年龄对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响及其意义

目的:研究年龄对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外增殖活性的影响。方法:用贴壁法培养不同鼠龄的大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测骨髓MSCs表面抗原,通过测定成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)数及MTT法来检测骨髓MSCs的数量及增殖能力,并用ELISA法检测MSCs培养上清IL-6、干细胞因子(SCF)的水平。结果:随年龄的增加,大鼠骨髓MSCs的数量明显减少(P<0.05);2月龄组大鼠MSCs培养上清中IL-6、SCF含量明显高于其他组(均P<0.05),且高龄大鼠骨髓MSCs的增殖能力明显降低。结论:年龄增加可导致大鼠骨髓MSCs数量减少,体外增殖能力减退。     

阿托伐他汀联合间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的观察骨髓间充质干细胞与阿托伐他汀联合应用对大鼠急性心肌梗死心功能的疗效,并与单纯骨髓间充质干细胞移植作比较。方法①骨髓间充质干细胞的提取、培养、标记:提取鼠骨髓液,经离心后贴壁法培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,传代后,5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记备用。②建立急性心肌梗死模型。将建模成功的40只大鼠分成4组。③细胞移植:在梗死区边缘4个不同部位注射植入标记后的骨髓间充质干细胞。④药物喂养:采用灌胃的方法,喂养阿托伐他汀5 mg/(kg.d)。⑤术后4周,测定大鼠左室收缩压、舒张末压、压力变化最大上升与最大下降速率,检测细胞移植情况及新生血管密度。结果①细胞培养:刚提取的干细胞呈圆形,培养24 h后,细胞贴壁明显,培养液中含有杂质,换液传代后,细胞形态一致,呈梭形。②细胞表面抗原鉴定:传代后的骨髓间充质干细胞CD31、CD45表达阴性;而CD44、CD54表达阳性。③大鼠血流动力学检测:与对照组、阿托伐他汀组相比,间充质干细胞移植组与联合组左室收缩压、压力变化最大上升与最大下降速率均明显升高,舒张末压明显降低,联合组改善程度更明显;④大鼠心脏组织学检测:间充质干细胞移植组、联合组大鼠梗死心肌内可见5-溴脱...     

促红细胞生成素对大鼠急性心肌梗死后心脏保护作用的实验研究

目的:观察促红细胞生成素(EPO)对大鼠急性心肌梗死后的心肌保护作用。方法:采用结扎冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型。治疗组大鼠(n=20)采用腹腔注射方法给予EPO(3000U/kg),共3d(术前1d、当天、后1d),对照组大鼠(n=20)相同的时间点给予等量的生理盐水。术后7d各组随机选取5只大鼠,尾静脉抽血,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量。术后28d后经右颈总动脉插管检测血流动力学指标,心肌组织Ⅷ因子免疫组织化学染色和凋亡蛋白Bcl-2、Bax免疫组化染色。结果:相比对照组,治疗组大鼠血清TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05);EPO干预后,心肌组织Bcl-2蛋白表达上调,Bax表达下调(P<0.05),Bcl-2/Bax值显著增高;梗死周围区毛细血管密度明显增加(4.3±0.7)个/视野,(3.6±0.9)个/视野,P<0.05),血流动力学指标左室收缩压、左室压力最大上升速率明显升高,而左室舒张末压、左室压力最大下降速率明显降低(P<0.05)。结论:EPO通过促进毛细血管形成、抑制梗死周围区炎症反应及减少心肌细胞凋亡而达到改善急...     

促红细胞生成素对心肌梗死大鼠心肌细胞信号转导通路ERK1/2的影响

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞凋亡、血管再生及细胞信号转导通路细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的影响.方法 将20只SD大鼠随机分为实验组和对照组,结扎左冠状动脉前降支建立大鼠MI模型,实验组围手术期每天腹腔注射重组人促红细胞生成素5000 u/kg,共3 d,14 d再连续注射3 d,术后4周行血流动力学检查,随后处死大鼠,原位末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测缺血区毛细血管密度,免疫印记(Western blot)法检测ERK1/2及磷酸化-ERK1/2(p-ER-K1/2)蛋白表达水平.结果 与对照组相比,术后4周实验组血流动力学指标明显改善(P<0.05),心肌细胞凋亡指数显著降低[分别为(12.3%±1.8%)和(22.3%±2.7%),P<0.05],缺血区毛细血管密度明显增高[分别为(14.6±1.6)/视野和(6.7±0.4)/视野,P<0.05],ERK1/2的磷酸化水平显著增高[分别为(0.89±0.06)和(0.27±0.02),P<0.05].结论 EPO能显著减少心肌细胞凋亡,增加缺血区毛细血管密度,改善心功能,并影响细胞信号通路ERK1/2的活化水平.     

阿托伐他汀联合骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的 观察阿托伐他汀对骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的协同作用,并与单纯间充质干细胞移植作比较.方法 ① 间充质干细胞的提取、培养、标记.②建立急性心肌梗死模型.将大鼠分成4组,对照组:在梗死部位分4个点注射L-DMEM培养液,50 μl/点.阿托伐他汀组:梗死部位分4个点注射L-DMEM培养液,50 μl/点,阿托伐他汀5 mg/(kg*d) 溶入生理盐水2 ml, 灌喂4周.间充质干细胞组: 梗死部位分4点注射已标记的间充质干细胞,每点(50 μl) 2×106个.联合组:已标记的间充质干细胞注入梗死部位4个点, 每点(50 μl) 2×106个,阿托伐他汀5 mg/(kg*d),溶入生理盐水2 ml,灌喂4周.③术后4周, 测定大鼠左室收缩压、舒张末压、压力变化最大上升与最大下降速率, 检测细胞移植情况及新生血管密度.结果 ① 大鼠血流动力学检测: 与对照组、阿托伐他汀组相比, 间充质干细胞移植组与联合组左室收缩压、压力变化最大上升与最大下降速率均明显升高, 舒张末压明显降低, 联合组改善程度更明显.②大鼠心脏组织学检测:间充质干细胞移植组、联合组大鼠梗死心肌内可见5-溴脱氧尿嘧啶标记阳性细胞.③ 血管密度:联合组大鼠梗死心肌内血管密度高于其它组.结论阿托伐他汀联合应用骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性心肌梗死有协同作用, 其机制可能为阿托伐他汀通过促进血管新生提高间充质干细胞移植的存活率.