葡萄球菌属红霉素诱导克林霉素的耐药性检测

目的：检测葡萄球菌临床分离株红霉素诱导克林霉素耐药的发生率。方法收集我院2011年6月-12月临床标本分离的179株葡萄球菌,采用M-H琼脂稀释法进行药敏试验,检测葡萄球菌属红霉素诱导克林霉素的耐药性。结果对红霉素和克林霉素同时敏感（26.8%）,同时耐药（26.8%）,红霉素耐药克林霉素敏感（34.6%）,红霉素敏感克林霉素耐药（11.7%）。其中D试验阳性（58.1%）,金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌D试验阳性率分别为52.2%和61.5%。结论红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株,应加强红霉素诱导克林霉素耐药性检测,帮助临床正确选用大环内酯类、林可酰胺类、链阳霉素B类（MLSB）抗菌药物。     

螺旋体脂蛋白免疫调节机制研究进展

梅毒、莱姆病和细螺旋体病是威胁人类健康的主要螺旋体病。然而,对此类疾病的免疫机制尚未充分阐明。螺旋体通过各种结构,例如脂多糖(LPS)、表面脂蛋白和糖脂与宿主相互作用。尽管螺旋体抗原如LPS和糖脂可能在其感染时有助于炎症反应,但梅毒螺旋体(Tp)和伯氏疏螺旋体(Bb)缺乏LPS。脂蛋白是表达于所有螺旋体的最丰富的蛋白,往往决定螺旋体与环境作用的方式。脂蛋白可促进炎症反应、调节固有免疫应答和适应性免疫应答,并有助于螺旋体粘附在宿主中或中肠上,或逃避免疫系统。然而,大多数螺旋体脂蛋白功能尚未明确。本文综述螺旋体脂蛋白在免疫逃逸和免疫激活方面的免疫调节作用,将有助于阐明螺旋体病的固有免疫致病机制,以及与螺旋体疾病疫苗发展和螺旋体病炎症反应有关的适应性免疫机制。     

微生物学检验开放性实践教学模式的实施

微生物学检验开放性实践教学模式实施后,可以增强学生的综合能力,增强教师的责任意识,加大实验室开放力度,是实验教学改革的成功尝试,值得进一步探索和推广。     

高职高专口腔专业病原生物学和免疫学教学改革的探索与实践

病原生物学和免疫学是联系基础医学与临床医学的纽带，根据本学科内容繁杂、抽象、理论多的特点，在教学中对教学内容、教学方法等进行改革，进一步提高教学质量。     

乳铁蛋白负向调控TLR2激动剂诱导的人肺上皮细胞细胞因子分泌

目的观察乳铁蛋白对Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3CSK4刺激人肺上皮细胞分泌促炎细胞因子的影响,并探索其潜在的机制。方法体外培养人肺上皮细胞系NCI-H292,采用100 ng/ml Pam3CK4联合100、200和400μg/ml乳铁蛋白孵育细胞。ELISA检测乳铁蛋白处理前后培养上清TNF-α和IL-8分泌的变化;实时定量PCR和ELISA检测短腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)蛋白和m RNA表达的影响。提取细胞核蛋白,ELISA测定乳铁蛋白处理前后NF-κB活性的变化,采用Western blot检测IκB的表达;并用siRNA沉默NCI-H292细胞SPLUNC1,观察其对TNF-α和IL-8分泌的影响。结果 100、200和400μg/ml乳铁蛋白预处理肺上皮细胞后,可下调Pam3CK4诱导分泌TNF-α和IL-8。实时定量PCR结果显示,100、200和400μg/ml乳铁蛋白处理后,SPLUNC1 mRNA水平明显增高,并呈一定的剂量依赖性,ELISA也得到了类似的结果。采用转录和翻译抑制剂放线菌素D(ActD)和放线菌酮(CHX)预处理,可显著降低乳铁蛋白诱导SPLUNC1的表达。此外,乳铁蛋白处理可抑制Pam3CK4激活NF-κB,主要表现为NF-κB的DNA结合活性降低、IκB降解减少。siRNA沉默SPLUNC1表达后,可明显削弱乳铁蛋白对TNF-α和IL-8的抑制作用。结论乳铁蛋白对Pam3CK4诱导的细胞因子分泌具有抑制作用,其机制与上调SPLUNC1表达、抑制NF-κB的活性有关。     

