干血斑样本用于人类免疫缺陷病毒1型前病毒基因诊断的研究

目的研究干血斑（DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染前病毒DNA基因诊断的可行性。方法采集59例静脉吸毒HIV-1感染者和22名HIV-1阴性健康人EDTA抗凝静脉全血5ml，保存全血1ml，另用50μl制备干血斑样本后，分离血浆。QIAamp Blood Mini试剂盒和10％Chelex 100树脂分别提取全血和干血斑中细胞DNA。Roche Cobas Amplicor逆转录聚合酶链反应检测HIV-1感染者血浆病毒载量。HIV-1Env基因Gp41区，gag基因，pol基因分别用2对外侧和内侧引物，按照套式PCR方法，进行扩增。以HIV-1任何两个基因区扩增结果组合判断HIV-1感染。结果在重复2～3次的前提下，59份DBS样本HIV-1感染基因诊断敏感度93％（95％可信区间89％～97％），34份全血样本94％（95％可信区间89％～98％）。疋。检验显示，两种样本用于HIV-1基因诊断时差异无统计学意义。22份两种阴性样本特异性均为100％（95％可信区间95．93％～100％）。8份血浆病毒载量（VL）〉4．0 Log的DBS样本用于基因诊断的可重复性和HIV-1感染样本检出率优于5份VL〈4．0 Log样本。18对全血和DBS样本HIV-1基因诊断一致性分析，符合率94％，一份DBS样本HIV-1特异三个基因片段均未扩增。结论干血斑样本易采集，便于运输，保存条件低，费用低廉，用于HIV-1基因诊断时与全血样本检测结果无显著性差异，病毒载量〈4．0 Log的样本，为增加检出概率需要对样本重复检测。DBS样本HIV-1基因诊断方法适合于无条件立即处理血样本的偏远地区或采样困难的感染者的诊断，及HIV-1母婴垂直传播研究中婴幼儿感染的早期诊断。     

HIV集合核酸检测在男男性行为人群中的应用评价

目的 评估集合核酸检测方法在男男性行为人群(MSM)中的应用,探索适合该人群的HIV早期感染检测策略及应用该方法估算新发感染率的可行性.方法 本研究共采集4 856份2008年4月至2009 年9月我国黑龙江省(4 156份样品)和北京市(700份样品)MSM人群的样品.分别经三代ELISA、四代ELISA和WB检测后,HIV阴性样品进行集合核酸检测.样品集合采用三级集合策略.并计算和比较"三代ELISA检测+WB"、"四代ELISA检测+WB"、"三代ELISA检测+WB+集合核酸检测"和"四代ELISA检测+WB+集合核酸检测"的HIV检测阳性率.4 156份黑龙江省MSM人群样品中符合条件的WB确认阳性样品纳入BED-捕获酶联试验 (BED-CEIA),并应用BED方法和集合核酸检测方法进行新发感染率估算.结果 4 856份样品中共有143份被判定为HIV阳性,其中经三代和四代ELISA检测为阳性的样品均为130份,窗口期感染样品13份.常规ELISA检测加核酸检测能最有效检测出MSM人群窗口期感染者;4种检测策略的HIV检测阳性率分别为:2.68%(95%CI 为2.22%～3.14%)、2.82%(95%CI 为2.35%～3.29%)、2.94%(95%CI 为2.46%～3.42%)和2.94%(95%CI 为2.46%～3.42%),差异无统计学意义(χ2=0.854 3,P=0.836 4).4 156份黑龙江省样品中有88份纳入BED检测,41份样品被判为新近感染.应用BED检测方法和集合核酸检测方法估算的HIV发病率分别为2.36%(95%CI 为1.63%～3.08%)和2.92%(95%CI 为1.01%～4.83%).结论 HIV集合核酸检测技术能有效地筛查出窗口期感染者,可用于我国MSM人群窗口期检测.

