高亲合力抗双链DNA抗体对系统性红斑狼疮的诊断价值

目的探讨高亲合力抗双链DNA抗体（抗dsDNA抗体）在系统性红斑狼疮（SLE）病人中的分布情况以及与性别、年龄、狼疮肾炎等指标之间的关系。方法收集2017年8月至2018年4月广东省中医院抗dsDNA抗体阳性的血清标本共155例,其中SLE组116例,非SLE组39例,分别使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光法（IIF）同时测定血清样本的总抗dsDNA抗体和高亲合力抗dsDNA抗体水平;采用Kappa分析探讨不同检测方法间结果的一致性;Spearman相关系数分析高亲合力dsDNA抗体与性别、年龄等临床指标的相关性。结果在非SLE组中IIF法总抗dsDNA抗体（dsDNA-IIF）阴性,ELISA法总抗dsDNA抗体（dsDNA-ELISA）阳性的例数为15例,说明dsDNA-ELISA检测结果对SLE的特异性不高。dsDNA-IIF与dsDNA-ELISA的总体符合率为58.7%（91/155）,Kappa=0.172 < 0.4,两种方法的一致性较低（P < 0.01）;而dsDNA-IIF与高亲合力抗dsDNA抗体的总体符合率为61.9%（96/155）,Kappa=0.514,0.4 < Kappa < 7.5,两种方法的一致性一般（P < 0.01）。高亲合力抗dsDNA水平与dsDNA-IIF和dsDNA-ELISA水平呈正相关（P < 0.01）,与性别、年龄、是否是狼疮肾炎无相关性（P>0.05）;dsDNA-IIF和高亲合力抗dsDNA抗体联合诊断敏感率为90.5%（105/116）,特异性为100%（39/39）。结论dsDNA-IIF和高亲合力抗dsDNA抗体水平的联合检测更有助于对SLE的诊断。高亲合力抗dsDNA抗体与年龄、性别和是否为狼疮性肾炎无相关性。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测量血清未结合雌三醇的协作研究

目的用同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)候选参考方法进行实验室间血清未结合雌三醇(u E3)协作研究,通过该研究进一步确认方法的性能特征(正确度和精密度),并将该方法在国内参考实验室推广,推动u E3标准化进程。方法依据ISO/WD 15725-1和GB/T 6379标准,拟定我国血清u E3协作研究方案。协作研究分为两个阶段:初步试验和正式试验,共9家参考实验室参加。按要求收集5个浓度水平样品并进行均匀性评价,分发到9家参考实验室,要求每个样品每日重复测量5次,连续测量3 d。计算各实验室测量结果的偏移和精密度,用格拉布斯(Grubbs)检验和柯克伦(Cochran)检验识别离群值和离群实验室。根据合格实验室的结果计算靶值,并向离群实验室和偏出允许范围的实验室提供整改建议。结果样品均匀性评价:所有样品测量结果计算F值均小于F0.05(9,20)临界值,样品中u E3是均匀的。初步试验:Grubbs检验,1个实验室测量结果为离群值;Cochran检验,2个实验室检验结果为离群值。剔除离群值后计算靶值;2017E301为(22.08±0.24)nmol/L;2017E302为(33.46±1.67)nmol/L。2个实验室结果超出允许范围。正式试验:Grubbs检验,所有实验室测量结果均未检出离群值;Cochran检验,3个实验室数据出现离群值。剔除离群值后计算靶值,2017E303为(10.36±0.35)nmol/L,2017E304为(15.47±0.26)nmol/L,2017E305为(46.97±1.19)nmol/L;各实验室间测量结果不精密度分别为1.14%~2.21%、0.79%~1.93%、0.60%~2.09%,测量结果偏移分别为-6.18%~4.83%、-2.26%~2.39%、-4.19%~4.07%。结论通过组织开展协作研究,确认各参考实验室通过协作研究方案能够快速建立并运行u E3候选参考方法,除个别实验室外各实验室的检测性能满足预定要求(不精密度3.0%,偏移7.5%),进一步确认了该方法的性能和各实验室运行参考方法的能力。通过初步研究和正式研究对研究方案的各实验环节进行了验证和完善;推动了u E3项目参考方法在我国参考实验室的运行,为后续厂商试剂主校准品联合定值或标准物质研制搭建了平台,促进u E3项目的标准化。     

