应用多重连接依赖式探针扩增技术快速高通量诊断胎儿染色体非整倍体异常

目的 评价多重连接依赖式探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)在染色体非整倍体诊断中的应用价值,为我国羊水染色体诊断提供一种快速、特异、高通量的分子诊断手段.方法 应用MLPA技术检测了500份羊水标本,所有标本均进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测和常规染色体核型分析,应用RH-MLPA-v511数据分析软件获得MLPA结果,比较MLPA技术与FISH和染色体核型分析结果的准确性,总结MLPA技术临床应用过程中的关键要点.结果 在500份羊水标本中,MLPA检测成功率97%.3个工作日完成结果的为92%,需重复检测的为5%,失败为3%.对染色体非整倍体异常检测敏感性和准确性100%.证实38例非整倍体病例探针信号比值＞正常二倍体4s,2例疑似三体结果＞2s.分析了21号染色体8条探针的杂交效率,21三体患者8条探针中平均4条探针比值＞1.3.结论 MLPA技术具有快速、特异、敏感、高通量、成本低等特点,可用于产前染色体非整倍体数目的快速检测,是传统染色体培养方法的补充,临床应用价值较高.

Abstract：

Objective To assess the diagnostic value of multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) for detection of common chromosome aneuploidy in amniotic fluid (AF) cells in order to obtain an accurate, rapid, cost-effective and high-throughput method in routine prenatal clinical practice.Methods The MLPA test was performed on 500 AF samples by using kit P095 and the results were obtained by using analysis software RH-MLPA-v511. The results were compared with that from fluorescence in situ hybridization (FISH) and traditional karyotyping (TK). The technical critical issues were analyzed in routine diagnostic application. Results The absolute specificity and sensitivity of the MLPA test to detect the aneuploidy were 100%. For the 500 AF samples, the success rate of the MLPA tests was 97%. Among them 92% were finished within three working days and 5% required more days for repeating. The test failure rate was 3%. The results confirmed that for the 38 detectable aneuploid samples,the probe reliability weighted mean ratio values were more than 4SD compared to normal diploids and the 2 suspected trisomy samples were more than 2SD. In this study, authors analyzed hybridization efficiencies of 8 probes for chromosome 21, and the presence of a trisomy was considered if at least 4 of the 8 probes gave probe ratio of ＞1.3. Conclusion The data suggested that MLPA is a rapid, simple and reliable method for large scale testing for aneuploidy of chromosomes 13, 18, 21, X, or Y in AF. The MLPA technology is complementary to AF culture and valuable for prenatal diagnosis.     

超声软指标产前筛查唐氏综合征的临床策略研究

目的通过产前超声筛查胎儿染色体软指标,探讨染色体软指标筛查唐氏综合征的临床价值。方法 2014年2月至2017年2月在我院行系统超声检查的正常胎儿597例,同期在我院经产前诊断为DS的存活胎儿46例,孕周16~25w,超声筛查有无结构异常及染色体异常软指标,根据孕妇年龄、血清学筛查结果及超声检查综合评定,决定是否行胎儿染色体检查。染色体异常软指标主要包括:鼻前软组织增厚,鼻骨发育不良,颈项软组织增厚、轻度肾盂扩张、心室强回声、肠管回声增强,小指中节指骨发育不良等。结果 597例胎儿中,发现超声软指标异常共68例(11.4%),其中鼻部软指标异常25例(4.2%),其他软指标异常43例(7.2%)。46例DS胎儿中,合并结构畸形15例(32.6%),超声软指标异常44例(95.7%),多发软指标异常29例(63.0%),单发软指标异常5例(10.9%),鼻部软指标异常40例(87.0%),非鼻部软指标异常21例(45.7%)。DS组超声软指标异常发生率显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.001),DS组多发超声软指标异常发生率高于单发软指标异常,差异有统计学意义(P<0.001),DS胎儿鼻部软指标异常发生率高于非鼻部软指标异常,差异有统计学意义(P<0.001)。结论产前超声筛查中应当注重超声软指标的筛查,多发软指标异常筛查DS的敏感性较单发软指标异常明显提高,鼻部软指标的综合评价和筛查较常规染色体标志物更有助于DS胎儿的产前筛查。     

鼻前软组织厚度产前筛查唐氏综合征的临床价值

目的 通过超声检测胎儿鼻前软组织厚度(PT),探讨鼻前软组织厚度与唐氏综合征(DS)的关系,建立超声软指标PT中位倍数(MoM)值,明确PT筛查唐氏综合征的临床价值。 方法 对2012年6月—2014年6月期间在温州市中心医院超声检查的孕16～25周的正常胎儿及DS胎儿进行PT测量,组间比较采用t检验或Wilcoxon秩和检验,并行Spearman线性相关分析,采用二次回归模型计算2组MoM(PT)值,并建立风险评估模型,观察敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比指标。 结果 正常组PT平均值为(3.51±0.91) mm,DS组PT平均值为(5.16±0.79) mm,差异有统计学意义(t=12.23,P＜0.05);正常组胎儿PT随孕周增加而增厚,正常胎儿PT的MoM值为1.010,DS胎儿PT的MoM值为1.371。PT为单一指标筛查DS,以5%假阳性率,筛查唐氏综合征胎儿敏感度为58%,阳性预测值为0.46,阴性预测值为0.97,阳性似然比为11.63,阴性似然比为0.44;PT联合年龄高风险筛查DS,以5%假阳性率,敏感度提高到75%,阳性预测值为0.52,阴性预测值为0.98,阳性似然比为14.94,阴性似然比为0.26。 结论 鼻前软组织厚度是孕中期筛查唐氏综合征有效的遗传学超声软指标,唐氏综合征胎儿鼻前软组织厚度较正常胎儿厚。鼻前软组织厚度联合年龄高风险筛查唐氏综合征可以提高筛查敏感度,风险截断值达1/250,应建议行侵入性检查。      

