于rAAV—GFP组（19．33±1．67,t=5．86,P=0．002）。冠状动脉造影显示rAAV—CD151组缺血心肌的侧枝循环建立明显较rAAV—GFP组增加。结论CD151基因转染可以明显促进心肌梗死后血运重建、增加血流灌注。^13N—NH,PET及冠状动脉造影能直观地评价心肌血运重建。     

重组腺相关病毒介导CD151基因治疗心肌梗死后侧支循环形成

目的 探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导的CD151基因转染对小型猪心肌梗死模型后侧支循环重建的影响.方法 中国实验用小型猪(清洁级,由华巾农业大学种猪场提供)26头,随机分为:(1)正常对照绀(n=4),健康小型猪,小进行任何手术处理;(2)rAAV-GFP组(n=7),结扎冠状动脉序前降支(left anterior descending,LAD)制备小型猪急性心肌梗死模型,心电监护显示I、aVL导联ST段持续抬高20 min为模型制备成功,同时,在左心室前壁梗死边缘区心肌分10点注射rAAV-GFP(1×10 11 pfu/点);(3)rAAV-CD151纽(n=7),结扎LAD,左窜前壁梗死边缘区心肌分10点注射rAAV-CD151;(4)rAAV-anti-CD151组(n=8),结扎LAD,左室前壁梗死边缘区心肌分10点注射rAAV-anti-CD151.8周后用Western Blot测定心肌组织CD151蛋白的表达,冠脉造影评价冠脉侧支循环形成情况.氯化二苯基四氮唑(TTC)染色显示心肌梗死面积.运用单因素方差分析进行统计学分析,以P＜0.05为差异具有统汁学意义.结果 与正常对照组和rAAV-GFP组比较,rAAV-CD151组心肌组织局部CD151蛋白表达增加(P＜0.05).冠状动脉造影证实CD151基因转染明显促进闭塞动脉的侧支循环建立.rAAV-CD151组心肌梗死面积百分比明显小丁rAAV-GFP组[(12.82±2.26)%vs.(23.14±2.83)%,P＜0.05],rAAV-anti-CD151纽心肌梗死面积百分比(32.52±3.47)%明显大于rAAV-GFP组和rAAV-CD151组(P＜0.05).结论 CD151基因转染可以明显促进小型猪急性心肌梗死后侧支循环的建立,减小心肌梗死面积.     

小型猪急性心肌梗死模型的建立及血流评价

目的 探索结扎小型猪冠状动脉左前降支（LAD）建立急性心肌梗死(MI)模型及进行血流评价的方法。方法 小型猪20头,全麻下开胸暴露心脏,预阻断冠状动脉左前降支(第2对角支) 15 min后予以结扎。术中进行心电图动态监测,术后进行冠状动脉造影及检测血清心肌酶谱以确定模型建立的情况。以冠状动脉造影评价MI溶栓治疗的血流分级（TIMI-FG）;13氮-氨正电子发射断层显像（13N-NH3 PET）测定心肌血流评价手术后血流的改变。结果 在小型猪20头中有16头存活4周,成活率80%。开胸手术中1头因麻醉意外死亡,3头死于术后呼吸不畅。结扎后,心电图呈动态变化,24 h后血清心肌酶谱(肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白I)的水平较术前明显增高(P<0.01)。冠状动脉造影显示,LAD血流中断证实MI模型建立成功。术后3 d,冠脉造影血流TIMI分级及13N-NH3 PET测定心肌血流量较术前有明显变化。结论 开胸手术成功率高,术后血流评价方法可用于手术前后冠脉血流和心肌血流的比较,以及对MI后治疗的效果进行评价。     

重组腺相关病毒介导CD151转染心肌梗死小型猪促进心肌功能性血管形成

目的 观察重组腺相关病毒(rAAV)介导的CD151基因转染促小型猪心肌梗死后心肌血管形成的有效性.方法 结扎小型猪冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,梗死区及梗死周围心肌分别注射rAAV-CD151、rAAV-anti-CD151和rAAV-绿色荧光蛋白(rAAV-GVP).8周后用Western blot分析心肌组织CD151蛋白表达,免疫组化检测心肌微血管密度和小动脉密度,用13N-NH3电子发射计算机断层心脏显影(PET)评价心肌血流灌注.结果 CD151基因转染促进心肌组织局部CD151高表达.rAAV-CD151组心肌微血管密度为(83.8±6.7)个/mm2,明显高于正常对照组的(33.2±4.5)个/mm2和rAAV-GFP组的(41.6±5.6)个/mm2,均P＜0.05;rAAV-CD151组小动脉密度为(16.4±2.5)个/mm2,也明显高于正常对照组的(6.6±2.3)个/mm2和rAAV-GFP组(8.4±1.6)个/mm2,均P＜0.05.rAAV-anti-CD151组心肌微血管密度和小动脉密度明显低于其他各组.13N-NH3 PET心肌血流灌注显像示rAAV-CD151组缺血区心肌血流灌注明显增加,rAAV-anti-CD151组血流灌注减少.结论 CD151基因转染能增加小型猪局部心肌组织的CD151表达,明显增加缺血心肌微血管和小动脉的生成,并显著增加心肌血流灌注.     

CD151基因治疗改善小型猪心肌梗死后心功能的研究

Objective To investigate the effect of CD151 gene therapy on improving myocardial function in swines with myocardial infarction. Methods CD151, antisense CD151 and green fluorescent protein (GFP) were constructed into the recombinant adeno-associated virus (rAAV). Swines were divided into 4 groups: rAAV-GFP group (6 swines), rAAV-CD151 group (6 swines), rAAV-antiCD151 group (6 swines) and control group (6 swines). The swines were performed with coronary artery ligation and intramuscularly injection with rAAV. Eight weeks after vector administration, western blot was used to detect gene expression of CD151. 13N-labeled NH3 positron emission tomography (PET) was used to evaluate myocardial perfusion. Echocardiography was used to assess myocardial function. Results Compared with the control group and the rAAV-GFP group, the rAAV-CD151 group showed higher CD151 protein expression. Compared with the rAAV-GFP group, the defect size of myocardium was decreased[( 11.3±2.4)% vs. (21.1±2.6)%, t= -5.67,P<0.01] and left ventricular ejection fraction (EF), left ventricular fractional shortening (FS), the ratio of anterior lateral wall thickening (△ALWT) and ratio of interventricular septum thickening (△IVST) were significantly improved in rAAV-CD151 group 8 weeks after vector administration [(65.7±4.6)% vs. (54.7±5.3)%, (36.0±2.9)% vs. (27.6±3.1)%,(55.4± 4.9)% vs. (36.8±7.8)%, (35.2±6.0)% vs. (26.7±4.4)%, t=3.98, 3.35, 3.34, 9.27, all P< 0.05]. The level of diastolic ALWT and diastolic IVST was also increased in rAAV CD151 group compared with rAAV-GFP group ( P<0.05).Compared with rAAV-CD151 group, parameters of myocardial function in rAAV-antisense CD151 group were not improved (P<0.05). Conclusions rAAV-CD151 can effectively transfeet the myocardium, increase the expression ofCD151 protein, promote the blood perfusion of myocardium and improve the ventricular function after myocardial infarction.