Beclin1在大鼠糖尿病溃疡创面组织中表达变化

目的 观察自噬相关蛋白(Beclin)1在糖尿病大鼠溃疡创面愈合中的变化，初步探讨Beclin1与糖尿病慢性创面愈合的关系。方法 SPF级Wistar雄性大鼠18只，随机分为对照组、模型组各9只。对照组建立常规创面模型，模型组建立糖尿病创面模型。两组分别于模型建立后第1天、第11天、第18天观察创面愈合情况、组织苏木素-伊红(HE)染色病理改变、Beclin1蛋白及其磷酸化水平、Beclin1基因表达。结果 对照组创面愈合效率、组织病理改善均优于模型组(P<0.05);对照组Beclin1、p-Beclin1蛋白及Beclin1 mRNA在创面愈合早期的表达高于模型组，而在愈合晚期的表达低于模型组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Beclin1在糖尿病慢性创面组织中低表达，可能是糖尿病溃疡创面愈合不良的机制之一。     

自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在进展期胰腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在进展期胰腺癌组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学法检测64例胰腺癌组织及相应癌旁正常组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达情况;分析自噬蛋白表达水平与胰腺癌临床病理特征的关系.结果:免疫组织化学法检测提示Beclin1蛋白在胰腺癌组织及癌旁正常组织中阳性表达率分别为28.1%(18/64)、90.6%(58/64),LC3蛋白阳性表达率分别为34.4%(22/64)、75%(48/64)P 6 2蛋白表达阳性率分别为7 5%(4 8/6 4)、4 6.9%(3 0/6 4),均P0.0 5;胰腺癌组织中Beclin1与LC3的表达水平呈正相关(r=0.572P0.05),Beclin1、LC3的表达与肿瘤分化、TNM分期相关(P0.05),Beclin1、LC3和P62的表达均与性别、年龄、有无门脉浸润、淋巴结转移无明显相关(P0.05).结论:自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在胰腺癌组织中的异常表达及Beclin 1与LC3两者表达呈正相关提示自噬活动下降可能参与了进展期胰腺癌的发展.     

大鼠脊髓损伤后自噬相关蛋白Beclin1和LC3表达的变化

目的探讨大鼠脊髓损伤(SCI)后自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达变化对自噬发生的影响。方法构建大鼠脊髓横断损伤模型,分别于损伤后0、4、12 h及1、3、5、7 d通过BBB评分评定SCI大鼠的行为学变化,同时经Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达;并通过腹腔注射自噬抑制剂3-MA和自噬促进剂Rapamycin于SCI小鼠模型,分别于上述时间点通过Western印迹进行Beclin1、LC3的检测,初步探讨自噬抑制剂和自噬促进剂在SCI后对自噬相关蛋白表达变化的作用。结果随着大鼠SCI时间的延长,运动逐渐消失,SCI后3 d大鼠出现无运动现象,之后随着大鼠SCI时间的延长行为逐渐恢复;自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达量随着SCI时间的延长逐渐升高,于3 d左右表达量显著升高(P<0.01)达到峰值;随后其表达量随SCI时间的延长呈现下降的趋势;Rapamycin作用大鼠后Beclin1和LC3的表达量与对照组相比显著增高,于3 d达到极显著水平(P<0.001);3-MA作用大鼠后Beclin1和LC3的表达量与对照组相比显著降低(P<0.001)。结论 Rapamycin能够促进SCI后自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达,最终引发自噬的发生,而3-MA能够抑制Beclin1和LC3的表达,阻止SCI后自噬现象的发生。     

细胞自噬在激素性股骨头缺血坏死大鼠发病中的作用

目的 探索细胞自噬在激素性股骨头缺血坏死(SANFH)大鼠发病机制中的作用。方法 24只无特定病原体(SPF级)SD大鼠(雄鼠各半),随机抽样分为：正常(C)组、模型(T1)组、自噬阻断(T2)组、自噬激动(T3)组,每组雌、雄各3只。C组给予生理盐水,T1、T2、T3组分别给予甲泼尼龙、甲泼尼龙+3-甲基腺嘌呤(MA)、甲泼尼龙+雷帕霉素。8 w后处死,取后肢股骨头并测量坏死面积,采用免疫组化、Western印迹检测坏死股骨头组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ、自噬效应蛋白(Beclin)1及p62蛋白的表达情况。结果 T1、T2、T3组经甲泼尼龙干预8 w后,至少一侧股骨头坏死率分别为83.33%、16.67%、100.00%,T1、T2、T3组与C组比较均具有统计学差异(均P<0.05),且T1组、T3组股骨头坏死面积均显著大于C组和T2组(均P<0.05)。免疫组化染色和Western印迹检测LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1、p62蛋白结果显示,T1、T3组股骨头组织中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的表达量显著高于C组、T2组(均P<0.05),但p62...     

