太子参脂溶性成份GC指纹图谱初步研究

目的应用GC法建立太子参脂溶性成份指纹图谱,为太子参药材的质量评价提供依据。方法用GC对不同产地太子参的脂溶性成分进行分析,建立其指纹图谱。结果太子参挥发性成分中含有6个特征性指标成分,初步建立了以此6个共有峰为特征指纹信息的GC指纹图谱。结论方法准确可靠,重现性好,可用于太子参药材的质量评价。     

象牙屑促进伤口愈合机理的初步研究

目的 研究象牙屑及其不同组分促伤口愈合的分子机制.方法 象牙屑经脱钙、分级分离得3混合物,命名为MW14、MWS-14和MW5.通过2种动物创伤模型检验象牙屑对伤口愈合的功效;通过氯胺T法、明胶酶谱分析、qRT-PCR、ELISA和Western blotting等研究象牙屑及其不同组分促伤口愈合的机制.结果 象牙屑可促进伤口愈合,其总水提物（WE）和MW5组分能显著激活PI3 K/Akt和JNK/ERK信号通路,促成纤维细胞生长和胶原积累,提高MMP-2/-9活性和MMP-1/-13表达,抑制TIMP-1/-2表达,促进TGF-β、EGF、VEGF、CTGF、bFGF及TNF-α释放.结论 象牙屑有效成分可能包括2部分：MW14和MW5;象牙屑促伤口愈合依赖于PI3K/Akt和JNK/ERK MAPK通路.     

丹参活性成分抑制口腔纤维化药效药理研究

目的：研究丹参酮（Tan）．ⅡA、丹酚酸（Sal）-A、-B抑制槟榔提取物（ANE）诱导的口腔黏膜纤维化（OSF）的效应和作用机制。方法：小鼠口腔黏膜成纤维细胞（mOMF）培养,人胶原基因启动子报告质粒构建,羟脯氨酸测定,明胶酶谱分析,qRT-PCR,ELISA和Westernblot测定等。结果：Tan-ⅡA、Sal-A、-B可显著抑制ANE诱导的mOMF增殖和胶原沉积,抑制人胶原基因COL1A1、3A1启动子转录活性,拮抗ANE诱导的MMP-2／-9活性降低和TIMP-1／-2表达升高;抑制CTGF、TGFβ1、IL-6和TNFα的转录和释放,抑制ANE诱导的AKT、ERKMAPK和TGFβ／Smads信号通路激活。结论：Tan．ⅡA、Sal-A、-B可显著抑制ANE诱导的OSF。     

Regulatory Action of Charred Gossamer Urocteae on the Functions of Mouse Oral Fibroblasts

Objective:To explore the influence of charred Gossamer urocteae(CGU) on the functions of primary cultured mouse oral fibroblasts and reveal its mechanism in wound healing.Methods:CGU was extracted with different solvents and ethanol extract(EE),ethyl acetate fraction(EF),n-butanol fraction(BF) and aqueous fraction(AF) were obtained.The effects of different fractions on the proliferation,matrix metalloproteinase-2,9(MMP-2,9) activities,synthesis of collagen and tissue inhibitor of metalloproteinase 1(TIMP-1)...     

氧化苦参碱抗流感病毒药效及机制研究

目的： 研究氧化苦参碱的抗流感病毒活性及其潜在机制。方法：培养MDCK和A549细胞,并设空白对照组(DMSO, 0.5%)、病毒处理组、阳性对照组(利巴韦林,200 μmol/L)和氧化苦参碱处理组(12.5、25、50、100 μmol/L),每组重复6孔。空斑抑制法测定氧化苦参碱抗病毒药效;构建荧光素酶报告质粒,并用Western blot和ELISA检测氧化苦参碱对流感病毒诱导的细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)启动子转录、TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB信号通路活化及炎性因子释放的影响。结果：空斑抑制实验显示氧化苦参碱在12.5～100 μmol/L范围内可显著降低流感病毒复制,其半数有效浓度(EC50)为19.95 μmol/L。与病毒处理组比较,启动子荧光素酶报告质粒检测显示12.5 μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的TLR4、MyD88和TRAF6转录(P＜0.05);Western blot检测显示12.5 μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB通路的活化(P＜0.05);ELISA检测显示12.5 μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、IFN-β和IFN-γ释放(P＜0.05)。结论：氧化苦参碱具抗流感病毒活性,其潜在机制可能与其抑制流感病毒诱导的TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB信号通路活化有关。     

HeLa细胞中Zwint-1选择剪接亚型v7的表达鉴定

目的： 验证在HeLa细胞系中是否存在Zwint-1 v7选择性剪切亚型的mRNA和蛋白产物。方法：在缺失片段两侧设计引物,利用PCR和克隆测序验证HeLa细胞中是否存在缺失片段的mRNA;构建Zwint-1 v7 3′端特异区段(Z7)的GST融合表达载体pGEX-KG-GST-Z7,转化入BL21菌种诱导表达,菌体经超声破碎和2 mol/L尿素洗涤纯化,融合蛋白经SDS-PAGE电泳并切胶回收后作为抗原与佐剂混合乳化并免疫C57BL/6小鼠,收获多克隆抗血清Anti-Z7,采用Dot blot检测多克隆抗体的效价,Western blot检测HeLa细胞全蛋白中的Z7蛋白产物。结果：PCR和测序结果表明存在缺失37 bp的核酸片段;SDS-PAGE电泳显示在30.7 kDa处出现明显的蛋白条带;Dot blot结果表明1∶5 000稀释的多克隆抗体能检出12 ng GST-Z7;Western blot结果表明,1∶200稀释的多克隆抗体可识别HeLa细胞中Zwint-1 v7蛋白。结论：本研究在核酸水平和蛋白水平初步验证了HeLa细胞中存在Zwint-1 v7。     

相对湿度对蛇足石杉生理生化指标的影响

目的:研究相对湿度对蛇足石杉生理生化指标的影响。方法:设置不同相对湿度,测定蛇足石杉可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、多酚氧化酶活性、过氧化物酶活性、过氧化氢酶活性。结果:90%相对湿度条件比较适合蛇足石杉生长。结论:本试验结果可为蛇足石杉规范化种植(GAP)提供参考。     

流感病毒感染神经胶质细胞条件培养上清对星形胶质细胞的免疫生物学影响

目的 利用人流感病毒H1N1和H3N2感染小鼠星形胶质细胞获得条件培养上清刺激正常星形胶质细胞,研究人流感病毒感染星形胶质细胞后释放的细胞因子,是否会诱导正常胶质细胞的免疫病理学变化.方法 从新生小鼠大脑皮质分离纯化星形胶质细胞,经纯度鉴定后,用人流感病毒H1N1和H3N2体外感染,分别于感染早期(6 h)和感染中晚期(24 h)收获条件培养上清,刺激正常星形胶质细胞,CCK-8法检测细胞存活率,Western blotting法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达状况,ELISA法检测细胞不同时间分泌的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平变化.结果 流感病毒感染星形胶质细胞的条件培养上清,可显著抑制正常胶质细胞的活性,诱导GFAP蛋白表达的上调,而炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6在不同时间点的蛋白表达水平发生不同程度改变,总体呈下降趋势.结论 体外实验中,人流感病毒感染星形胶质细胞后释放的细胞因子会诱导正常胶质细胞发生较为明显的免疫病理学变化,但未见明显的细胞因子级联现象.