Abstract：

Objective To evaluate the application of pooling HIV nucleic acid amplification testing (NAAT) among men who had sex with men (MSM) population, and to investigate suitable HIV screening strategy and the feasibility of calculation of HIV incidence using pooling NAAT among MSM population in China.Methods Four thousand eight hundred and fifty-six samples were collected from MSM population from April 2008 to September 2009 among with 4 156 were in Heilongjiang province and 700 were in Beijing in China. After standard testing with an HIV ELISA and WB confirmation testing, HIV antibody-negative samples were pooled and screened for HIV using NAAT.A three-stage pooling strategy was adopted.The HIV positive rate estimated by the four HIV screening strategies was calculated.In addition, 4 156 HIV positive specimens from Heilongjiang province were screened with the BED capture enzyme immunoassay (BED-CEIA).The HIV-1 incidences were estimated by BED-CEIA assay and pooling NAAT individually.ResultsOne hundred and forty-three of 4 856 subjects were HIV infected.130 were 3rd and 4th generation ELISA positive; 13 were antibody-negative but acutely HIV infected.According to the evaluation of four HIV screening strategies, routine HIV screening test together with pooling NAAT was more effective than other strategies for screening out window period generation ELISA+WB+pooling NAAT' were 2.68%(95% confidence interval CI=2.22%-3.14%), 2.82%(95%CI=2.35%-3.29%), 2.94%(95%CI=2.46%-3.42%) and 2.94%(95%CI=2.46%-3.42%), respectively.The differences were not significant (χ2=0.854 3, P=0.836 4).Of the 88 HIV positive samples from Heilongjiang province, 44 participants were tested as recent HIV infections by BED-CEIA assay. The estimated HIV-1 incidence was 2.36% (95%CI=1.63%-3.08%) and 2.92% (95%CI=1.01%-4.83%) based on BED-CEIA assay and pooling NAAT,respectively.Conclusions Pooling NAAT is a effective screening test in HIV negative population to detect window period infection among MSM population in China.     

快速检测、抗原-抗体联合酶联检测和集合核酸检测在MSM人群HIV-1检测中的应用研究

目的比较快速检测(胶体硒)和抗原-抗体联合酶联检测(4代酶联检测)以及集合核酸检测对男男同性恋人群(MSM)HIV急性感染的检验效能。方法结合该市2008年男男同性恋人群HIV感染专项调查工作,应用快速检测、4代酶联检测对接受调查的2 165例MSM进行HIV抗体初筛,对结果阴性者进行集合核酸检测,直至找到急性期感染者;对不同方法的检测成本进行估算,比较发现1例感染者的性价比。结果快速检测和4代酶联检测应用于MSM人群HIV筛查时,分别存在7.6%和2.9%的漏检率。本次调查使用集合核酸检测共发现10例急性期感染者。使用快速检测、4代酶联检测发现1例感染者的成本分别为48.8、50.5元,使用集合核酸检测发现1例急性期感染者的成本为7 380.2元。结论 4代酶联检测与快速检测成本接近,但前者功效更高,应该成为目前针对MSM人群HIV检测策略的组成部分,集合核酸检测应成为必要的补充,在该市MSM人群中使用上述方法的成本低于国外同类报道。     

HIV-1病毒载量检测常用技术及研究进展

病毒载量检测是HIV-1感染后需要长期观察的重要指标,在基础研究、早期感染的诊断、药物治疗学研究和流行病学监测方面都有特殊的意义。目前普遍使用的HIV病毒载量检测主要是测定血浆中病毒RNA的量,采用的方法包括荧光定量PCR技术、核酸等温扩增技术以及分支DNA杂交技术等。检测的样本包括血清、分泌物及全血制备的干血斑等多种类型,检测的靶点也会涉及到细胞基因组中整合的病毒DNA的应用。反转录酶法检测技术和其他等温扩增技术等许多技术已用于实验检测,一些交叉学科技术正进行着实验性探索。我国已有HIV-1病毒载量检测实验室140余家,3种经典的检测技术均有涉及。各种技术特点不同,但在病毒载量检测工作中均发挥巨大的作用。     

1996～1998年中国流行的E亚型艾滋病病毒1型毒株的分子流行病学研究

目的通过对1996～1998年采集的艾滋病病毒1型(HIV-1)毒株样本的env基因的序列分析,阐明在中国流行的E亚型HIV-1毒株的特点、来源和传播方式。为中国E亚型HIV-1疫苗的研制和应用提供基础资料。方法 从HIV感染者淋巴细胞(PBMC)中提取前病毒DNA.使用嵌套式聚合酶链反应(PCR)方法扩增HIV-1的env基因的C2V5区。PCR产物不经克隆直接测序并使用GCG软件包进行序列分析。结果样品采自1996～1998年中国29个省(自治区,直辖市),总共发现37个E亚型HIV-1感染者。他们中大部分是通过性途径感染(23人,占62.2％);部分在静脉吸毒人群中发现(10人,占27.0％);少数是在职业献血员中发现(4人,占10.8％)。经C2-V3区序列分析发现,大部分中国E亚型HIV-1毒株与泰国株很相近,而与非洲株相差很大。而来自广西壮族自治区的毒株与越南吸毒人群中的流行株U48720相一致;系统树分析结果发现,中国的E亚型HIV-1株与泰国(CM240X、H93TH966)、越南(U48720)的代表株聚在一起。结论 中国E亚型HIV-1毒株目前仅在东南沿海地区流行,涉及静脉吸毒、输供血和性乱等各种人群,通过env区的序列分析发现其主要来源于泰国,部分来源于与中国接壤的越南。     

Nuclisens EasyQ HIV-1和COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITORTM Test检测集合在HIV-1“窗口期”诊断的比较应用

