COL1A1/COL1A2基因突变分析与成骨不全的产前基因诊断

目的对有成骨不全(Osteogenesis Imperfecta,OI)孕史的患者,进行系统B超及COL1A1/COL1A2基因检测,希望建立OI患儿产前诊断方案,为OI患儿进行产前诊断提供技术保障。方法对于有OI孕史的孕妇,进行系统B超监测;根据胎儿股骨、长骨的超声影像学表现,初诊为成骨不全。抽取羊水,采用直接测序法对羊水DNA的COL1A1和COL1A2基因全编码外显子及启动子区域进行突变位点检测。检出的新突变,对孕妇夫妇及家系其他成员直接测序证实。产前诊断标本均需做母血污染鉴定。结果胎儿超声影像学表现为股骨短小,胫腓骨弯曲成角,颅骨变薄且发现多处骨折,考虑OI。STR法鉴定,羊水无母血污染。DNA序列分析结果显示COL1A1基因鉴定出19个SNP位点,没有鉴定出突变位点;COL1A2基因鉴定出13个SNP位点及第36外显子的第2180位置碱基发生错义突变位点(c.2180G>A,p.Gly727Asp)。孕妇在COL1A2基因的第36外显子亦存在错义突变位点(c.2180G>A,p.Gly727Asp),但其临床特征不一致。其他成员均未检测到Gly727Asp突变。结论有OI孕史的孕妇,采取B超和COL1A1/COL1A2基因诊断技术,可以快速、有效对高危胎儿做出确诊,为预防患病胎儿出生提供技术保障。     

应用多重连接探针扩增技术快速高通量检测染色体非整倍体

目的评价多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)在染色体非整倍体诊断中的应用价值。方法应用MLPA技术检测了150例羊水标本、50例外周血标本,所有标本均进行常规染色体核型分析,应用Cof-falyser9.0MLPA-DATA数据分析软件获得MLPA结果,比对MLPA和染色体核型分析结果的准确性,评价两种技术的符合率,总结MLPA技术临床应用过程中的关键要点。结果MLPA扩增后探针信号强度与质控相比比率大于1.3判定为重复,小于0.7判定为缺失。150例羊水标本,MLPA显示非整倍体染色体数目异常14例,与羊水染色体培养核型分析结果相同;50例外周血标本,MLPA异常21例,与培养结果符合率100%。DNA质量和浓度是实验成败的关键,Coffalyser9.0MLPA-DATA数据分析软件可以实现MLPA数据处理通量化。结论MLPA技术用于普通的染色体非整倍体数目检测快速、特异、敏感,弥补了常规染色体培养周期长等缺点,对于大量的产前诊断羊水标本,可以实现高通量检测,具较高的临床应用价值。     

荧光原位杂交技术快速诊断胎儿常见染色体数目异常

目的探讨荧光原位杂交（FISH）技术在产前诊断中的应用价值。方法采集116名孕妇孕16~23周的羊水标本,应用荧光标记的21号染色体特殊位点探针（21q22,DSCR2）、13号染色体特殊位点探针（13q14,DLEU1）及18号染色体探针、X/Y染色体着丝粒探针（CEP）对未经培养的羊水间期细胞进行FISH检测;同步进行羊水细胞培养,行常规细胞遗传学染色体核型分析。结果 FISH与羊水细胞核型分析相符的染色体数目正常108例,数目异常6例,另各有1例染色体核型分析分别显示为平衡易位、臂内倒位异常,FISH结果显示正常。6例数目异常胎儿引产时抽脐血染色体检查结果与羊水产前诊断结果一致。结论 FISH技术用于快速诊断胎儿常见染色体数目异常,具有简便、快速、特异性强等优点,临床有较高的应用价值。     

荧光原位杂交技术快速诊断胎儿常见染色体数目异常

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断中的应用价值。方法采集116名孕妇孕16~23周的羊水标本,应用荧光标记的21号染色体特殊位点探针(21q22,DSCR2)、13号染色体特殊位点探针(13q14,DLEU1)及18号染色体探针、X/Y染色体着丝粒探针(CEP)对未经培养的羊水间期细胞进行FISH检测;同步进行羊水细胞培养,行常规细胞遗传学染色体核型分析。结果 FISH与羊水细胞核型分析相符的染色体数目正常108例,数目异常6例,另各有1例染色体核型分析分别显示为平衡易位、臂内倒位异常,FISH结果显示正常。6例数目异常胎儿引产时抽脐血染色体检查结果与羊水产前诊断结果一致。结论 FISH技术用于快速诊断胎儿常见染色体数目异常,具有简便、快速、特异性强等优点,临床有较高的应用价值。     