自噬干预对低剪切应力下血管内皮细胞eNOS和ET-1表达的影响

目的 探讨自噬干预对低剪切应力下血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和内皮素1（ET-1）表达的影响。方法 ApoE^－/－小鼠高脂饮食喂饲12周,HE染色法观察主动脉病理改变,免疫组织化学法检测自噬标志物Beclin1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和p62的表达。人脐静脉内皮细胞和新西兰大白兔颈总动脉置于体外灌流系统,分别以低剪切应力（5 dyne/cm²）和正常剪切应力（15 dyne/cm²）灌流1 h,Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ和p62的表达;在此基础上,自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）和自噬激动剂雷帕霉素（rapamycin）孵育低剪切应力处理后的血管内皮细胞和兔颈总动脉30 min,观察自噬干预对低剪切应力诱导的eNOS和ET-1表达的影响。结果 动脉粥样硬化斑块中Beclin1、LC3Ⅱ和p62的表达明显增加;与正常剪切应力组相比,低剪切应力组Beclin1、LC3Ⅱ及p62的表达明显增加;雷帕霉素上调低剪切应力下血管内皮细胞以及离体血管eNOS的表达,抑制ET-1的表达;3-MA则进一步抑制血管内皮细胞以及离体血管eNOS的表达,上调ET-1的表达。结论 低剪切应力抑制血管内皮细胞自噬从而抑制eNOS表达、上调ET-1表达,增强自噬能改善该过程。     

自噬铁环镜变化对成骨细胞(hFOB1.19)及其骨代谢异常的影响

目的探讨成骨细胞自噬在铁环境变化情况下致骨代谢异常的作用。方法实验分为对照组、枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)组、枸橼酸铁铵+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组、去铁胺(deferoxamine,DFO)+FAC+3-MA组、DFO+FAC组。用Western blot法检测成骨细胞自噬(LC3、P62、Beclin1)和成骨(collagen typeⅠ,COLⅠ)和骨钙素(bone gla-protein,BGP)标志蛋白的表达;共聚焦显微镜观察成骨细胞COLⅠ、BGP的荧光蛋白;流式细胞仪检测成骨细胞凋亡; Von kossa染色法行钙结节染色;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性。结果与对照组比较,FAC组LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达增加、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大,可溶性P62、COLⅠ、BGP蛋白表达减少,细胞凋亡增加,细胞矿化能力(0.68±1.63)及碱性磷酸酶活性(0.68±1.84)下降(P0.05),不可溶性P62蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。加入3-MA抑制剂后,与对照组、FAC组比较,LC3Ⅱ、可溶性P62、Beclin1蛋白表达减少、LC3Ⅱ/Ⅰ比值减小,COLⅠ、BGP蛋白表达进一步减少,细胞矿化能力(0.44±1.63)及碱性磷酸酶活性(0.53±0.97)下降,细胞凋亡、不可溶性P62蛋白表达增加(P0.05);但FAC+3-MA组与DFO+FAC+3-MA组结果比较,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,DFO+FAC组LC3Ⅱ/Ⅰ比值变小,LC3Ⅱ、Beclin1、可溶性P62、COLⅠ、BGP蛋白表达减少,细胞凋亡增加,细胞矿化能力(0.86±0.39)及碱性磷酸酶活性(0.76±0.52)下降(P0.05),不可溶性P62蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。与FAC组比较,DFO+FAC组LC3Ⅱ/Ⅰ比值变小,LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达减少(P0.05),可溶性P62、COLⅠ、BGP蛋白表达增加,细胞凋亡减少,细胞矿化能力及碱性磷酸酶活性升高(P0.05),不可溶性P62蛋白表达无差异(P0.05)。结论成骨细胞自噬在骨代谢过程中起着重要作用,过度激活或抑制自噬均会对细胞产生损害,适宜的自噬水平对成骨细胞的功能活性有促进作用。降铁后能降低高铁引起的过度自噬,促进成骨细胞的成骨功能。     

