人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

目的:构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻?重链表达载体,在293Free style 细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性?方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体pFUSE-CHIg-hG1和pFUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style 细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化?应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)?Western blot?免疫共沉淀?质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响?结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%?结论:重组全人源抗TLR4 IgG保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值?     

HEV保护性基因工程抗体的制备及功能研究

目的：制备抗戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法：将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化,设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列,将其克隆入真核表达载体;表达载体共转染293F细胞进行表达优化,高效制备基因工程化抗体;通过酶联免疫反应（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、免疫荧光及HEV细胞感染模型,研究工程化抗体的结合能力及中和活性。结果：成功构建基因工程化人鼠嵌合HEV保护性抗体表达载体,在293F表达系统中实现高效表达。抗体表达产率达30 mg/L,亲和力为1.202×10-8 mol/L。免疫荧光检测结果显示抗体能够灵敏、特异地与已感染HEV的 Kernow细胞结合,实时荧光定量PCR检测结果显示抗体可保护易感的C3A细胞不被HEV感染。结论：基因工程化抗体抗体具有高效的HEV结合能力及中和作用,能有效阻断HEV感染,并实现低成本高效表达。     

彩色多普勒超声对颈动脉粥样斑块与脑梗死的诊断价值

目的：探讨彩色多普勒超声对颈动脉粥样斑块与脑梗死的诊断价值。方法选择2011年10月～2013年10月长沙市第一医院收治的70例脑梗死患者和70例健康体检者,分别作为观察组和对照组。应用彩色多普勒超声仪对2组颈动脉内中膜厚度（IMT）、斑块类型、斑块形态,进行检测和比较。结果与对照组相比,观察组颈动脉粥样硬化斑块形成率显著升高（77.1% vs 24.3%）,并且斑块类型多为不稳定的软斑;与对照组相比,观察组颈动脉IMT明显增大（1.3±0.3） vs （0.7±0.2）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论颈动脉粥样斑块与脑梗死密切相关,颈动脉彩色多普勒超声检查能够明确脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块特征,具有较高的临床诊断价值。     

右颈内静脉穿刺置管及临床应用

右颈内静脉穿刺置管具有成功率高、并发症少和操作方便等优点。临床上用于血流动力学监测、快速直接心内输血输液抢救严重低血容量休克和心内起搏治疗严重心律失常均取得十分满意的效果。我院1984～1987年应用此项技术置入各类导管135例,临床上应用满意且安全,现报道如下。1 临床资料1.1 一般资料 男69例,女66例,年龄2～79岁。采用颈中中路法35例,成功31例,占88.57％,发     

全人源双特异性c⁃Met/PD⁃L1 scFv⁃Fc融合蛋白的优化、制备及生物学特性鉴定

目的：通过优化设计、构建c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,探究重轻链不同组合形式对c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与肿瘤抗原结合的亲和性和特异性的影响。方法：使用生物信息学分析、基因工程抗体技术设计、优化及制备重轻链不同组合的双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白CP1、CP2、PC1、PC2;生物分子相互作用分析仪BLItz分析融合蛋白对重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力,ELISA法分析其抗原结合特异性。结果：成功制备双特异性c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白,融合蛋白CP1与重组c?Met蛋白和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合特异性均优于CP2、PC1和PC2。结论：重轻链不同组合形式会影响c?Met/PD?L1 scFv?Fc融合蛋白与c?Met和PD?L1蛋白的亲和力和抗原结合的特异性,融合蛋白CP1的亲和力和抗原结合的特异性最高,其对应的重轻链组合形式可用于c?Met/PD?L1 CAR表达载体的构建。     