HER-2蛋白表达和基因扩增与乳腺癌预后的关系

目的 探讨HER-2蛋白表达和基因扩增与乳腺癌淋巴结转移和雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的关系.方法 采用免疫组化SP法和荧光原位杂交法检测64例乳腺癌新鲜标本中的HER-2蛋白表达和基因扩增情况,并结合ER、PR及淋巴结转移情况对比分析.结果 64例中HER-2蛋白表达强阳性15例,阳性7例,弱阳性3例,阴性39例,其中基因过表达（免疫组化检测强阳性或阳性）率为37.5%;基因扩增20例.无扩增44例.扩增率31.3%.免疫组化与荧光原位杂交检测符合率为90.9%（P〈0.05）.ER、PR表达情况与HER-2蛋白表达和基因扩增呈负相关（r=-0.36、-0.35,P〈0.05）,ER和PR均阴性者HER-2蛋白表达率（60.0%）及基因扩增率（55.0%）明显高于ER和（或）PR阳性者（分别为22.7%、20.5%）.差异均有统计学意义（×2=8.47、7.64,均P〈0.05）.淋巴结转移情况与HER-2蛋白表达及基因扩增无关（r=0.16、0.22,P〉0.05）.结论 HER-2蛋白表达和基因扩增提示乳腺癌预后不良,HER-2及ER、PR在乳腺癌的治疗中有着重要作用,免疫组化可作为检测HER-2基因状态的首选方法 ,但对于HER-2＋＋者需进一步行荧光原位杂交检测.HER-2蛋白表达和基因扩增与淋巴结转移无关.     

正常孕妇中期产前筛查指标中位数数据库的建立

目的 评价我国常用的3种国外产前筛查风险计算软件内嵌AFP、游离β-人绒毛膜促性腺激素(free-β-HCG)指标中位数数据库的差异,选择合适的产前筛查指标中位数计算模莲型,建立温州地区正常孕妇群产前筛查AFP、free-β-HCG指标中位数数据库.方法 应用时间分辨荧光检测技术检测20 054名正常孕妇群AFP、free-β-HCG含量,应用双因素方差分析比较本组数据与目前常用2T-risk(2T)、Lifecycle-2.2(LC2.2)和Lifecycle-3.0(LC3.0)3种风险软件中数据的差异,分析本组数据与国内沈阳、宁波区域数据是否存在莘异,应用模型校正拟合度、模型拟合对数分布均数和标准差等指标,评价3个软件中配给的非线性回归模型的稳定性,选择适合本组数据的回归模型,建立温州地区孕妇群筛查指标中位数数据库.结果 本组数据AFP、free-β-HCG测定值比2T软件内嵌中位浓度分别高10%和16%;比LC-2.2分别高15%和20%;比LC-3.0分别高6%和17%,差异有统计学意义(FAFP=161.757,P<0.01;Ffree-β-HCG=58.261,P<0.01).本组温州地区数据AFP、free-β-HCG浓度比我国沈阳地区高2%和低3%、比宁波高1%和2%,温州、沈阳、宁波3个区域数据之间AFP指标差异无统计学意义(FAFP=0.174,P=0.840),free-β-HCG指标3个地区间差异有统计学意义(Ffree-β-HCG=13.303,P<0.01).2T、LC-2.2、LC-3.0风险软件中用于中位值计算的二次方程回归模型、指数二次函数回归模型、指数四次函数叫门模型差别不大,以指数四次函数回门模型为佳.结论 我国温州、沈阳、宁波3个区域筛查指标的数据与国外2TC、LC-2.2、LC-3.0 3个版本软件内嵌数据均存在显著差异,人种的不同和回归模型参数小同是造成差异的原因,我国需建立自己的模型参数和中位数数据库.我国温州、沈阳、宁波3个区域之间大样本的数据AFP指标差异无显著性,free-β-HCG指标稳定性较差,3个区域之间有些差异,温州、宁波数据较接近.提示我国小样本的实验室在相同实验条件情况下,可参考国内大样本数据建立自己实验室参数.3个软件内公认的回归计算模型稳定性差别不大,本组数据以指数四次函数回归模型为佳,可适用于同本组数据分布相似的我国其他筛查中心筛查指标中位数数据库的建立.     

乳腺癌HER-2基因扩增和蛋白表达与ER、PR的关系及临床意义

目的探讨HER-2基因及其蛋白在乳腺癌中扩增及表达状况,并研究其与ER、PR的相关性。方法用FISH技术和IHC技术检测51例乳腺癌新鲜标本中的HER-2基因的扩增及蛋白表达情况,并检测ER、PR进行对比分析。结果51例中10例HER-2蛋白表达强阳性（＋＋＋）,6例阳性（＋＋）,2例弱阳性（＋）,33例阴性,其中基因过表达率（IHC检测＋＋／＋＋＋）为31．4％;FISH检测中基因扩增14例,37例无扩增,扩增率为27．5％。IHC（＋＋／＋＋＋）与FISH检测符合率87．5％（P〈0．05）,ER、PR表达情况与HER-2基因及蛋白扩增呈负相关,ER和PR均为阴性的HER-2基因扩增率及蛋白表达率明显高于ER和（或）PR阳性的患者（IHC50％与24．3％,P〈0．05;FISH42．9％与19．4％,P〈0．05）。结论HER-2的扩增和蛋白过度表达提示乳腺癌预后不良,HER-2与ER、PR在乳腺癌的治疗中起重要作用,IHC可以作为检测HER-2基因状态的首选方法,但对于HER-2（＋＋）需要进一步进行FISH检测。