检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的：建立聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，并评价共临床应用的价值。方法：依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物，用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段；对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析，并随机测定rpoB片段的序列。结果：PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230bp片段135份抗酸染色阳性的痰标本中，有113份扩得阳性片段（83．7％），在SSCP分析中，140份经L－J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌，有130份有rpoB基因突变（符合率为92．9％），72份经L－J药敏试验检测为利福平敏感的菌，有67份的rpoB基因无突变（符合率为93．1％），测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变，10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变，SSCP与测序结果的符合率为94．0％，在本研究的菌株中，耐多药结核病（MDR－TB）占76．4％（107／140），有92．5％（99／107）耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论：建立的PCR－SSCP分析方法，是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性，并可作为MDR－TB判断的一个重要指标。     

522株痰分支杆菌对DIP、INH、PAS药敏试验探讨

近年来 ,全球结核病发病率明显增加 ,全球有近 2 0亿人受到结核分支杆菌感染 ,现有结核患者 2 0 0 0万 ,每年新发生结核病达 10 0 0万 ,每年死于结核病 35 0万。针对耐药结核病 ,特别是耐多药结核 (MDR- TB)治疗 ,开发研制新型抗结核药物为当前普遍关注的热门课题。力克肺疾 (DIP)作为抗结核新药其化学名为 4-吡啶甲酰肼 -氨基水扬酸钠 ,是异烟肼与对氨基水扬酸钠 (PAS)的化学结合物。为了解 DIP对耐 INH、PAS菌株的交叉耐药情况 ,我们从 1998年 8月至今从痰标本中培养出的 5 2 2株结核分支杆菌进行 DIP、INH、PAS的交叉耐药性…     

结核分支杆菌利福平及利福喷丁平行药敏测试87株结果分析

1　材料和方法1 1　菌株来源　 87株菌株均为本院肺结核病人痰分支杆菌培养所获。药敏接种菌液质量浓度为 (分数 ) 10 4 ｍｇ/Ｌ。1 2　试验药　利福平 (ＲＦＰ)原药由卫生部结核病控制中心参比实验室提供 ,利福喷丁 (ＲＦＴ)原药由中国国家医药管理局四川抗菌素工业研究所制药厂提供。试验药物质量浓度 (ｍｇ/Ｌ) :ＲＦＰ :5 0、2 5 0 ;ＲＦＴ :2 5、12 5。1 3　质控菌株　 1998年ＷＨＯ药敏质控敏感菌株 (卫生部结核病控制中心参比室提供 ,菌株号 9814)。1 4　方法　罗氏绝对浓度间接法 ,其培养基制作、操作及结果判断均按中国防痨协会编…     

氧气湿化瓶污染情况调查

本文就我院住院病人使用的氧气湿化瓶 5 1个进行随机抽样调查 ,其中消毒前 2 6个 ,消毒后 2 5个 ,现将湿化瓶的细菌污染情况报告如下。1　材料与方法1.1　随机抽样 :住院病人使用的氧气湿化瓶消毒前采取标本2 6份 ,消毒后采取标本 2 5份 ,分别进行细菌培养。1.2　按照常规消毒法采取湿化瓶内液 0 .4 ml,注入血琼脂平板接种划线 ,置 3 5℃温箱培养 2 4小时观察结果 ,并按《全国临床检验操作规程》进行菌落鉴定。2　结果2 .1　 5 1份氧气湿化瓶中 8份无细菌生长 ,4 3份有细菌生长 ,占抽样数的 84 .3 % ,经生化编码鉴定出致病菌 2 9株 ,占抽样…     

力克肺疾与异烟肼、对氨基水杨酸钠的交叉耐药性试验

目的：了解力克肺炎（DIP）对耐异烟肼（INH）及耐对氨基水杨酸钠（PAS）菌株的交叉耐药情况，作为耐药病人对3种药物的选择依据，方法：对临床所获得18株痰分枝结核杆菌采用罗氏绝对浓度间接法进行3种药物的平行药物敏感试验，结果：DIP，INH，PAS的耐药率分别为26．5％，51．4％，29．9％，耐INH或耐PAS菌株中对DIP的耐药符合率分别为44．18％，85．6％。结论：对已耐NH的肺结核病人仍有55．82％对DIP敏感。因此，此类病人半数以上可选择DIP作为一个敏感的新药。     

