355株血浆凝固酶阴性葡萄球菌药敏试验

血浆凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的致病性已越来越受到人们的重视，由于CNS极易产生耐药性，因此对于由CNS引起的感染，如何合理地选用抗生素，特别是对于那些尚不能开展细菌培养及药物敏感试验的基层医务工作者带来较大的困难。为了寻求最佳抗菌方案，遂统计了邵阳医专微生物室自2000年1月～2003年1月记录完整的355株CNS的药物敏感试验结果，报告如下。     

微生物学检验开放性实践教学模式的实施

微生物学检验开放性实践教学模式实施后,可以增强学生的综合能力,增强教师的责任意识,加大实验室开放力度,是实验教学改革的成功尝试,值得进一步探索和推广。     

分子佐剂IL-17与IL-2对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI免疫效果的影响

目的探讨分子佐剂IL-17、IL-2对铜绿假单胞菌(Pa)外膜蛋白OprI免疫效果的影响。方法分别以IL-17、IL-2作为分子佐剂用Pa外膜蛋白OprI于第0、2、4周免疫雌性C57BL/6小鼠,同时设立单独的佐剂与蛋白对照组。末次免疫2周后,ELISA检测各组小鼠血清IgG、IgA以及IgG亚类水平;ELISA法检测小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17以及Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平;MTT法检测IL-17、IL-2分子佐剂对小鼠脾细胞增殖情况的影响,并以ConA作为阳性对照;末次免疫2周后Pa鼻内感染小鼠,感染后10 d计算各组小鼠死亡率并取小鼠肺组织检测菌体载量。结果 ELISA结果显示,OprI-IL-17、OprI-IL-2组小鼠血清中IgG、Ig A以及IgG亚类水平均显著高于各对照组(P0.05),且其中各实验组IgG2a/IgG1的比值均大于1;IL-17、IL-2佐剂能够显著提高小鼠脾细胞上清中Th1/Th17型细胞因子INF-γ、IL-2、IL-17水平(P0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-6水平则无显著差异(P0.05);此外,OprI-IL-17、OprI-IL-2组的淋巴细胞增殖最为显著(P0.05);相较于各对照组,OprI-IL-17、OprI-IL-2组能够显著降低小鼠肺组织菌体载量以及小鼠死亡率(P0.05),保护效果显著提高。结论 IL-17、IL-2佐剂均能有效增强Pa外膜蛋白OprI的体液、细胞免疫水平以及抗感染保护作用。     

铜绿假单胞菌重组抗原外膜脂蛋白A(OmlA)诱导小鼠免疫保护及其机制初探

目的研究铜绿假单胞菌(Pa)重组外膜脂蛋白A(OmlA)抗原的免疫功能,并初步探讨不同佐剂对其免疫效果的影响。方法将OmlA抗原分别与佐剂IL-17和氢氧化铝进行混合吸附。然后将OmlA抗原以及吸附好佐剂的OmlA抗原分别在0、2、4周时注射到4～5周龄C57BL/6小鼠的腹腔进行免疫,同时设立IL-17、氢氧化铝和PBS免疫组为对照。检测免疫小鼠血清中IgA、IgM、IgG、IgG1以及IgG2a的水平。采用ELISA检测免疫小鼠脾组织上清中Th1/Th17型细胞因子IFN-γ、IL-2以及Th2型细胞因子IL-4、IL-6的含量。采用MTT法检测不同组小鼠脾细胞增殖的情况。最后一次免疫2周后使用致死量Pa鼻内感染小鼠,10 d后检测小鼠肺组织中Pa载量和统计小鼠死亡数量并计算各组小鼠的死亡率。结果 ELISA结果证明OmlA、OmlA-AH和OmlA-IL-17组免疫小鼠血清中IgA、IgM、IgG以及IgG亚类(IgG1和IgG2a)的含量明显比各对照组高。OmlA-AH组中IgG2a/IgG1的比值小于1,且AH能提高脾组织中IL-4和IL-6的量,但IFN-γ和IL-2水平不变。OmlA-IL-17组中IgG2a/IgG1的比值大于1,且IL-17能提高小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-2的量,但不影响IL-4、IL-6的表达。AH和IL-17能增强OlmA刺激导致的淋巴细胞增值。与对照组相比OmlA、OmlA-AH和OmlA-IL-17组能够减少小鼠肺组织中Pa载量和小鼠死亡率。结论 Pa OmlA蛋白具有良好的免疫保护作用,且AH和IL-17能够增强其免疫效果。     

