一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定

目的:鼠抗人CD83功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以人CD83转基因细胞L929/CD83为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929/CD83、293/CD83转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用Ig类和亚类快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法、Western blot对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD83mAb的杂交瘤细胞株(命名为9D8),该mAb能特异性地识别成熟的DC、活化的T细胞及肿瘤细胞株Daudi、8226表达的CD83分子,该mAb识别的位点不同于商品化抗人CD83mAb(HB15e).结论:成功地研制1株鼠抗人CD83mAb,识别位点与HB15e不同,为更好地研究该分子的功能提供良好的物质基础.     

抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白1抗体检测血脂正常脑梗死患者的临床意义

目的研究抗心磷脂抗体(ACA)及抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)在脑梗死患者中的表达及其临床意义。方法选取确诊的脑梗死患者211例,按照是否合并高脂血症,分为血脂正常脑梗死组(n=121)和高脂血症合并脑梗死组(n=90)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)对两组患者血清IgA、IgG、IgM型ACA和anti-β2-GP1进行测定并比较两组阳性率的差异;同时比较不同年龄、性别、病灶数量的血脂正常脑梗死组患者ACA和anti-β2-GP1阳性率差异及脑梗死患者两类抗体之间的相关性。结果血脂正常脑梗死组和高脂血症合并脑梗死组的ACA阳性率分别为14.0%和4.4%(χ~2=4.295,P=0.038),anti-β2-GP1阳性率分别为17.4%和5.6%(χ~2=6.651,P=0.010)。血脂正常脑梗死组患者中,90例单发性脑梗死和31例多发性脑梗死患者的ACA阳性率分别为8.9%和29.0%(χ~2=7.748,P=0.005),anti-β2-GP1阳性率分别为10.0%和38.7%(χ~2=13.250,P=0.000);在血脂正常脑梗死组患者中,≤50岁67例,50岁54例,ACA阳性率分别为20.9%和5.6%(χ~2=4.626,P=0.031),anti-β2-GP1阳性率分别为25.4%和7.4%(χ~2=5.534,P=0.019);ACA和anti-β2-GP1阳性率在性别上差异无统计学意义(P0.05);一致性χ~2检验显示211例脑梗死患者ACA和anti-β2-GP1有相关性(P0.05)。结论 ACA及anti-β2-GP1可能是血脂正常中青年脑梗死患者的重要发病原因之一,临床应加强对这类人群ACA及anti-β2-GP1的联合检测。     

PKC途径和P13K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的 研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(P13K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用.方法 人PBMC先用P13K抑制剂Ly29400Z、PKC抑制剂Rottlerin或NT-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-T分泌;并同时检测,αβT细胞作为对照.结果 无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P＜0.05或P＜0.01),后二组分泌IFN-γ的78T和αβT细胞亦显著减少(P＜0.05或P＜0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P＜0.01).结论 PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PDK亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用.     

蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用

目的 研究蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)信号途径在结核分枝杆菌抗原(Mycobacterium tuberculosis antigen,Mtb-Ag)激活人γδT细胞增殖和分化中的作用.方法 健康人外周血单个核细胞(PBMC)用Mtb-Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞,或预先用5.0μmol/L Rottlerin(楸毒素)预处理,培养不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达;同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记细胞,流式细胞术分析Mtb-Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率.结果 PBMC经Mtb-Ag刺激后3d,γδT细胞CD69和CD25表达分别为46.2%和45.6%,而Rotderin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达(P＜0.01);PBMC经Mtb-Ag激活培养5、10和15d,培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9.6%、54.6%和82.4%,其中第5天已有少部分γδT细胞发生增殖,第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上,用Rottlerin预处理,显著抑制了γδT细胞增殖反应,但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应;同时在培养第7天、14天和21天,用PMA(佛波酯)+Ionomycin(离子霉素)再刺激后,产生IFN-γ的γδT细胞均在80%左右;培养21d时,有2.6%的γδT细胞表达IL-4.在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少(P＜0.05),而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制(P＜0.01).结论 PKCθ信号途径在Mtb-Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用.     