依赖利福平结核分支杆菌在无利福平条件下的生长情况研究

目的 探讨依赖利福平结核分支杆菌（依R菌）在无R条件下的生长情况。方法 取初步研究的典型依R菌株，挑取最佳R浓度管中的单个菌落，制备10^-4mg/ml菌液，分别接种于L－J和12B液体培养基，37℃培养；对比观察不同试验管细菌的生长速度、特点以及光镜、电镜下的菌体形态。结果 L－J培养有R管2周可见菌落，无R管3周才见到细小菌落；12B液体培养，前者9天获得阳性指数，后者需13天。有R管中菌落生长粗大、凸起、花菜样、易刮取和乳化；无R管中菌落生长细小、扁平、荷包蛋样、不易刮取和乳化。光镜下有R管菌体粗大、深染；无R管菌体细小、浅染，且大小不等。透射电镜下有R管菌体细胞壁完整，无R管菌体细胞壁缺陷。结论 依R菌在无R条件下可呈细胞L型样改变。     

结核分枝杆菌随机扩增多态性DNA指纹分型技术及应用研究

目的 探讨重庆地区结核病分子流行病学的发展趋势。方法 建立随机扩增多态性DNA聚丙酰胺凝胶电泳（RAPD－PAGE）指纹分型法；采用1对随机引物对重庆地区287例肺结核患者416株结核分枝杆菌进行DNA指纹分型。结果 416株分离菌株其DNA指纹可分为7种类型，以Ⅰ型（35.5%)、Ⅱ型（29.3%）和Ⅲ型（22.6%)为主,其中20-39岁和40-49岁年龄组的初治患者在3型中分别占58.0%和46.2%.在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中初治患者分别占52.0%、46.4%和58.5%，至少耐利福平和异烟肼（MDR）的初治患者又分别占的11.3%、35.9%和24.3%，至少耐利福平和其他药物的多理耐药株在3型中占21.7%（初治）。结论 RAPD－PAGE指纹分型法，是一种简便、特异、敏感、重复性好的菌株分型方法，可用于结核病分子流行学的研究；以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型为主的结核分枝杆菌正在重庆及周边地区的人群中传播；MDR株和含利福平的其他多种耐药株的传播占有较高频率。     

依赖利福平菌肺结核43例临床分析

目的　探讨依赖利福平(R)结核分支杆菌肺结核的临床特征、产生原因及防治对策。方法对实验室诊断为依赖R菌的肺结核患者进行治疗和随访追踪,对其临床资料进行回顾性分析。结果(1)43依赖R菌肺结核患者中,年龄20～39岁的占60.5%(26/43),40～59岁的占20.9%(9/43);病灶范围≥3个肺野的占88.4%(38/43),病变性质以干酪空洞为主的占58.1%(25/43);耐药种类≥3种抗结核药的占88.4%(38/43),≥2种的为100%(43/43),至少耐异烟肼和利福平的耐多药肺结核(MDR-TB)占74.4%(32/43)。(2)5例初始患者均为MDR-TB,且化疗全部失败;38例复治患者化疗失败率达52.6%(20/38),利福霉素类药物交替使用或不规则用药的占76.3%。结论 (1)依赖R菌肺结核以病情重,耐多药,化疗效果差和预后不良为主要临床特征。(2)肺结核患者长期不合理或不规则用利福霉素类药,可能是产生依赖R菌的主要原因。(3)建立结核菌耐药性检测的快速方法,并应用于临床,是及时了解耐药情况的重要手段。     

BACTEC系统对依赖利福平结核分支杆菌生长与耐药性的分析

目的　探讨依赖利福平结核分支杆菌 (依R菌)在BACTEC系统中的生长特征,以便用该系统鉴定依R菌。方法 选取L -J法初步鉴定的依R菌,制成菌液 (10^-4mg/ml)分别以0.1ml接种于含不同利福平 (R)浓度 (1～384μg/ml)的7H-12液体培养基中培养,用BACTEC法测定不同实验瓶生长指数 (GI),判断耐药性,并对培养物称重及进行形态 (抗酸染色)观察。结果 (1)耐药性,依R菌在R1～96μg/ml10个浓度中均耐药,R192μg ml临界,384μg/ml敏感。 (2)菌体重量,R6、8、10、12、24μg/ml各瓶细菌重量 (分别为87、125、116、104、65mg)明显高于对照瓶 (35mg),重量比为1.9～3.6,平均2.9,其余各耐药瓶与对照瓶无明显差别。 (3)培养物涂片抗酸染色,可见各R瓶内结核分支杆菌菌体比对照瓶粗大、染色质深、染色颗粒明显,以R8μg/ml瓶最为典型。 结论 依R菌在含R(6～24μg/ml)环境中生长旺盛,在无R环境中生长不良。