低血糖负荷饮食联合运动对代谢综合征患者的干预效果研究

目的探讨低血糖负荷饮食联合运动对代谢综合征患者的干预效果。方法选取84例代谢综合征患者,随机分为观察组和对照组各42例,对照组采用常规药物治疗,观察组在常规药物治疗的基础上,采取低血糖负荷饮食联合运动的方式进行6个月的干预。采用化学发光法检测6个月前后患者的血清SHBG水平,同时评估6个月前后两组患者的身体质量指数和腹围,对两组患者的空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)指数以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和总胆固醇(TC)达标情况进行比较分析。结果观察组干预前身体质量指数和平均腹围为(33.5±3.8)kg/m~2和(105.4±4.1)cm,对照组干预前身体质量指数和平均腹围为(34.8±4.3)kg/m~2和(106.1±3.8)cm;6个月后,观察组身体质量指数和平均腹围为(27.6±2.4)kg/m~2和(95.2±4.3)cm,对照组身体质量指数和平均腹围为(31.2±4.6)kg/m~2和(102.8±3.2)cm;两组患者数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组和对照组干预前血清SHBG水平分别为(11.5±6.7)nmol/L和(10.5±7.2)nmol/L,6个月后,观察组血清SHBG水平改变为(25.34±17.58)nmol/L,对照组血清SHBG水平改变为(14.9±13.7)nmol/L,两组患者干预前后血清SHBG水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组干预前的空腹血糖、甘油三酯指数分别为(6.26±0.58)mmol/L、(2.55±0.76)mmol/L,对照组干预前的空腹血糖、甘油三酯指数分别为(6.12±0.72)mmol/L、(2.58±0.83)mmol/L;观察组干预后的空腹血糖、甘油三酯指数分别为(4.36±0.57)mmol/L、(1.54±0.24)mmol/L,对照组的空腹血糖、甘油三酯指数分别为(5.42±0.48)mmol/L、(2.08±0.62)mmol/L,两组患者数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组干预前HDL-C达标4例(9.52%)、TC达标5例(11.90%),对照组干预前HDL-C达标5例(11.90%)、TC达标6例(14.29%);观察组干预后后HDL-C达标23例(54.76%)、TC达标20例(47.62%),对照组干预后HDL-C达标9例(21.43%)、TC达标11例(26.19%);两组患者数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低血糖负荷饮食联合运动能够显著提升代谢综合征患者身体质量水平,提高SHBG水平,有效促进代谢综合征患者代谢状态的改善。     

揿针合西医常规疗法治疗妊娠合并高脂血症型急性胰腺炎验案1则

正妇女妊娠期间,有诸多用药和治疗的限制。笔者临床收治1例妊娠合并高脂血症型急性胰腺炎患者,在西医对症治疗基础上采用新型揿针进行配合治疗,其镇痛效果较为明显,且无毒副作用。现将验案介绍如下。彭某,女,32岁,于2017年9月7日夜间因"中上腹疼痛、向后腰放射7d"入院。患者进食晚餐后出现上腹部胀痛,放射至后腰部,伴恶心、呕吐,呕吐物为胃内容物。无胸闷、胸痛,无反酸、嗳气,未排便,肛门停止排气。入院行彩     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体的构建表达与初步鉴定

目的构建和表达日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体,初步鉴定表达产物的活性。方法用overlap PCR法扩增双链抗体基因VH-GGGGS—VL将双链抗体基因重组入原核表达载体pBAD／gⅢ。表达质粒转化E．coli TOP10F’,左旋阿拉伯糖诱导表达。对表达产物进行分离纯化,ELISA检测纯化蛋白与血吸虫病人血清抗体的结合活性。结果测序证实双链抗体基因正确,构建了双链抗体的原核表达系统,双链抗体在细菌超声上清和沉淀内均有表达,分子量约为34kD。纯化产物经ELISA鉴定,结果表明NP30单特异性双链抗体可与血吸虫病人血清抗体特异性结合。结论构建和表达的日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单特异性双链抗体具有与亲本单抗相同的结合活性。     

荧光定量PCR检测c⁃Met CAR病毒感染T细胞的效率

目的：通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c?Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法：应用基因重组技术构建c?Met CAR（GFP）逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c?Met CAR病毒与c?Met CAR（GFP）病毒,感染T细胞制备c?Met CAR?T细胞与c?Met CAR?T（GFP）细胞。Western blot检测c?Met CAR和c?Met CAR（GFP）在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果：构建c?Met CAR（GFP）质粒,荧光显微镜可观察到c?Met CAR（GFP）质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c?Met CAR和c?Met CAR（GFP）病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c?Met CAR与c?Met CAR（GFP）的感染效率分别为（52.1 ± 1.7）%、（55.9 ± 2.3）%。流式细胞术检测c?Met CAR（GFP）病毒感染效率为（50.7 ± 3.6）%,两种检测方法比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论：通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测 CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR?T细胞的临床应用具有实用价值。