寄生虫学及检验教学改革初探

以培养学生实际应用能力为宗旨,探索改革寄生虫学及检验理论教学与实践教学的方法。     

邵阳地区耐氨基糖苷类抗生素KPN菌AAC基因分布

目的 调查分析湖南邵阳地区医院2012～2013年临床分离肺克雷伯菌（KPN）的药物敏感性,探讨氨基糖苷乙酰转移酶基因（AAC）在耐氨基糖苷类药KPN菌株中的携带情况.方法 收集邵阳地区新邵县人民医院,洞口县人民医院,邵阳医专附属医院三家医院2012年8月～2013年12月临床连续分离非重复KPN 259株,梅里埃药敏条和KB纸片法检测其药物敏感性.采用PCR法对氨基糖苷类修饰酶（AMEs） AAC（3）-Ⅰ,AAC（6＇）-Ⅰb,AAC（3＂）-Ⅰ,AAC（3＇）Ⅵa基因进行检测.基因测序确定其基因型,探讨耐药基因与耐药表型的关系.结果 259株KPN中213株对氨基糖苷类抗生素耐药,其中对庆大霉素、妥布霉素、奈替米星和阿米卡星的耐药率分别为83.1％,68.5％,56.3％和44.1％.213耐药菌株中12株携带AAC（3）-Ⅰ基因,阳性率为5.6％;28株携带AAC（3＇）Ⅵa基因,阳性率为13.1％;103株携带AAC（6＇）-Ⅰb基因,阳性率48.4％;30株携带AAC（3＂）-Ⅰ基因,阳性率为14.1％;5株同时携带AAC（3）-Ⅰ和AAC（6＇）-Ⅰb基因.结论 湖南邵阳地区临床分离肺炎克雷伯菌氨基糖苷类抗生素耐药率高,其耐药基因以AAC（6＇）-Ⅰb基因为主.     

幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18 免疫优势表位的预测与鉴定

目的:分析预测幽门螺杆菌(Hp)外膜蛋白Omp18 的免疫优势表位,并进一步验证确定其免疫优势片段的免疫原性。方法:通过生物信息学软件DNAStar 分析预测幽门螺杆菌外膜蛋白Omp18 的潜在优势表位,并由北京赛百盛基因技术有限公司合成相应的优势片段;片段通过口服免疫的方式免疫接种雌性BALB/ c 小鼠,每周1 次共免疫4 次。末次免疫10 d后处死小鼠,取血清检测IgG、IgA 水平,取肠道灌洗液检测sIgA 水平;取小鼠脾细胞ELISA 法检测细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6 水平,并通过MTT 比色法检测脾细胞增殖情况;末次免疫10 d 后Hp 标准株攻击小鼠2 次,4 周后处死小鼠,取胃组织进行快速尿素酶实验,并计算每组的感染率。结果:ELISA 法检测各片段免疫小鼠血清IgG、IgA 以及肠道sIgA 水平均高于对照组,且差异有显著统计学意义(P<0.05);各免疫组脾细胞上清INF-γ、IL-2 水平均显著高于对照组(P<0.05),而IL-4、IL-6水平较对照组则差异无显著统计学意义(P>0.05);MTT 比色法结果显示各片段刺激后小鼠淋巴细胞均有显著增殖(P<0.05);快速尿素酶实验结果提示各片段免疫后均能显著减少小鼠胃组织中Hp 的感染(P<0.05)。结论:通过生物信息学软件分析预测的外膜蛋白Omp18 优势片段均具有较好的免疫原性,且对Hp 感染有一定的保护作用。     

不同铝佐剂明显增强布鲁菌外膜蛋白31(Omp31)的免疫接种效果

目的探讨磷酸铝(AP)和氢氧化铝(AH)佐剂对布鲁菌外膜蛋白31(Omp31)诱导产生体液、细胞免疫反应以及免疫保护作用的影响。方法制备AP佐剂以及AH佐剂,并与纯化的布鲁菌Omp31进行混合吸附,检测吸附率;将AP、AH吸附完成的Omp31蛋白分别于0、2、4周腹腔注射免疫BLAB/c小鼠,同时设立未吸附佐剂的Omp31蛋白免疫组与PBS免疫组作为对照。分别于0、2、4、6周ELISA检测小鼠血清Ig G、Ig G1、Ig G2a水平以及生殖道分泌物分泌型Ig A(s Ig A)水平;于第6周取小鼠脾细胞体外培养,Omp31刺激细胞48 h后,ELISA检测培养细胞上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)水平,CCK-8法检测小鼠淋巴细胞增殖情况;小鼠于第6周用布鲁菌强毒株进行攻击,并分别于攻击后1周、2周检测小鼠脾脏组织菌体含量。结果 AP、AH佐剂对于不同浓度Omp31吸附率分别可达到70%与85%以上;ELISA结果显示AP组与AH组诱导产生的血清Ig G、Ig G1、Ig G2a以及生殖道s Ig A水平均在末次免疫2周后到峰值,其中AH组高于AP组,且均显著高于对照组;CCK-8实验结果显示AH组诱导的淋巴细胞增殖显著高于AP组,且均高于对照组,AH组脾细胞上清中的IFN-γ水平显著高于AP组,而IL-10水平无显著差异;强毒株16M攻击后2周,AH组小鼠脾脏菌体载量显著低于AP组。结论 AP佐剂以及AH佐剂均能有效增强布鲁菌Omp31的免疫原性及其抗感染保护作用,且AH佐剂效果好于AP佐剂。