高效液相色谱串联质谱法测定血清非结合雌三醇的前处理研究

目的优化高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定血清游离雌三醇(uE3)的前处理方法。方法以活性炭吸附血清为研究基质,通过加入已知量的雌三醇(E3)标准品及E3-2-3-4-13 C3内标,在LC-20AD XR高效液相色谱系统和API 5500串联四级杆质谱仪上对E3检测的色谱条件、质谱条件及萃取条件等进行优化。结果色谱条件:选用菲罗门Knietex色谱柱(100.0mm×2.1mm,2.6μm);有机相为甲醇,水相为0.1mmol/L氟化铵水溶液,8min梯度洗脱。质谱条件:选用电喷雾(ESI)负离子模式和多反应监测(MRM)模式分析,选择质荷比(m/z)287→m/z 145作为E3的定量离子对,m/z 287→m/z 171作为定性监测离子对;选择m/z 290→m/z 148作为内标的定量离子对,m/z 290→m/z 174作为定性监测的离子对。萃取条件:萃取剂为正己烷/乙酸乙酯(50/50,v/v),样品与萃取剂的比例为1∶2,萃取率可达85.71%。结论 E3检测的色谱条件、质谱条件、萃取条件已得到全面优化,为后续建立LC-MS/MS测定人血中uE3的参考方法打下良好基础。     

新型冠状病毒核酸抗体表达模式与基础性疾病和实验室指标的相关性

目的分析新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019, COVID-19)核酸抗体表达模式与实验室检测指标及患者基础性疾病的相关性。方法收集2020年1月28日至3月3日在湖北省中西结合医院的95例COVID-19确诊患者, 按照核酸和抗体结果的不同表达模式进行分型分组(分组1～分组7), 分析比较各组患者一般资料、基础疾病病史和实验室检测结果。计量资料组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验, 百分率的比较采用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。结果抗体和核酸全阴性组(分组1)、抗体全阴性且核酸阳性组(分组2)血清白细胞介素6(interleukin 6, IL-6)在所有检测指标中异常率最高, 分别为62.5%(5/8)和100.0%(2/2);不同分期模式下, 抗体模式相同, 与核酸阴性组比较, 核酸阳性组CD4+ T淋巴细胞(CD4+ T)、CD8+ T淋巴细胞(CD8+ T)、IL-6、血清淀粉样蛋白A(SAA)、C反应蛋白(CRP)异常率和患者危重率明显升高。在所有分期模式中, SAA、CRP异常率无多大变化, 特异性不高。抗体...     

血小板计数参考方法的性能评价及临床应用

目的复现血小板计数的参考方法并应用于临床。方法根据国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的流式细胞术计数血小板的参考方法,在本实验室复现该参考方法;通过2家校准实验室赋值新鲜全血,对4台不同型号血液分析仪的血小板计数结果进行正确度验证,并对结果不满意的仪器进行校准。结果血小板计数参考方法检测高、中、低值标本PLT的不精密度(CV)分别为2.2%、2.0%、8.4%,PLT在21×109/L~794×109/L范围内线性良好(r2=0.998),标本在6 h内测定结果稳定,携带污染率为0.05%,正确度偏倚小于3%。正确度验证中,Mindray BC 6800、Sysmex XE-5000i和Sysmex XT 1800i血液分析仪细胞检测结果均在可接受限内,Sysmex XS 500i血液分析仪经校准后通过验证。结论复现了ICSH推荐的血小板计数参考方法,其性能符合要求;赋值新鲜全血用于临床血液分析仪的正确度验证具有可行性,且可用于仪器的校准。     

冰冻人血清α-淀粉酶催化活性浓度候选二级标准物质的研制

目的研制冰冻人血清α-淀粉酶催化活性浓度候选二级标准物质,作为量值传递的标准。方法参照JJF 1343—2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1644—2017《临床酶学标准物质的研制》要求进行均匀性、稳定性、互换性评价;联合6家通过中国合格评定国家认可委员会(CNAS)认可的校准实验室对标准物质进行定值,评定其均匀性、稳定性和定值引入的不确定度,计算扩展不确定度。结果标准物质均匀性和稳定性均良好,互通性评价结果显示,4个常规检测系统的测量值均位于95%可信区间内。定值结果:水平1为(106.3±4.3)U/L(k=2),水平2为(268.1±7.9)U/L(k=2)。结论研制的冰冻人血清α-淀粉酶催化活性浓度候选二级标准物质标示值可靠,均匀性、稳定性较好,具有互换性。     

