经络艾灸防治乳腺癌根治术后患侧上肢水肿的效果评价

目的观察循经艾灸预防乳腺癌患者根治术后上肢水肿的效果。方法采用便利抽样法选取乳腺外科乳腺癌根治术的患者150例,随机分为对照组和观察组,每组75例。对照组行常规护理,观察组在对照组基础上在手术侧上肢循经艾灸。于术前1 d、术后第14天和术后1个月,测量两组患者患侧上肢水肿程度。结果观察组术后患侧上肢水肿发生率低于对照组(P<0.05)。结论术后循经艾灸可有效预防乳腺癌根治术后患侧上肢水肿,提高患者舒适度。     

隔姜灸对乳腺癌改良根治术后血液高凝状态的干预效果

目的探讨隔姜灸治疗乳腺癌改良根治术后血液高凝状态的疗效。方法将106例行乳腺癌改良根治术患者随机分为对照组(n=54)和观察组(n=52)。对照组术后采取常规护理,观察组在对照组的基础上从术后1～7 d在患者双侧血海穴、三阴交穴、足三里穴及太冲穴进行隔姜灸干预,比较两组患者术前1 d及术后7 d凝血功能相关指标。结果与对照组比较,观察组患者术后7 d凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间显著延长,纤维蛋白原及D-二聚体含量显著降低(均P0.05);两组均未发现出血征象。结论隔姜灸可安全有效地改善乳腺癌改良根治术后患者血液高凝状态。     

高葡萄糖培养增加H9C2成心肌细胞G蛋白偶联受体激酶2基因表达

目的前期临床研究发现2型糖尿病患者淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)基因表达升高,为进一步探讨GRK2表达升高的分子机制,检测高糖对GRK2基因表达的影响。方法H9C2成心肌细胞随机分成5组分别加入以下培养液:空白对照组和不同葡萄糖梯度浓度组(0,5.5,12.5,25,33mmol/L),培养72h后采用RT-PCR,WESTERN BLOTTING分别测定GRK2-mRNA和磷酸化Akt(Ser473)蛋白含量比值。结果随着葡萄糖浓度升高,H9C2成心肌细胞的GRK2-mRNA表达水平呈剂量依赖性增加,pearson相关分析提示提示两者间存在直线相关(R=0.683,P<0.001),采用Student Newman-Keuls'q检验,各葡萄糖培养组与无糖培养比较均存在统计学差异(P=0.028,P=0.009,P<0.001)。而磷酸化Akt(Ser473)蛋白表达水平减少,各组间比较存在统计学意义(F=369.1,P<0.001),回归分析和pearson相关分析提示葡萄糖浓度与磷酸化AKt(Ser473)蛋白的表达呈线性负相关(R=-0.913,P<0.001)。结论高糖培养使GRK2表达升...     

妊娠糖尿病患者孕早期血清脂联素与妊娠结局相关性的临床研究

目的:多项研究提示血清脂联素水平降低可预示妊娠糖尿病的发生,但是孕早期脂联素水平的改变与妊娠结局的相关性仍不清楚.本实验拟采用巢式病例对照研究方法探讨孕早期脂联素水平的改变与妊娠结局的相关性.方法:本研究拟通过巢式病例对照研究,观察2007年10月至2008年6月期间在广东省人民医院产检分娩的孕妇843例,-80℃保存孕早期(16～20周)血清,并追踪随访至分娩.发现单胎妊娠的妊娠糖尿病患者73例(GDM组),随机抽取年龄匹配的正常单胎妊娠妇女73例为对照组(NGDM组).采用全自动生化分析仪测定空腹血糖(FBG)水平,放免法测定空腹胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用酶联免疫方法测定脂联素水平.结果:GDM组孕早期血清脂联素水平明显低于NGDM组[(54.23±2.96)nmol/Lvs(68.24±4.54)nmol/L],P＜0.05).GDM组孕早期血清脂联素水平与HOMA1-IR呈负相关(r=-0.364,P＜0.01),但与产筛血糖和OGTT血糖水平均未发现相关性,合并巨大胎,早产的孕妇孕早期血清脂联素水平无差异.结论:妊娠糖尿病患者孕早期血清脂联素水平降低,孕早期血清脂联素水平与胰岛素抵抗有关,但未发现与血糖水平和妊娠不良结局的相关性.     