针刀微创联合鼠神经生长因子夹脊穴位注射治疗对带状疱疹后遗神经痛大鼠脊髓背角自噬水平的影响

目的 探究针刀微创联合鼠神经生长因子(mNGF)夹脊穴位注射治疗对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠脊髓背角自噬水平的影响。方法 将100只大鼠随机分为对照组、模型组、mNGF肌肉注射(肌肉注射)组、mNGF夹脊穴位注射(穴位注射)组、针刀微创联合mNGF夹脊穴位注射(针刀联合)组。采用水痘-带状疱疹病毒(VZV)慢性感染法构建模型组、肌肉注射组、穴位注射组、针刀联合组PHN模型，对照组注射等量生理盐水；肌肉注射组给予肌肉注射mNGF,穴位注射组给予夹脊穴位注射mNGF,针刀联合组在穴位注射组基础上进行针刀治疗，对照组、模型组不做处理。采用行为学实验测定大鼠机械缩足阈值(MWT);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；TUNEL染色检测脊髓神经细胞凋亡；免疫组化染色检测脊髓组织酵母自噬相关基因6的哺乳动物同源体(Beclin1)、微管相关蛋白轻链(LC3)-Ⅱ、自噬调控多功能蛋白(p62)表达水平；透射电镜观察脊髓组织自噬泡形成；Western印迹检测脊髓组织Beclin1、LC3-Ⅱ、p62、磷酸化哺乳动物...     

YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制

目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。     

西格列汀通过调控自噬对2型糖尿病大鼠肝纤维化保护作用的研究

目的研究磷酸西格列汀对T2DM大鼠肝细胞自噬的影响。方法采用高脂、高糖饮食配合45mg/kg STZ饲喂法建立T2DM大鼠模型。建模成功后将大鼠随机分组,分别用10m/kg西格列汀灌胃(SGT组)、PBS灌胃(T2DM组)及10IU/(kg·d)胰岛素腹腔注射(ISL组)。PBS灌胃的正常大鼠作为正常对照组(NC)。12周后测定血糖水平。HE、Masson染色评估肝纤维化程度;TUNEL法检测肝细胞损伤状况;采用RT-PCR测定ATG3、ATG12、p62与Beclin1mRNA的表达;采用半定量Western blot测定ATG3、ATG12、p62,Beclin1和LC3B的蛋白水平。结果西格列汀治疗12周后,与T2DM组比较,SGT组血糖降低(P0.05)。HE、Masson染色结果表明,SGT组肝纤维化程度改善。与NC组比较,T2DM组肝组织中自噬相关基因变化差异无统计学意义;T2DM组中ATG3、ATG12、p62、Beclin1的mRNA的表达量分别为(0.82±0.12)、(0.66±0.03)、(0.12±0.01)和(0.52±0.02);SGT组中各基因表达量分别为(1.62±0.11)、(0.89±0.03)、(1.35±0.06)和(0.87±0.11),组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。半定量Western blot结果显示,SGT组肝组织中ATG3、ATG12、p62、Beclin1和LC3B蛋白的表达水平均增加。结论磷酸西格列汀可能通过促进肝组织自噬水平来减轻T2DM大鼠肝纤维化程度。     