冰冻人血清尿素和肌酐国家二级标准物质的研制

目的联合使用同位素稀释液相色谱串联质谱及酶学参考方法研制冰冻人血清尿素、肌酐国家二级标准物质, 作为量值溯源的载体。方法参照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》和JJF 1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求对候选物质进行均匀性、稳定性、互换性评价;联合广东省中医院、北京航天总医院、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司、迈克生物股份有限公司、北京利德曼生化股份有限公司、浙江美康生物科技股份有限公司的6家参考实验室采用国际检验医学溯源联合委员会推荐的同位素稀释液相色谱串联质谱法及酶学参考方法共同对标准物质进行定值, 计算不确定度。结果所研制标准物质均匀性的方差分析结果为P>0.05, 稳定性评价t值小于t(0.05)查表时的t值, 互换性评价结果位于4个常规检测系统测量值95%置信区间内, 最终定值结果为尿素:14.7 mmol/L, 扩展不确定度0.3 mmol/L(k=2), 肌酐:313.9 μmol/L, 扩展不确定度14.5 μmol/L(k=2)。结论成功研制的冰冻人血清尿素、肌酐二级标准物质标示值可靠, 均匀性、稳定性较好, 不同检测系...     

血清雌激素检测方法与标准化进展

人体生理性雌激素在血清中的含量很低,但对建立和维持女性第二性征、妊娠等有着不可替代的重要作用。雌激素水平的测定是临床了解女性内分泌功能和诊断内分泌失调相关疾病的重要手段。随着分析技术的不断发展,雌激素在医学实验室的检测方法从放射免疫法,到酶免疫法,化学发光法,发展为气相色谱串联质谱法和液相色谱串联质谱法,这些技术在雌激素检测、相关疾病监测和预后判断等方面发挥了重要作用。     

广州地区0～7岁儿童血清25羟维生素D水平检测结果分析

目的了解广州地区0~7岁儿童血清25羟维生素D[25(OH)D]营养状况。方法选取2018年2月至2019年6月期间体检的2418例0~7岁儿童为研究对象,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测血清25(OH)D₂和25(OH)D3浓度水平,分析性别、年龄、季节等对25(OH)D水平的影响。结果25(OH)D缺乏组113例(占4.7%),不足组534例(占22.1%),处于较低水平的占26.8%;不同性别儿童的25(OH)D水平存在差异,男童25(OH)D水平高于女童,缺乏和不足所占比例低于女童(P<0.05);25(OH)D水平随着年龄的增长呈下降趋势,3~4岁、4~5岁、5~6岁、6~7岁儿童血清25(OH)D缺乏和不足的比例高于0~1岁、1~2岁、2~3岁儿童(P<0.05);不同季节,0~7岁儿童25(OH)D水平夏季最高,冬季最低,冬季25(OH)D缺乏比例高于其他季节,夏季25(OH)D缺乏和不足比例最低(P<0.05);0~1岁儿童25(OH)D2检出率在7岁以下最高(P<0.05),25(OH)D2可有效降低缺乏和不足比例。结论0~7岁儿童25(OH)D水平与性别、年龄、季节有关,应加强对女童、3~6岁男女童及冬季期间补充维生素D,以满足机体需要。同时检测25(OH)D2和25(OH)D3有助于临床精准判断25(OH)D营养状况。     

国际参考实验室能力验证样品的均匀性评价

目的评价国际参考实验室能力验证样品(RELA-A/B)的均匀性是否满足参考实验室比对的要求。方法参照CNASGL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》,用Roche Modular P800生化分析仪测量2014至2016年连续3年RELA-A/B的14个项目,即丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、总胆红素(T-Bil)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)。计算测量结果均值()、标准差(s)和变异系数(CV),用单因素方差分析和SS≤0.3σ准则分析评价其瓶间差异。结果 RELA 2014A和2014B样品AST测量结果 CV2.0%。除RELA 2016B样品CK测量结果 CV2.0%外,其他样品CK测量结果 CV均2%。单因素方差分析结果显示,所有样品中CK测量结果 F均临界值4.39,差异有统计学意义(P0.05);2015B样品ALT和T-Bil,2014A样品Cr测量结果 F均临界值4.39,差异有统计学意义(P0.05);其他测量结果 F均临界值4.39,差异无统计学意义(P0.05)。S_S≤0.3σ准则分析结果显示,所有样品CK测量结果 S_S0.3σ,CK测量结果存在瓶间差异;其他项目测量结果 S_S均≤0.3σ,其他项目测量结果无瓶间差异。结论国际参考实验室能力验证样品CK项目存在瓶间差异,值得注意;其他项目均匀性能满足参考实验室能力验证要求。