一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定

目的:鼠抗人CD83功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以人CD83转基因细胞L929/CD83为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929/CD83、293/CD83转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用Ig类和亚类快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法、Western blot对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD83mAb的杂交瘤细胞株(命名为9D8),该mAb能特异性地识别成熟的DC、活化的T细胞及肿瘤细胞株Daudi、8226表达的CD83分子,该mAb识别的位点不同于商品化抗人CD83mAb(HB15e).结论:成功地研制1株鼠抗人CD83mAb,识别位点与HB15e不同,为更好地研究该分子的功能提供良好的物质基础.     

GD患者外周血CD4~+CD28-T细胞亚群的表型特征及临床意义

检测Graves病(GD)患者外周血CD4~+CD28-T细胞水平及其表面CD45RO/CD45RA及ICOS的表达,探讨CD4~+ CD28-T细胞亚群在GD免疫致病机制中的作用。采用三色荧光抗体染色及流式细胞术检测了42例初发GD患者和30例健康者外周血中CD4~+CD28-T细胞的百分率及其表面CD45RO/CD45RA和ICOS表达水平,同时检测其甲状腺功能并进行相关性分析。结果GD患者外周血中CD4~+CD28-T细胞百分率明显高于健康对照组,并高表达ICOS分子,与FT3水平显著正相关;与健康对照组相比,GD患者CD4~+CD28~-CD45RO~+T细胞百分率也显著增高,而CD4~+CD28~-CD45RA~+T细胞呈下降趋势,FT3、FT4水平与CD4~+CD28-T细胞表面CD45RO的表达率呈正相关,而FT3水平与CD45RA表达呈负相关。结论GD患者外周血CD4~+CD28~-T细胞异常增高,表面高表达ICOS分子,具有记忆性细胞的表型特征,与甲状腺功能异常有一定的相关性,CD4~+CD28-T细胞可能是参与GD免疫病理反应的自身反应性T细胞。     

高三尖杉酯碱的抗癌疗效及药代动力学研究

目的：研究高三尖杉酯碱（HHRT）口服的抗癌疗效及其药代动力学。方法：用肿瘤生长抑制率和荷瘤动物生命延长率来评价HHRT口服的抗癌疗效。用反相高效液相色谱法（HPLC）法检测HHRT口服的药代动力学。结果：口服HHRT在剂量为0．5mg/kg和1．0mg/kg时,对小鼠肉瘤S180及小鼠EC实体癌均有明显疗效,抑制率为38．9％－50．5％;对小鼠腹水型肝癌（HepA)的生命延长率为87．5％;在研究不同给药方案对口服HHRT疗效的影响时发现,间隔给药组疗效与每天连续给药组相近,一次给药组没有明显的疗效;大鼠口服HHRT后,在血液中未检测到原药的存在。结论：口服HHRT具有明显的抗肿瘤作用,发挥此作用的并非原药本身。     

抗肿瘤转移的新药研究

抗肿瘤转移的新药研究仲维学胥彬主题词肿瘤转移／药物疗法抗肿瘤药物／药理学细胞粘附细胞运动血管生成中图号Ｒ７３０．５３约有５０％以上的肿瘤患者在临床诊断时，已发生了局部或远处的转移。局部性的治疗方法（手术，放疗）只能将原位肿瘤切除或杀灭，可导致肿瘤的复...     

天花粉蛋白联合CD40信号激发的人MoDC介导Th2细胞分化的研究

探讨天花粉蛋白(Tk)联合CD40信号诱导人单核细胞来源DC(MoDC)的成熟活化及其介导Th2细胞分化的作用和机制。采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导人MoDC,并利用鼠抗人CD40激发型单抗(5C11)刺激负载了Tk的DC制备成熟DC。采用免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型(CD80、CD83、CD86、CD14、PDL1)及其摄取FITC-Dextran的能力;ELISA法测定DC上清中IL-12p70的含量;胞内染色和流式细胞术检测经成熟DC活化的T细胞中CD4~+IFN-γ~+T和CD4~+IL-4~+T的比例。实验结果显示单独Tk不能刺激DC完全成熟,用Tk负载DC后必须联合外源性成熟刺激信号(如5C11),才能有效促进DC成熟,表现在CD80、CD83、CD86的上调表达,CD14下调表达,DC摄取FITC-Dextran的能力降低。与CD40信号单独诱导组相比,Tk联合CD40信号诱导的成熟DC表面PDL1分子呈下调表达,分泌IL-12的能力显著降低,明显提高T细胞中CD4~+IL-4~+T的比例。由此表明负载了Tk的成熟MoDC体外能有效介导Th2细胞分化。     

外周血CD4~+CD28~-T细胞表达的细胞因子与Graves眼病的相关性

探讨CIM~+CD28~-T细胞在Graves眼病(GO)中的免疫致病作用.采用流式细胞仪分析GO、Graves病无GO患者和健康对照者CIM~+CIY28~-T细胞γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和IL-4的表达.结果 显示,GO组CIM~+CD28~-T细胞比例显著增高(P<0.05),胞内高表达IFN-γ(P<0.05)、低表达IL-2(P<0.05),与GO临床活动度评分(CAS)密切相关(P<0.05).IL-4表达在3组间无明显差异.结果 提示高分泌IFN-γ的CIM~+CD28~-T细胞与GO病理损害有关.     

人CD83基因转染细胞株的构建及其功能初步研究

目的构建人CD83全长编码基因转染293细胞,并探讨其对单核细胞的作用。方法 RT-PCR方法从成熟人树突状细胞(DC)扩增出CD83 cDNA,插入pIRES2-EGFP载体,脂质体转染293细胞,筛选出稳定表达目的基因细胞株;从人外周血单个核细胞(PBMC)中磁珠分选单核细胞,LPS刺激的同时加入293/CD83细胞或293/mock,24 h后检测细胞活化状态以及培养上清中TNF-α水平。结果经流式细胞术反复检测绿色荧光蛋白(GFP)报告基因及CD83表达水平,筛选获得获得一株稳定表达膜型CD83分子的基因转染细胞株293/CD83;体外实验显示293/CD83可促进LPS刺激的单核细胞活化水平和TNF-α分泌量。结论成功构建表达人CD83分子的293细胞株,293/CD83对LPS刺激的单核细胞有协同刺激作用。     

IL-2/IL-2R对单核来源树突状细胞的体外分化发育和功能的作用

目的 分别比较抗人CD40单抗和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)对单核来源树突状细胞(monocyte-derived dendritic cell,Mo-DC)体外诱导表达CD25(IL-2Rα)的作用,并进一步探讨了IL-2在Mo-DC分化成熟和功能介导中的生物学效应.方法 采用联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4体外诱导Mo-DC的培养方法 ,分别加入CD40单抗和TNF-α诱导Mo-DC成熟;免疫荧光标记分析Mo-DC表型;ELISA法测定γ干扰素(interferon-r,IFN-γ)的分泌水平;3H-TdR掺入法分析Mo-DC对自体T细胞的促增殖效应.结果 (1)CD40信号能有效诱导成熟Mo-DC上调表达CD25(IL-2Rα),而TNF-α则无此作用;(2)Mo-DC在CD40激发后,加入不同剂量的IL-2继续培养可促进Mo-DC对IFN-γ的分泌,同时3H-TdR掺入法的结果也显示,在Mo-DC培养时加入IL-2可以增强Mo-DC对T细胞的促增殖作用.结论 CD40激发的Mo-DC上调表达CD25(IL-2Rα),外源性IL-2能促进Mo-DC分泌IFN-γ和介导T细胞的促增殖效应.