RhoA激酶信号通路介导的自噬障碍在2型糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用

目的探索RhoA激酶信号通路介导的自噬障碍在2型糖尿病大鼠(T2DM)心肌纤维化中的作用。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、法舒地尔组(10 mg/kg/d)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(15 mg/kg/d)和法舒地尔+3-MA组各12只。除对照组的所有大鼠均采用高脂饮食法联合小剂量链脲佐菌素诱导T2DM大鼠模型,均给予相应药物干预4周。RT-PCR检测心肌组织ROCK1、ROCK2、PCⅠ、PCⅢmRNA的表达;Western Blot检测心肌组织肌球蛋白磷酸酶靶向蛋白1(MYPT1)、p-MYPT1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1、p62、UNC-51样激酶1(ULK1)、p-ULK1的表达;MTT法检测心肌成纤维细胞的增殖;ELISA和RT-PCR检测成纤维细胞培养液和细胞内PCⅠ和PCⅢ水平。结果与模型组相比,法舒地尔组大鼠成纤维细胞的增殖活性明显降低(P0.05),ROCK1、ROCK2、PCⅠ和PCⅢmRNA的表达均明显上调(P0.05),p-MYPT1/MYPT1和p62的表达明显下调(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin 1和p-ULK1/ULK1的表达明显上调(P0.05),成纤维细胞PCⅠ和PCⅢ的水平均明显下降(P0.05);与法舒地尔组相比,法舒地尔+3-MA组大鼠成纤维细胞的增殖活性明显增加(P0.05),ROCK1、ROCK2、PCⅠ和PCⅢmRNA的表达均明显下调(P0.05),p-MYPT1/MYPT1和p62的表达均明显上调(P0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin 1和p-ULK1/ULK1的表达均明显下调(P0.05),成纤维细胞PCⅠ和PCⅢ的水平均明显升高(P0.05)。结论 RhoA激酶信号通路介导的自噬障碍可以诱导T2DM大鼠的心肌组织纤维化。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子通过Toll样受体－4信号通路调节巨噬细胞自噬水平

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)是否通过Toll样受体-4(TLR4)通路调节巨噬细胞自噬水平。方法用终浓度为5ng/ml的佛波酯(PMA)诱导人单核细胞白血病细胞系(THP-1)THP-1单核细胞48h,采用分化成功的巨噬细胞进行实验。实验分为空白对照组、EMMPRIN组和TAK-242组。蛋白印迹法检测各组TLR4、核因子-κB(NF-κB)、LC3-Ⅱ、Beclin1及P62蛋白表达水平;免疫荧光检测各组LC3-Ⅱ、Beclin1及P62蛋白荧光表达情况。采用SPSS 22.0软件对数据进行处理。结果Western blot检测发现,EMMPRIN组与对照组及TAK-242组相比,TLR4、NF-κB蛋白表达水平均升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平也升高[EMMPRIN组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但仍较对照组升高;EMMPRIN组与TAK-242组比较,差异有统计学意义(P<0.05)],P62蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。免疫荧光检测发现,EMMPRIN组与对照组及TAK-242组相比,LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白荧光表达水平明显升高(均P<0.05),P62蛋白表达水平无差异统计学意义(P>0.05)。结论EMMPRI可能通过TLR4信号通路调节人THP-1巨噬细胞过度自噬。     

miRNA-17-5p在慢加急性肝衰竭合并乙型病毒性肝炎患者中的表达及与自噬相关蛋白表达的关系

目的:探讨微小RNA-17-5p(miRNA-17-5p)在慢加急性肝衰竭合并乙型肝炎(HBV-ACLF)患者中的表达水平及其与自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达的相关性。方法:选取2019年2月至2020年5月HBV-ACLF住院患者82例为HBV-ACLF组,选取同期住院治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者79例作为CHB组,选取同期健康体检者86例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miRNA-17-5p水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素、白蛋白水平;PCR结合荧光探针的体外扩增技术测定血清HBV DNA载量;Pearson法分析HBV-ACLF患者血清miRNA-17-5p与Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素、白蛋白、HBV DNA载量的相关性;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miRNA-17-5p、Beclin1、LC3-Ⅱ水平对HBV-ACLF的诊断价值;多因素Logistic回归分析影响HBV-ACLF发生的因素。结果:HBV-ACLF组患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素水平高于CHB组和对照组,miRNA-17-5p、白蛋白低于CHB组和对照组(P<0.05);CHB组患者血清Beclin1、LC3-Ⅱ、总胆红素水平高于对照组,miRNA-17-5p、白蛋白低于对照组(P<0.05);HBV-ACLF组患者血清HBV DNA载量高于CHB组(P<0.05)。HBV-ACLF组患者血清miRNA-17-5p水平与Beclin1、LC3-Ⅱ呈负相关(r=-0.580、-0.511;均P<0.05);Beclin1、LC3-Ⅱ与总胆红素、HBV DNA载量均呈正相关,与白蛋白呈负相关(P<0.05);miRNA-17-5p与总胆红素、HBV DNA载量均呈负相关,与白蛋白呈正相关(P<0.05)。血清miRNA-17-5p、Beclin1、LC3-Ⅱ水平诊断HBV-ACLF的曲线下面积(AUC)分别为0.862、0.784、0.886,特异性分别为88.4%、80.2%、81.4%,敏感度分别为74.4%、63.4%、81.7%;三者联合诊断的AUC为0.915,特异性为88.4%,敏感度为82.9%。Beclin1、HBV DNA载量是影响HBV-ACLF发生的独立危险因素(P<0.05),miRNA-17-5p是影响HBV-ACLF发生的保护因素(P<0.05)。结论:HBV ACLF患者血清miRNA-17-5p表达水平降低,与Beclin1、LC3-Ⅱ呈明显负相关,且三者均对HBV-ACLF有一定的诊断价值。     