隔姜百笑灸对乳腺癌根治术后患者术侧上肢功能恢复的影响

目的 探讨隔姜百笑灸对乳腺癌根治术后患者术侧上肢功能恢复的影响.方法 采取便利抽样法选择2015年10月—2016年12月在我院乳腺二病区实行乳腺癌根治术的101例患者,按入院的先后顺序分为对照组(n=52)和观察组(n=49).对照组行全程功能锻炼,观察组在全程功能锻炼的基础上行隔姜百笑灸治疗.于术前1 d及术后第14天,对2组患者术侧肩关节活动度及术侧握力进行测量和比较.结果 观察组术后第14天肩关节活动度及握力的恢复情况优于对照组(P<0.05).结论 隔姜百笑灸联合全程功能锻炼可有效地促进乳腺癌根治术后患者肩关节活动度及握力的恢复.     

HL-1心肌细胞中桥粒蛋白基因表达下调对Nav1.5功能的影响

目的采用基因沉默技术抑制HL-1细胞的桥粒蛋白（DSP）基因表达以明确DSP与Nav1.5的结构和功能关系。方法用基
因沉默技术抑制DSP基因的表达,然后采用Western blotting检测HL-1细胞DSP和Nav1.5蛋白的表达,用双免疫荧光方法检测
DSP与Nav1.5蛋白的表达与定位情况,并用全细胞膜片钳技术检测细胞钠通道的电生理特征。结果与空白组和对照组相比,
siRNA-DSP组的DSP和Nav1.5 蛋白表达量降低。免疫荧光检测发现空白组和对照组DSP与Nav1.5蛋白存在共定位情况,而
siRNA-DSP组DSP和Cx43蛋白共定位则遭到破坏,并且膜片钳检测发现siRNA-DSP组峰值电流从（156.3±6.2）pA/pF 减少至
（41.8±3.1）pA/pF（P<0.05）,电压依赖的失活曲线V0.5从-42 mV左移至-61 mV（P<0.05）和从失活恢复时间延长。结论DSP表
达抑制不仅使DSP与Nav1.5的共定位特征遭到破坏,而且还改变了Nav1.5电生理特征。
     

干预G蛋白βγ亚基介导的信号转导途径对心肌细胞肥大的影响

目的 研究G蛋白βγ亚基在心肌细胞肥大中的作用.方法 采用细菌内同源重组方法制备重组腺病毒载体rAd-βARKct 50 MOI(multiplicity of infection)感染经去甲肾上腺素处理肥大乳鼠心肌细胞,荧光倒置显微镜下观察心肌细胞形态及绿色荧光蛋白的表达,EMAIL图像分析软件测定心肌细胞的表面积,RT-PCR检测βARKct、α-MHC和β-MHC的mRNA表达水平.结果 经测序鉴定证实rAd-β ARKct构建成功,对心肌细胞的感染率40%～50%,与去甲肾上腺素组相比,重组腺病毒组α-MHC定量比值显著上升,β-MHC定量比值显著降低.结论 编码βARKct的重组腺病毒表达载体可以体外感染乳鼠心肌细胞并在心肌细胞中表达βARKct;抑制Gβγ蛋白的功能,可显著逆转去甲肾上腺素介导的肌球蛋白重链表型的改变(α-MHC/β-MHC),逆转心肌细胞肥大.     

编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备

[目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct.     

人血管内皮生长因子(VEGF165)在大肠杆菌中的表达及鉴定

[目的]克隆人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化重组VEGF165(rVEGF165)蛋白.[方法]用PCR技术,从人心脏cDNA文库中扩增VEGF165cDNA,并定向克隆入原核表达载体pET-28a中.用IPTG诱导VEGF165在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用HisTrap亲合层析柱纯化重组rVEGF165,Western-blot鉴定.根据人VEGF165的促血管内皮细胞增殖的特性,用MTT法检测重组VEGF165的生物学活性.[结果]从人心脏cDNA文库中扩增出VEGF165cDNA片段.克隆的VEGF165cDNA长576bp,编码191个氨基酸残基,序列与文献报道一致.SDS-PAGE电泳显示,经IPTG诱导,高效表达出25ku的rVEGF165,主要存在于包涵体中,约占菌体总蛋白的20%.MTT检测显示,复性后的rVEGF165能呈剂量依赖性地促进脐静脉血管内皮细胞增殖.[结论]克隆、测定了人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出rVEGF165.     

表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的：研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。 方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)，建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA的表达水平。 结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF 反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%（P<0.05）。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制，表达水平降低40%（P<0.05）。 结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达，建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。