急性血吸虫病致免疫复合物肾病15例

1998～2004年本所共收治急性血吸虫病引起免疫复合物肾病患者15例，报告如下。     

1349例新生儿ABO溶血病的检测与分析

目的分析性别、年龄因素及不同放散实验对新生儿溶血病检测的影响,为临床诊治及检测方法的选择提供参考。方法对1 349例疑似新生儿溶血病标本进行直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、酸散放实验和热放散实验。对实验结果进行统计分析,检测ABO溶血病的性别偏好、日龄影响及不同检测方法灵敏性。结果新生儿溶血病患者中男女性别比是否偏离1∶1的分析显示差异无统计学意义(P=0.116);在0～3 d、4～7 d和8～28 d 3个不同时间段,确诊患者比是否偏离1∶1∶1的分析显示差异具有统计学意义(P=2.08×10-48);酸放散实验和热放散实验结果比较分析显示差异具有统计学意义(P=1.9×10-19)。结论女性患新生儿溶血病风险不比男性患病风险高;1～3 d内新生儿溶血病的发病率最高;同时采用酸放散实验和热放散实验进行检测可以有效避免漏检。     

嗜麦芽窄食单胞菌Smqnr耐药基因的序列分析及原核表达

目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将Smqnr基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果:以染色体DNA为模板,成功扩增660bpSmqnr基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%以上;SMgzch770Smqnr序列已登录GenBank(登录号:HQ315851);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白约为50kDa,其中Smqnr蛋白约为24kDa。结论:从SMgzch770中成功克隆及表达了Smqnr基因,为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供了必须材料。     

枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估

目的 对益生菌一枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础.方法 采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24 h)获得芽孢,使用pH 2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验.结果 在DSM培养基中,80%～90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011.在模拟胃液中1 h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活.在模拟小肠环境中3 h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖.结论 枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体.     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达

目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。     

儿童幽门螺杆菌感染4种诊断方法的对比

目的 比较幽门螺杆菌(helicobacter pylori, H.pylori)培养、13C尿素呼气试验(13C-UBT)、病理组织学检查和快速尿素酶试验(RUT)4种方法在诊断儿童H.pylori感染中的临床价值.方法 142例因消化道症状需胃镜检查患儿在前1 d均行13C-UBT检查,胃镜直视下胃窦处取3块黏膜分别行H.pylori培养、病理组织学检查和RUT.结果 142例胃镜检查患儿,H.pylori阳性总检出率53.5%(76/142).慢性浅表性胃炎患儿、慢性浅表性胃炎并十二指肠球炎患儿和十二指肠球部溃疡患儿H.pylori检出率分别为39.2%、61.9%和100%.以"总检出率"为诊断标准,H pylori培养灵敏度97.4%,特异度100%,符合率98.6%;13C-UBT检测方法灵敏度94.7%,特异度98.5%,符合率96.5%;病理组织学方法灵敏度84.2%,特异度97.0%,符合率90.1%;RUT方法灵敏度89.5%,特异度81.8%,符合率85.9%.以"总检出率"和"细菌培养"为诊断标准,13C-UBT、病理组织学和RUT灵敏度、特异度和符合率差异无统计学意义(P0.05).结论 儿童胃、十二指肠疾病,H.pylori感染是引起十二指肠球部溃疡和慢性浅表性胃炎并十二指肠球炎的主要病因之一.H.pylori培养仍是检测儿童H.pylori感染的"金标准",应重视其在临床工作中的应用.不配合胃镜检查3岁以上儿童可行13C-UBT检测H.pylori感染.不推荐临床上以病理组织学检测结果阴性作为否定H.pylori感染的依据.不推荐临床上以RUT单项检测结果作为诊断H.pylori是否感染的依据.     

C反应蛋白、白细胞和中性粒细胞在新生儿感染中的临床意义

目的探讨新生儿感染性疾病中C反应蛋白、白细胞和中性粒细胞的变化及临床意义。方法 352例感染患儿中分为细菌感染组(195例)和病毒感染组(157例),另外选取健康足月儿140例作为正常对照组。所有患儿入院时检测CRP、WBC和GRAN。感染组经过治疗后,于72 h、168 h复查CRP、WBC和GRAN,观察三者的动态变化。结果入院时新生儿细菌感染组CRP、WBC和GRAN均较正常对照组和病毒感染组显著升高(P0.01)。治疗72和168 h后,细菌感染组CRP、WBC和GRAN明显下降(P0.01),而病毒感染组各指标变化不明显(P0.05)。结论新生儿感染中CRP、WBC和GRAN是很好的鉴别细菌与病毒感染的诊断指标,对判断病情变化与疗效具有一定价值。     

应用PDCA循环提高实验室急诊检验报告时间符合率

实验室检查提供了诊断疾病、监测病情、判断疗效及预后的依据。临床医师60%~70%的重要决策基于实验室检测结果,对实验室检测的质量与速度都有一定要求。随着技术的进步,检测质量已经有了很大的提高,临床对于提高检测速度越来越关注[1]。急诊检验处于医疗第一线,是抢救危重患者的重要环节,及时、准确地发出急诊检验报告尤为重要。急诊检验报告的及时性主要是用检验结果的回报告时间来评价的[2-3]。     

肠道病毒71型VP1基因的扩增、克隆、表达及蛋白分析

目的 对肠道病毒71型VP1基因片段进行扩增、克隆、生物信息学分析、原核表达、纯化,初步证实重组表达产物的生物学活性。方法 根据GenBank中EV71序列设计一对特异性引物,以EV71患者咽拭子标本中提取病毒核糖核酸为模板,RT-PCR扩增EV71 VP1基因,酶切后插入表达载体pET28a。构建pET28a-EV71 VP1原核表达载体。转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,使用SDS-PAGE及Western blot分析表达结果,利用软件对测序结果进行生物信息学分析。纯化蛋白并包被反应板,用ELISA分别检测EV71阳性与COX A16阳性患者VP-1IgG抗体,进行统计学分析。结果 目的基因经BLAST比对,同源性与GenBank登录号为JQ766207.1 EV71 VP1一致性达99%。EV71 VP1蛋白相对分子质量约为32×103,主要以包涵体形式存在。生物信息学分析得出,EV71 VP1蛋白为亲水性蛋白,无跨膜区,不具有N-端信号肽序列,存在三级结构。ELISA结果显示EV71阳性患者OD值为(2.425±0.521),COX A16阳性患者OD值为(1.205±0.314),健康对照组OD值为(0.353±0.128)。EV71 VP1蛋白检测敏感性和特异性分别为84%和88%。结论 成功构建了pET28a-EV71 VP1表达载体;通过对手足口患者血清进行ELISA初步分析,得出目的蛋白有较高的敏感性和特异性,初步证实具有生物学活性,可进一步用于EV71诊断及疫苗的相关研究。