热水浴对慢性应激心肌损伤的防护作用

目的 观察热水浴对应激性心肌损伤的防护作用。 方法 将18只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、应激组和热水浴干预组（简称水浴组），每组6只。利用4 w噪声复合足底电击刺激（4 h/d）构建慢性应激损伤模型；热水浴温度为38~40 ℃。测量大鼠体重、血压和心脏功能，4 w后检测血清应激激素去甲肾上腺素（NE）、血管紧张素（Ang）II和心肌酶肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）水平，免疫荧光和Western blot观察组织蛋白，电镜观察心肌线粒体结构。 结果 与对照组大鼠相比，应激组大鼠存在明显应激反应和心肌损伤，表现为NE、AngII浓度和CK、LDH水平升高（P<0.05）；心肌组织自噬相关蛋白LC3B阳性染色和LC3II/I、p62、Beclin1表达水平增加（P<0.05）；线粒体数量减少并呈现结构紊乱。与应激组大鼠相比，热水浴组大鼠NE、AngII浓度和CK、LDH水平降低，p62和Beclin1水平减少（P<0.05），线粒体结构损伤亦有所逆转。 结论 热水浴能减轻慢性应激状态，调控应激所致心肌细胞自噬紊乱，促进线粒体结构恢复，减轻慢性应激性心肌损伤，其机制有待于进一步研究确认。     

慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者血清自噬相关蛋白水平及其临床意义探讨*

目的 探讨慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者血清p62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和Beclin1水平变化及其临床意义。方法 2018年9月～2020年9月我院收治的HBV-ACLF患者60例和同期体检的健康人65例,计算终末期肝病模型评分(MELD),采用ELISA法测定血清p62、Beclin1和LC3-Ⅱ水平;应用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估指标对HBV-ACLF患者预后的预测效能。结果 60例HBV-ACLF患者血清LC3-Ⅱ和Beclin1水平分别为(66.8±13.5)ng/mL和(11.7±3.6)ng/mL,均显著高于健康人【分别为(35.8±6.2)ng/mL和(8.2±2.9)ng/mL,P＜0.05】,而血清p62水平为(2.5±0.9)ng/mL,显著低于健康人【(4.5±1.6)ng/mL,P＜0.05】;在治疗观察90 d,本组HBV-ACLF患者死亡18例(30.0%);入院时死亡组血清LC3-Ⅱ、Beclin1和MELD评分为(76.25±12.1)ng/mL、(10.9±3.2)ng/mL和(20.1±3.3)分,均显著高于生存组【分别为(62.8±10.2)ng/mL、(13.4±3.5)ng/mL和(16.7±4.6)分,P＜0.05】,而血清p62水平为(1.7±0.6)ng/mL,显著低于生存组【(2.9±0.8)ng/mL,P＜0.05】;ROC曲线分析发现,以血清p62＜2.2 ng/mL、LC3-Ⅱ＞70.3 ng/mL和Beclin1＞12.6 ng/mL为截断点,预测HBV-ACLF患者预后不良的AUC分别为0.856、0.820和0.765,三者联合预测的AUC为0.910,与以MELD评分＞18.3 分为截断点的预测效能为0.917相差无几。结论 应用血清p62、LC3-Ⅱ和Beclin1水平预测HBV-ACLF患者预后有一定的实用意义,值得进一步动态观察。     