肺癌患者血清7项肿瘤标志物联合检测在病理分型及临床分期中的应用价值研究

目的　探讨癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）、细胞角蛋白19 片段（cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase, NSE）、胃泌素释放肽前体（gastrin-releasing peptideprecursor, ProGRP）、鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen, SCC）、糖类抗原125（carbohydrate antigen125, CA125）和人附睾分泌蛋白4（human epididymis secrete protein 4, HE4）等7 项肿瘤标志物单项或联合检测对肺癌诊断、病理分型及临床分期的应用价值。方法　以41 例健康体检者和40 例肺良性疾病患者为对照，采用电化学发光法检测88 例肺癌患者血清CEA，CYFRA21-1，NSE，ProGRP，SCC，CA125 和HE4 水平，采用非参数检验、卡方检验及ROC 曲线比较7 项指标单独或联合检测的临床价值。 结果　肺癌患者血清7 项肿瘤标志物水平均高于肺良性疾病组和健康体检组，差异均有统计学意义（H=9.940~64.275, 均P<0.01）；肺腺癌患者CEA 水平及阳性率均高于鳞癌和小细胞肺癌患者（χ2=16.00，P=0.000；H=12.708，P=0.002），肺鳞癌患者SCC 水平及阳性率均高于腺癌和小细胞肺癌患者（χ2=42.102，P=0.000；H=37.525，P=0.000），小细胞肺癌患者NSE，ProGRP，CA125 和HE4 水平及阳性率均高于鳞癌患者，而NSE 和ProGRP 水平及阳性率均高于腺癌患者，差异均有统计学意义（H=7.223~32.895，χ2=6.213~49.491,均P<0.05）；肺癌Ⅳ期患者CA125 和HE4 水平高于Ⅰ + Ⅱ期和Ⅲ期患者，CEA，CYFRA21-1 和NSE 水平高于Ⅰ + Ⅱ期患者，差异均有统计学意义（H=7.678~26.918, 均P<0.05）；诊断肺癌（总体）、肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌曲线下面积（AUC）最大的项目分别为CYFRA21-1 (0.823)，CEA (0.816)，SCC (0.947) 和NSE(0.957)，7 项联合检测诊断肺癌（总体）、肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌的AUC 分别为0.855，0.849，0.864 和0.983。 结论　肿瘤标志物CEA，SCC，NSE，ProGRP，CA125 和HE4 水平对肺癌分型有一定临床应用价值，而CYFRA21-1，CEA，SCC 和NSE 水平对肺癌分期有一定临床应用价值，7 项联合检测诊断肺癌（总体）、肺腺癌和小细胞肺癌优于单项检测。     

胰腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞亚群和血小板变化

目的测定胰腺癌患者手术前后外周血淋巴细胞亚群和血小板(PLT)水平,并探讨其与胰腺癌患者临床病理参数的相关性。方法选取66例胰腺癌患者(胰腺癌组),以64名体检健康者作为对照组。检测所有对象淋巴细胞亚群[CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞]及PLT水平,分析其与胰腺癌临床病理参数的相关性。结果与对照组相比,胰腺癌组术前外周血CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞水平明显降低(P0.05),CD3~+CD8~+T细胞和PLT水平明显升高(P0.05);胰腺癌组术后CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞水平较术前明显升高(P0.05),PLT较术前明显降低(P0.05);胰腺癌组术后与对照组之间CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞和PLT水平差异均无统计学意义(P0.05);胰腺癌组术前外周血CD3~+T细胞、CD3~+CD4~+T细胞、CD3~+CD8~+T细胞、B细胞、NK细胞、PLT水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、有无神经浸润、分化程度无关(P0.05);外周血CD3~+CD4~+T细胞、PLT水平与胰腺癌不同组织分级、有无淋巴结转移有关(P0.05)。胰腺癌组术前外周血CD3~+CD4~+T细胞水平与PLT水平呈负相关(r=-0.44,P0.01)。结论胰腺癌患者细胞免疫功能术前处于被抑制状态,术后可基本恢复正常。胰腺癌患者术前淋巴细胞免疫异常与PLT水平、胰腺癌组织分级和淋巴结转移相关。     

红细胞分布宽度对系统性红斑狼疮疾病活动度评估的临床价值

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)初诊患者红细胞分布宽度(RDW)与疾病严重程度间可能存在的关系.方法 以190例健康人群作为对照组,回顾性分析初诊的181例SLE患者相关临床数据,如C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、补体(C)、免疫球蛋白、红细胞分布宽度(RDW)、SLE疾病活动指数(SLEDAI-2K)等.依据国际通用的SLE-DAI-2K准则评判SLE患者的疾病活动情况,对患者进行分组.分析各组间RDW指标的差异及SLEDAI-2K评分与RDW之间的相关性.结果 SLE患者的RDW明显高于对照组(t=16.36,p＜0.001);SLE患者的RDW与ESR以及CRP呈正相关性(r=0.628、0.663,P＜0.001),与C3及C4呈负相关性(r=-0.348、-0.273,P＜0.001);RDW在SLE患者不同活动组间差异有统计学意义(F=99.66,P＜0.001),且与SLEDAI-2K评分呈正相关性(r=0.725,P＜0.001),4组间两两分别进行比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RDW具有潜在评估SLE初诊患者疾病活动度的临床价值.     

PKC途径和PI3K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(PI3K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用。方法人PBMC先用PI3K抑制剂Ly294002、PKC抑制剂Rottlerin或NF-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA+Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-γ分泌;并同时检测αβT细胞作为对照。结果无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P<0.05或P<0.01),后二组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞亦显著减少(P<0.05或P<0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P<0.01)。结论PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PI3K亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用。