盐酸青藤碱通过C/EBPβ-COX-2通路抑制LPA诱导的肝癌细胞增殖

目的 观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用.方法 采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖.结果 用10μmol/L LPA处理Huh7细胞不同时间(0～6 h)后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性升高;分别用不同浓度的LPA(0～10μmol/L)处理Huh7细胞6 h后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达均呈浓度依赖性升高;SIN浓度依赖性抑制LPA所诱导的C/EBPβ、COX-2表达及细胞增殖.结论 LPA通过诱导C/EBPβ-COX-2通路表达促进人肝癌Huh7细胞增殖,而SIN能够通过下调C/EBPβ-COX-2表达抑制LPA所诱导的细胞增殖.     

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P＜0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P＜0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P＜0.05)。结论Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。     

小核糖体核蛋白B对肝癌细胞增殖与转移的调控作用

目的研究小核糖体核蛋白B(SNRPB)在肝癌组织及细胞中的表达情况,以及SNRPB对肝癌细胞增殖与转移的作用。方法通过生物信息数据库starBase v3.0和GEPIA分析SNRPB在肝癌组织和正常肝脏组织中的表达,并进行肝癌患者预后生存分析;qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)分析SNRPB mRNA和蛋白在肝癌细胞系中的表达;利用RNA干扰技术(siRNA)下调SNRPB蛋白的表达,通过MTT实验观察其对肝癌细胞增殖的作用,Transwell侵袭迁移实验检测下调SNRI>B后肝癌细胞转移能力的变化;利用Western blot技术检测下调SNRPB表达后肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)标志物的改变。数据两组间比较采用〖检验,多组间比较采用方差分析。结果SNRPB在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织,且其表达水平并与肝癌患者预后相关。与永生化肝细胞LO:相比,SNRPB在肝癌细胞系中的表达显著升高(P值均<0.01)。siRNA-SNRPB显著抑制肝癌细胞内SNRPB mRNA和蛋白表达。MTT结果显示SNRPB敲低组的吸光度值较阴性对照组降低,其中转染96 h的差值最显著(P值均<0.01)。Transwell实验结果显示,与阴性对照组相比,SNRPB敲低组肝癌细胞的侵袭(MHCC-97H:121.27±8.12对比46.38±7.54,Huh7:126.50±6.98对比41.10±8.01)和迁移(MHCC-97H:125.20±4.77对比43.18±7.32;Huh7:132.22±8.21对比38.00±6.78)能力显著降低(P值均<0.01)。Western blot显示下调SNRPB后上皮表型标志物E-钙黏蛋白表达水平下降,间质表型标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平上升,表明下调SNRPB抑制肝癌细胞EMT。结论SNRPB在肝癌组织及细胞中表达显著升高,并且参与调控肝癌细胞的增殖与转移及EMT。     

LPS通过TLR4/MyD88/NF-κB途径促进人肝癌细胞增殖及转移能力

目的研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人肝癌细胞HepG2增殖、粘附、侵袭、迁移能力的影响,并阐明相关机制。方法 (1)细胞增殖及粘附能力采用MTT法检测;(2)细胞侵袭和迁移能力采用Transwell小室模型检测;(3) Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor,MyD88)及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白和mRNA表达水平分别采用Western blot和RT-PCR测定。结果 (1) LPS(浓度分别为10、100、1 000 ng/m L)刺激Hep G224、48、72 h,与对照组相比,细胞增殖能力均增高,差异有统计学意义(均P 0. 05),且呈浓度和时间依赖性。(2)经100 ng/m L的LPS干预HepG2 48 h后,干预组细胞粘附能力明显高于对照组(P 0. 01);侵袭和迁移实验中穿膜细胞数比较,干预组均显著多于对照组(P 0. 01)。(3) LPS可明显上调TLR4、MyD88及NF-κB蛋白及mRNA表达水平(P 0. 05)。结论 LPS可能通过TLR4/MyD88/NF-κB途径促进人肝癌细胞增殖及转移能力。     