康复新液促进高位肛周脓肿置管引流术后创面愈合的临床研究

目的观察康复新液促进高位肛周脓肿置管引流术后创面愈合的临床疗效。 方法将天山中医医院肛肠科从2015年7月至2017年6月诊断为高位肛周脓肿的住院患者60例按照入院顺序随机分为治疗组30例和对照组30例,均采用高位肛周脓肿置管引流术。术后第2 d起,治疗组在换药时应用康复新冲洗脓腔,对照组应用甲硝唑液冲洗脓腔,比较两组术后拔除引流管时间、创面完全愈合时间、术后第3 d、7 d、14 d肛门疼痛和脓腔渗液情况,术后1个月总有效率、随访半年的脓肿复发率及成瘘率。 结果治疗组的拔引流管时间（t=3.506,P=0.001）、创面完全愈合时间（t=6.64,P<0.001）明显短于对照组,差异均有统计学意义;两组间在术后第3 d的疼痛评分（H=0.182,P=0.670）和渗液评分（H=0.001,P=0.973）的差异无统计学意义;在术后第7 d、14 d疼痛评分（H=4.480,P=0.034;H=4.516,P=0.034）和渗液评分（H=5.263,P=0.022;H=4.345,P=0.037）的差异均有统计学意义。术后1个月的总有效率治疗组（93.3%）明显优于对照组（73.3%）,差异有统计学意义（χ²=4.320,P<0.05）;随访半年,两组复发病例均只有1例,差异无统计学意义（χ²=0.000,P>0.05）;明确形成肛瘘的病例中,治疗组（6.7%）明显少于对照组（30%）,差异有统计学意义（χ²=5.455,P<0.05）。 结论康复新液可加快高位肛周脓肿置管引流术后创面愈合速度,减少渗液,减轻疼痛,疗效显著,具有临床使用价值。     

氧化型低密度脂蛋白通过Akt/mTOR/p70S6K通路诱导血管内皮细胞自噬

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, oxLDL)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)自噬和Akt/mTOR/p70S6K信号通路的影响.方法 将培养的HUVECs分为oxLDL组和对照组,分别用100 μg/ml oxLDL和等体积磷酸盐缓冲液处理.在培养6 h和12 h后收集细胞.应用透射电子显微镜观察自噬小体,实时荧光定量聚合酶链反应检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3)和p62 mRNA表达,应用蛋白质印迹法检测LC3、p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K蛋白表达.结果 与对照组相比,oxLDL处理组细胞内的自噬小体数量明显增多(P<0.05),LC3 mRNA及蛋白表达水平均显著增高(P均<0.05),而p62 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05).此外,oxLDL处理组Akt、mTOR、p70S6K磷酸化蛋白表达水平均较对照组显著降低(P均<0.01),但Akt、mTOR和p70S6K总蛋白表达水平与对照组无显著差异.结论 oxLDL可通过抑制Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导HUVECs自噬.     

基于自噬与凋亡平衡探讨补肾活血汤对衰老耳蜗毛细胞株HEI-OC1的保护作用

目的探讨补肾活血汤对衰老耳蜗毛细胞株HEI-OC1自噬和凋亡的影响。方法应用D-半乳糖构建衰老HEI-OC1细胞的体外模型后,将细胞分为对照组、衰老组、含药血清低、中及高剂量组(5%、10%、20%),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测耳蜗HEI-OC1细胞的增殖能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老状态;膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡的程度;Western印迹检测细胞中自噬和凋亡相关蛋白的表达水平。结果MTT、β-半乳糖苷酶染色、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术和Western印迹结果显示,与对照组比较,衰老组HEI-OC1细胞增殖能力明显下降;细胞衰老状态明显增加,细胞凋亡率明显增加,Atg5、Atg12、Beclin1和Bcl-2蛋白表达水平明显下降,p62和Bax蛋白表达水平显著升高(均P<0.01)。与衰老组比较,补肾活血汤各组HEI-OC1细胞增殖能力明显上升;细胞凋亡率明显降低;Atg5、Atg12、Beclin1和Bcl-2蛋白表达水平显著增加(均P<0.05);p62和Bax蛋白表达水平显著下降(均P<0.05),且均呈现出剂量依赖性。结论补肾活血汤可通过促进自噬及抑制凋亡来延缓耳蜗毛细胞株HEI-OC1的衰老,且与其浓度相关。     