目的将Nuclisens EasyQ HIV-1方法与COBAS AMPLICOR HIV-1MONITORTM Test方法检测集合的结果进行比较,并将集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法应用于艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)"窗口期"的检测。方法采用50:1、10:1二级集合HIV RNA COBAS和EasyQ方法进行检测。结果 (1)两种方法在54份定值血清和质控血浆的阳性检出率均为100%,方法的一致性为94.44%,两方法之间具有显著相关性,相关系数为r=0.855。(2)检测感染者配偶、静脉吸毒者(IDU)及男男性行为人群(MSM)样本集合2 426人份,两种方法检测结果一致,发现3例"窗口期"感染者。结论集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法具有很好的实验性能,可应用于HIV高危人群的"窗口期"检测。     

不同人类免疫缺陷病毒2型检测方法的比较研究

目的通过随访调查16例人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）可疑感染者，初步评价HIV一2的几种检测方法。方法从贵州省采集既往经HIV-1／2免疫印迹（WB）试验检测出现HIV-2指示带的16份受检者的全血样品，进行HIV-2抗体和核酸检测。血浆中的抗体用HIV-1／2ELISA初筛一复检，其中阳性样品再分别用HIV-1／2线性免疫试验（LIA）和HIV-2WB检测。外周血单核细胞（PBMC）中的前病毒DNA用HIV-2巢式PCR检测。结果16份血浆样品经HIV-1／2ELISA筛查均为HIV抗体阳性；用HIV-1／2 LIA检测，全部为HIV-1抗体阳性，15份为HIV-2抗体阴性、1份不确定；用HIV-2WB检测，有3份为HIV-2抗体阳性、13份不确定。由于这批样品的采样时间距首次检测至少1年以上，可以排除窗口期感染，上述检测结果不确定的受检者均可判为HIV-2抗体阴性。此外，用巢式PCR检测所有PBMC样品均为HIV一2核酸阴性。结论16例受检者全部为HIV-1而非HIV-2感染，HIV-1／2uA的抗体检测结果与HIV-2核酸检测结果基本相符，而HIV-2WB则产生了大量的不确定甚至假阳性结果。     

从未经培养的HIV-1阳性外周血克隆及系统树分析HIV-1中国株E亚型gp120基因

目的:研究中国HIV-1 E亚型代表株的主要结构基因及其功能。方法:选择3份根据HIV-1 的外膜基因(C2-V3)的序列分析判定为E亚型的阳性血样,采用克隆和系统树分析,通过套式PCR得到全长的gp120 基因片段,并插入到pFastBacl载体中,以双脱氧末端终止法测定全部的DNA 序列。结果:来自广东和广西的样品的gp120 基因归于E亚型,E亚型中国株内的遗传距离为2.56% ～5.87% ,与16 株国际标准株比较,遗传距离为3.60% ～27.98% 。所有克隆到的gp120 基因都具有完整的阅读框架,无大的缺失和插入。结论:HIV-1 E亚型进入中国的时间不长;克隆到的E亚型代表株的gp120 基因具有完整的结构和功能,适合用来构建E亚型的亚单位疫苗表达载体     

我国6个省19个城市男男性行为人群HIV-1 基因亚型及抗病毒治疗前耐药分析

目的分析我国6个省19个城市男男性行为人群(MSM)HIV-1基因亚型分布及抗病毒治疗前耐药情况。方法 2019年4-11月, 在河北、山东、江苏、浙江、福建和广东6个省19个城市收集未接受抗病毒治疗MSM HIV-1感染者的血浆样本574份, 提取RNA, 反转录后经巢式PCR扩增HIV-1pol 基因区片段。PCR 产物测序后进行序列分析, 构建系统进化树判定病毒基因亚型, 提交斯坦福耐药数据库分析耐药。结果有479份样本PCR扩增成功并获得核酸序列, 检出的HIV-1基因亚型有9种, 其中CRF01_AE(43.4%)和CRF07_BC(36.3%)所占比例较大, 随后依次为B(6.3%)、CRF55₀1B(5.9%)、CRF59₀1B(0.8%)、CRF65_cpx(0.8%)、CRF103₀1B(0.4%)、CRF67₀1B(0.4%)和CRF68₀1B(0.2%);另有26份(5.5%)样本的基因亚型为未知...     

NucliSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor1.5方法测定HIV-1病毒载量的比较研究

目的进行NuchSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor 1．5检测相同临床样品HIV-1病毒载量值之间的比较研究。方法收集临床样本82份，使用两种方法测定病毒载量，对病毒载量值进行统计分析。结果未测到核酸的和两种方法病毒载量对数值之差小于0．5的占88．9％；用△log10 VL〈0．5的56份样本统计两种方法的相关性，相关系数为0．956。结论NucliSens HIV-1 QT和Amphcor HIV-1 monitor 1．5两种方法测定的HIV病毒载量值有很好的相关性。