《中国循证医学杂志》发表的干预类系统评价／Meta分析报告质量评价

目的评价《中国循证医学杂志》公开发表的干预类系统评价／Meta分析的报告质量,并分析其影响因素。方法对《中国循证医学杂志》从创刊至2011年底所发表的干预类系统评价／Meta分析进行检索。采用PRISMA清单评价和分析所有纳入文献,按照PRISMA清单各条目的符合程度由高到低分别评为“1分”、“0．5分”、“0分”。将所获数据录入Excle软件,并使用Meta—Analyst软件进行统计分析。结果共纳入干预类系统评价／Meta分析379篇,发表数量总体呈逐年上升之势。PRISMA清单平均评分19．97±3．15分（8．5-26分）。其中25篇（6．60％）评分为21—27分,认为报告相对完全;226篇（59．63％）评分为15～21分,认为报告存在缺陷;128篇（33．77％）评分为15分以下,认为有严重的信息缺失。分层分析结果显示：PRISMA的发布、有基金资助可以提高系统评价／Meta分析的报告质量（P〈0．05）;作者数≥3人、作者单位性质为大学和单位数≥2个有改善系统评价／Meta分析报告质量的趋势,但影响不具统计学意义（P〉0．05）。结论《中国循证医学杂志》所发表的干预类系统评价／Meta分析的报告质量有待提高,影响报告质量的主要因素有方案和注册、研究间偏倚、其他分析以及资金支持等,应加以重视。合理利用PRISMA将有助于提升系统评价／Meta分析的报告质量。     

小核核糖核蛋白多肽A对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制

目的：探究小核核糖核蛋白多肽A（SNRPA）在肝细胞癌（HCC）组织和细胞中的表达及其调控HCC 细胞HepG2 和Hep3B恶性生物学行为的作用及其机制。方法: 数据库分析SNRPA在泛癌组织中的表达及其与病理分期、HCC 患者预后的相关性。常规培养HepG2 和Hep3B 细胞，将si-NC ，si-SNRPA#1、si-SNRPA#2转染HepG2 和Hep3B 细胞，实验分为si-NC 组、 si-SNRPA#1 组和si-SNRPA#2 组；将SNRPA-vector 和SNRPA-oe 载体转染LO2 细胞，分为SNRPA-vector 组和SNRPA-oe 组。 qPCR法检测正常肝细胞和肝癌细胞以及转染各组HepG2和Hep3B细胞中SNRPA mRNA的表达，MTT法、Transwell 法和WB法分别检测转染后各组HepG2 和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关蛋白表达的变化。结果: 数据库分析显示，SNRPA mRNA在多数肿瘤组织中均呈高表达（均P<0.001）且与病理分期有关联（P<0.05或P<0.01）。SNRPA在HCC组织和细胞中均呈高表达（P<0.05 或P<0.01），且与HCC患者的预后有关联（P<0.01）。敲减SNRPA表达明显抑制HepG2 和Hep3B细胞增殖（P<0.05或P<0.01）而过表达SNRPA则能促进LO2细胞增殖（P<0.01），敲减SNRPA表达明显抑制HepG2和Hep3B细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01），明显促进E-cadherin 的表达上调（P<0.01），而抑制N-cadherin、vimentin 的表达（P<0.01）。结论: SNRPA在HCC组织及细胞中呈明显高表达，其可能通过调控上皮间质转化（EMT）进程进而促进HepG2和Hep3B细胞的增殖、迁移和侵袭。     