辛伐他汀对哮喘小鼠细胞自噬和炎症的影响及其机制的实验研究

目的观察不同剂量辛伐他汀对哮喘小鼠自噬和炎症的影响及机制。方法32只小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、低剂量辛伐他汀组(C组40 mg/Kg)、高剂量辛伐他汀组(D组60 mg/Kg),每组8只。B、C、D三组采用卵清蛋白+氢氧化铝造模,C、D组同时给予辛伐他汀40 mg/kg、60 mg/kg灌胃。采用H.E染色观察肺组织,Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、mTOR、p-mTOR,RT-PCR法检测Atg5和Beclin1 mRNA。结果A组支气管未见炎症细胞浸润,管腔规则、黏膜上皮正常;B组可见大量炎症细胞浸润,管壁增厚,气道黏膜增生;C、D组上述表现较B组减轻,且D组改善更明显。与A组比较,B组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D两组LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1 mRNA增加,p-mTOR/mTOR降低,D组上述指标变化更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠自噬水平增加,p-mTOR/mTOR信号通路蛋白降低;辛伐他汀可能通过阻断mTOR信号通路进一步提高LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5 mRNA、Beclin1mRNA水平,从而缓解气道炎症。     

二甲双胍通过AMPK/SIRT3通路促进脂肪酸培养的肌细胞自噬

目的探讨二甲双胍对高脂培养肌细胞自噬的作用及可能机制。方法用不同浓度棕榈酸(0.1、0.2、0.4、0.6 mmol/L)及二甲双胍(0.5、1、2、5、10 mmol/L)分别干预L6肌细胞24 h,CCK 8法检测肌细胞的存活率。棕榈酸和二甲双胍干预肌细胞24 h后,Western印迹检测微管相关轻链蛋白3(LC3Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin 1、泛素结合蛋白p62、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)蛋白表达及腺苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平,RT-PCR技术检测上述基因的mRNA表达水平。结果棕榈酸剂量依赖性地降低肌细胞活力,2 mmol/L二甲双胍显示最佳的对抗作用。0.4 mmol/L棕榈酸和2 mmol/L二甲双胍干预肌细胞24 h后,棕榈酸显著减少LC3Ⅱ/LC3I、Beclin 1、SIRT3的蛋白及mRNA表达水平,降低AMPK磷酸化水平,显著增加p62的蛋白及mRNA表达水平(均P<0.05),棕榈酸的这些作用可被二甲双胍所对抗(均P<0.05)。结论二甲双胍可能通过刺激AMPK的磷酸化增加SIRT3的表达而增强脂肪酸培养的肌细胞自噬。     

Beclin 1 knockdown retards re-endothelialization and exacerbates neointimal formation via a crosstalk between autophagy and apoptosis

Objective

Endothelial regeneration is an essential process for the prevention of excessive neointimal formation following endothelial denudation. Beclin 1, a mammalian autophagy gene, is a link between autophagy and apoptosis. We hypothesized that the interference of Beclin 1 can influence re-endothelialization and ultimately affect neointimal formation by regulating autophagy and apoptosis.

Methods

A rat carotid injury model of endothelial denudation was used, and small interfering RNA of Beclin 1 was perivascularly administered. Neointima was evaluated by morphological analysis. von Willebrand factor, Beclin 1, LC3, autophagic substrate p62 and caspase-3 levels were detected by immunofluorescence or Western blotting. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated digoxigenin–dUTP–biotin nick-end labeling assay was performed to evaluate apoptosis.

Results

Carotid injury induced an upregulation of Beclin 1 protein which was down regulated by more than 50% with small RNA interference. Beclin 1 knockdown significantly retarded re-endothelialization 7 days after injury and subsequently augmented neointima by more than 2 folds at 14 and 21 days. Autophagy and apoptosis were detected to reveal the regulatory effect of Beclin 1. The injury-activated autophagy, shown by the increased levels of punctate LC3 and LC3II as well as decreased p62 expression, was significantly inhibited by Beclin 1 knockdown. Meanwhile, the apoptotic endothelial cell number was increased and caspase-3 was up-regulated, though the expression of truncated BID was not significantly influenced.

Conclusion

Beclin 1 knockdown exacerbated neointimal formation after rat carotid injury, associated with retarded re-endothelialization due to enhanced apoptosis, while simultaneously prohibiting autophagic activation. The data suggested an essential role of Beclin 1 as a regulator between autophagy and apoptosis in the setting of neointimal formation.