MEBO对糖尿病大鼠创面自噬信号因子Beclin1、LC3、p62的调控作用

目的分析湿润烧伤膏(MEBO)对创面组织自噬信号因子Beclin1、LC3、p62的调控作用及其促进创面愈合的机制。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠250只,随机分为空白组、对照组、模型组、康复新组、MEBO组各50只。对照组建立常规创面模型,模型组、康复新组、MEBO组建立糖尿病创面模型,对照组、模型组大鼠创面予生理盐水外敷治疗,康复新组、MEBO组分别予康复新和MEBO外敷治疗。分别于干预第1、5、11、18、25天观察创面愈合情况、苏木素-伊红(HE)染色病理及自噬体的变化;免疫荧光法及Western印迹检测创面组织Beclin1、LC3、p62的变化;qRT-PCR分析Beclin1、LC3、p62 mRNA的表达。结果治疗过程中,对照组愈合最快,模型组愈合最慢,早期各组创面愈合率无显著差异(P>0.05),晚期各组创面愈合率:对照组>MEBO组>康复新组>模型组(P<0.05)。对照组、康复新组、MEBO组创面组织病理形态改善优于模型组。对照组、模型组、康复新组、MEBO组创面组织中Beclin1、LC3平均光密度(OD)值上升后下降,p62 OD值下降后上升;细胞内自噬体数目升高后下降;创面组织Beclin1、p-Beclin1表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升后下降,p62表达下降后上升;Beclin1、LC3 mRNA表达上升后下降,p62表达下降后上升差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论MEBT/MEBO可有效促进糖尿病创面愈合,细胞自噬激活可能是其作用机制之一。     

颈动脉内膜中层厚度对糖尿病足溃疡创面的影响

目的探讨颈动脉内膜中层厚度(IMT)对糖尿病足溃疡创面的影响。方法选取糖尿病足患者181例,未合并糖尿病足2型糖尿病患者62例(非糖尿病足组)为研究对象,测定IMT值,糖尿病足溃疡患者按IMT值分三组:颈动脉内膜厚度正常组(IMT<0.9 mm),颈动脉内膜增厚组(IMT≥0.9 mm)及颈动脉斑块组,回顾性分析患者空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血压、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肌酐(Cr)、踝肱指数(ABI)、糖尿病足Wagner分级等资料。结果颈动脉内膜厚度正常组、颈动脉内膜增厚组、颈动脉斑块组糖尿病足Wagner分级依次升高,差异有统计学意义(P<0.05);随着IMT升高,患者的FBG、HbA1c、LDL-C、Cr、ABI、血压等水平均逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);相关性分析显示IMT值与FBG、HbA1c、LDL-C、Cr、ABI、收缩压呈正相关(r分别为0.183、0.149、0.304、0.421、0.840、0.161,P均<0.05);多元回归分析显示HbA1c、收缩压、ABI为血管内膜增厚的危险因素。结论颈动脉IMT值与糖尿病足创面严重程度密切相关,IMT值越高,糖尿病足创面情况越严重,IMT值可能可作为糖尿病足创面严重程度及预后的判断指标之一。     

MEBT/MEBO对糖尿病大鼠创面组织中ULK1表达的影响

目的观察皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对糖尿病大鼠创面组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(uncoordinated 51 like kinase-1,ULK1)表达的影响,探讨MEBT/MEBO促进糖尿病创面愈合的可能机制。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠90只,随机分为对照组、模型组和MEBO组,每组30只,其中对照组大鼠建立常规创面模型,模型组和MEBO组大鼠建立糖尿病创面模型。模型建立后,对照组及模型组大鼠创面予以生理盐水纱布外敷治疗,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)药纱外敷治疗。分别于治疗第1、11、18天采用Western blotting法检测ULK1蛋白及qRT-PCR技术检测ULK1 mRNA的表达水平,并对比观察3组大鼠创面愈合情况。结果(1)治疗第1天,3组大鼠创面均淤血水肿,无肉芽组织形成;治疗第11天,对照组大鼠创面干燥,可见大片肉芽组织形成,模型组大鼠创面高度水肿,无肉芽组织形成,MEBO组大鼠创面轻微水肿,可见散在肉芽组织形成;治疗第18天,对照组大鼠创面完全愈合,模型组大鼠创面轻微水肿,可见散在肉芽组织形成,MEBO组大鼠创面干燥,可见大片肉芽组织形成。(2)治疗第11、18天,3组大鼠创面愈合率对比,对照组>MEBO组>模型组,组间两两对比,P均<0.05,差异具有统计学意义。(3)治疗第1天,3组大鼠创面组织中ULK1蛋白及ULK1 mRNA表达水平对比,对照组>MEBO组=模型组,对照组与MEBO组及对照组与模型组对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;治疗第11天,3组大鼠创面组织中ULK1蛋白及ULK1 mRNA表达水平对比,对照组>MEBO组>模型组,组间两两对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;治疗第18天,3组大鼠创面组织中ULK1蛋白及ULK1 mRNA表达水平对比,对照组=MEBO组<模型组,对照组与模型组及MEBO组与模型组对比,P均<0.05,差异具有统计学意义。结论MEBT/MEBO可有效促进糖尿病大鼠创面愈合,提高创面组织中ULK1表达水平,诱导细胞自噬可能是其作用机制之一。     

Beclin1在大鼠糖尿病溃疡创面组织中表达变化

目的 观察自噬相关蛋白(Beclin)1在糖尿病大鼠溃疡创面愈合中的变化，初步探讨Beclin1与糖尿病慢性创面愈合的关系。方法 SPF级Wistar雄性大鼠18只，随机分为对照组、模型组各9只。对照组建立常规创面模型，模型组建立糖尿病创面模型。两组分别于模型建立后第1天、第11天、第18天观察创面愈合情况、组织苏木素-伊红(HE)染色病理改变、Beclin1蛋白及其磷酸化水平、Beclin1基因表达。结果 对照组创面愈合效率、组织病理改善均优于模型组(P<0.05);对照组Beclin1、p-Beclin1蛋白及Beclin1 mRNA在创面愈合早期的表达高于模型组，而在愈合晚期的表达低于模型组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Beclin1在糖尿病慢性创面组织中低表达，可能是糖尿病溃疡创面愈合不良的机制之一。