外泌体介导miR-106a转运对胃癌细胞腹膜种植转移的影响

目的探讨肿瘤源性外泌体(tumor-derived exosomes, TDEs)介导miR-106a转运对胃癌细胞腹膜种植的影响及可能机制。方法选择人低分化胃癌细胞系AGS进行培养,从细胞培养上清液中提取外泌体,透射电镜及蛋白质印迹法对外泌体进行鉴定;采用Real-time PCR检测外泌体与细胞内miR-106a的表达差异;将外泌体标记荧光染料PKH26与人腹膜间皮细胞HMrSV5共培养,采用激光共聚焦显微镜观察外泌体的吞噬;增设阴性对照组,划痕实验检测外泌体介导下miR-106a转运对间皮细胞迁移能力的影响,Real-time PCR和Western blot检测miR-106a靶基因Smad7及间质标志物α-SMA的表达。结果透射电镜显示AGS细胞培养上清液中所提取的微囊泡直径30～150 nm,Western blot显示外泌体标记蛋白CD9、CD81均为阳性。Real-time PCR结果显示外泌体miR-106a表达量显著高于细胞内(P0.05)。携带PKH26红色荧光信号的外泌体可被间皮细胞摄取。划痕实验结果显示外泌体处理组间皮细胞迁移能力明显增强(P0.001),Real-time PCR和Western blot检测结果显示靶基因Smad7表达下调,α-SMA表达上调(P0.001)。结论胃癌细胞来源的外泌体可促进腹膜间皮细胞迁移,参与转移前微环境形成,其机制可能与外泌体介导miR-106a转运,转录后抑制Smad7表达并诱导间质转化相关。     

lncRNA SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌细胞侵袭及迁移中的作用

目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）SNHG5在缺氧诱导肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞侵袭及迁移中的作用。方法：收集2017年1月至2018年6月西安交通大学第一附属医院手术切除的20例HCC患者的癌与癌旁组织标本，以及人HCC细胞系HepG2、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh7和永生化人肝细胞LO2。利用生物信息学方法分析缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）与SNHG5的结合位点，将pCMV-HIF-1α、shRNA-SNHG5（sh-SNHG5）质粒转染进HCC细胞，用qPCR法检测HCC组织和缺氧条件下HCC细胞中SNHG5的表达水平，用Western botting检测HCC细胞中HIF-1α蛋白的表达水平，用Transwell小室法检测沉默SNHG5后常氧和缺氧条件下对HCC细胞侵袭及迁移能力的影响。结果：分别与癌旁组织和LO2细胞比较，HCC组织和各细胞系中SNHG5表达水平显著上调（均P<0.01）。缺氧可上调HCC细胞中SNHG5的表达水平，其机制可能与缺氧活化HIF-1α 与 SNHG5 启动子结合从而促进其转录有关 ；缺氧能够增强 HepG2和 MHCC-97L 细胞的侵袭及迁移能力（均P<0.01），沉默SNHG5表达能够显著抑制缺氧条件下HepG2和MHCC-97L细胞的侵袭及迁移能力（均 P<0.01）。结论：SNHG5在HCC组织及细胞系中高表达，并在缺氧诱导的HCC细胞侵袭及迁移中发挥重要作用。     

我国“循证”冠名杂志刊载干预类系统评价/Meta分析的统计学现状调查

目的：调查我国“循证”冠名杂志发表的干预类系统评价/Meta 分析统计学软件和统计学分析方法现状。方法以《中国循证医学杂志》、《循证医学》、《中国循证儿科杂志》、《中国循证心血管医学杂志》4本杂志官方网站为数据来源,根据纳入排除标准,纳入干预类的系统评价/Meta分析/荟萃分析/系统综述,检索时间截止2011年12月31日。2名研究者独立提取资料,并输入Excel软件分析。结果共纳入干预类系统评价/Meta分析487篇,RevMan为最常用的统计学软件（445篇,91．38％）,其次为Stata（13篇,2．67％）。92．81％（452篇）系统评价/Meta 分析使用1种统计软件,1．64％（8篇）使用2种统计软件,5．54％（27篇）未报告使用的统计软件。统计学分析方法的描述和执行情况存在结果部分和方法学部分的报告率不等,尤其体现在敏感性分析、亚组分析和发表偏倚的评价,且其本身的报告比例并不高。结论调查显示RevMan是目前我国干预类系统评价/Meta分析的首选统计软件;正确地执行敏感性分析、亚组分析及评估发表偏倚可有效地避免各种偏倚。