人RACK1蛋白在HEK-293 T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位

目的构建可以表达有活性的蛋白激酶 C 受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板, PCR扩增出 RACK1序列,分别构建到载体 pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞),转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌 BL21感受态细胞中表达, Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况,免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了 pcD-NA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。 West-ern blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达,考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达,免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达,在COS7细胞的胞质、胞核均有分布,为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。     

妇女孕产期保健服务利用状况及影响因素调查

目的探讨妇女孕产期保健服务的利用状况,对其影响因素进行分析和调查。方法选取2014年3月在我市工作的流动人口育龄妇女为研究对象,其中470人有分娩经历。对这些妇女的产前检查、产后访视服务的利用状况及其影响因素进行分析。结果470例流动人口育龄妇女做过产前检查的共有356例．产前检查率为75．74％;得到产后访视的妇女有342例,产后访视率为72．77％。大专及以上文化程度的妇女产前检查次数为8．72±3．19,产后访视次数为1．12±1．25,明显高于初、高中文化程度妇女的5．86±3．23、0．65±1．12和小学以下文化程度妇女的3．70±2．69、0．29±0．68．差异均具有统计学意义（P＜0．05）。家庭月收入4ooo元以上的妇女产前检查次数为7．78±3．64．产后访视次数为0．98±1．26,明显高于家庭月收入2ooo～3999元妇女的6．22±3．14、0．71±1．23和家庭月收入2000元以下妇女的4．98±3．06、0．49±0．97,差异均具有统计学意义（P＜0．05）。结论文化程度、家庭收入、年龄和是否参加生育保险是影响妇女孕产期保健服务利用状况的重要因素．应加强针对流动人口育龄妇女的孕产期保健管理力度,开展孕产期健康教育,充分发挥计生网络的作用,努力改善流动妇女的孕产期保健状况。     

浅谈合理补钙

钙是人体生命活动的调节剂,是人体生命之源,钙是人体内最丰富的矿物质,约1200克,参与人体整个生命过程。从骨骼形成、肌肉收缩、心脏跳动、神经以及大脑的思维活动,直至人体的生长发育、消除疲劳、健脑益智和延缓衰老等等,钙在人的一生中都肩负着重要的生理功能,是保证人体健康必不可少的生命元素。     

癫痫所致精神障碍家庭护理35例报告

癫痫性精神障碍恢复的好坏,不仅是医生、护士的责任,还有赖于家属及全社会的关心和帮助,因为家属对患者的态度和关心程度会直接影响疾病的预后。在某些家庭中,家属对患者不够关心,入院后不探视,病情好转后不接出院,出院后对患者歧视,不督促其按时服药,均可导致疾病复发。护士向患者家属进行健康教育,对嫌弃患者的家属进行说服教育工作,     

白术的化学、药理与炮制研究进展

白术为菊科植物白术Atractylodes mcrocephala Koidz.的干燥根茎.气清香,味苦、甘,性温,具健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎之功效,主要用于脾虚食少、腹胀泄泻、痰饮眩悸、水肿、自汗、胎动不安.白术主产于浙江、安徽、江西、湖南、湖北等地,习惯认为浙江新昌产者质量最佳,为道地药材.近年,许多学者对白术进行了化学、药理和炮制等方面的研究,这将使对白术进一步进行现代化研究奠定了基础.     

肝硬化患者的专科质量控制康复护理效果

目的探讨专科质量控制康复护理应用于肝硬化患者的效果。方法选择本院接受治疗的肝硬化患者90例,采用随机数表法分为对照组和观察组各45例。对照组行常规护理,观察组在此基础上行专科质量控制康复护理。护理3个月后,对比分析2组患者的肝功能、治疗依从性、自我管理能力评分及生活质量评分。结果观察组患者护理3个月后总胆红素(TBIL)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平均显著低于对照组(P 0. 05),白蛋白(ALB)和白蛋白/球蛋白(A/G)水平均显著高于对照组(P 0. 05),观察组护理后治疗依从性显著优于对照组(P 0. 05),观察组患者的自我管理行为评分与生活质量评分均显著高于对照组(P 0. 05)。结论在肝硬化患者中应用专科质量控制康复护理对其肝功能水平有显著改善作用,可提高其治疗依从性以及自我管理能力,改善患者生活质量,有利于患者的康复。