IL-2 与IL-33 佐剂增强铜绿假单胞菌外膜囊泡的免疫保护效果

目的:探究IL-2、IL-33佐剂对铜绿假单胞菌(Pa)外膜囊泡(OMVs)抗感染免疫保护作用的影响。方法:体外培养Pa提取OMVs后加入IL-2、IL-33佐剂,并于0、2、4周皮下注射免疫雌性BALB/c小鼠,每组18只。末次免疫2周后,ELISA检测各组小鼠血清IgG、IgA及IgG亚类水平以及小鼠脾细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6等细胞因子水平,同时检测CD4、CD8蛋白水平;CCK-8法评估IL-2、IL-33分子佐剂对小鼠脾细胞增殖情况的影响;末次免疫2周后Pa滴鼻感染小鼠,感染后10 d统计各组小鼠死亡率,检测肺组织中菌体载量,并通过HE染色评估肺组织病理损伤情况。结果:ELISA结果显示,OMVs-IL-2、OMVs-IL-33组小鼠血清中IgG、IgA以及IgG亚类水平均显著高于各对照组(P0.05),且其中各实验组IgG2a/IgG1均大于1;IL-2、IL-33均能够显著促进OMVs诱导小鼠脾细胞分泌IFN-γ、IL-2及IL-12(P0.05),但对细胞因子IL-4、IL-6分泌水平影响无统计学意义(P0.05);此外,OMVs-IL-2、OMVs-IL-33免疫小鼠脾细胞上清中CD4、CD8蛋白水平均显著高于对照组(P0.05);CCK-8结果显示,OMVs-IL-2、OMVs-IL-33组的淋巴细胞增殖水平最为显著(P0.05);Pa感染后,OMVs-IL-2、OMVs-IL-33组小鼠的死亡率及肺组织菌体载量均显著低于各对照组(P0.05),且小鼠肺组织的炎症侵润程度均明显减轻。结论:IL-2、IL-33佐剂能够增强Pa-OMVs诱导的体液及细胞免疫应答水平,显著提高其抗感染保护作用,具有较大临床意义。     

梅毒螺旋体粘附素Tp0751重组菌影的构建与鉴定

目的 构建梅毒螺旋体(Tp)粘附素Tp0751的重组大肠埃希菌菌影(E.coli bacterial ghosts,EBG),为深入评价其在抗Tp感染中的潜在免疫保护作用奠定基础。方法将含有噬菌体PhiX174裂解基因E的质粒pHH43转化E.coli DH5α,42 ℃温控诱导使其形成EBG并计算裂解效率,用琼脂糖DNA电泳和透射电镜(TEM)鉴定EBG。构建含有裂解基因盒E-box、膜锚定序列E′-linker及Tp0751目的基因的原核双表达重组质粒pET28a-E′-Tp0751-E-box,28 ℃诱导重组E.coli BL21表达Tp0751并用Western Blot鉴定;42 ℃诱导形成重组EBG(rEBG),计算裂解效率并用DNA电泳和TEM鉴定。结果构建的EBG裂解率为98.13%,DNA电泳未观察到DNA条带,TEM显示绝大部分细菌都裂解成缺乏胞浆成分的细胞空壳并保持活菌基本形态。rEBG在28 ℃时高效表达重组Tp0751蛋白,且仅与梅毒患者血清特异性结合; 42 ℃下其rEBG裂解率为96.37%,电泳和TEM鉴定结果与EBG的相似。结论成功构建表达Tp粘附素Tp0751的rEGB,其所表达目的蛋白具有良好免疫反应性。